Морской коллаж: Коллаж из сухоцветов «Морской» — купить с бесплатной доставкой в Москве
Схема вышивки «Морской коллаж» (№2120559)
Создать новую схему Вышивка крестом • Авторы • Азовскийбриз • Схемы вышивки • Морской коллаж 352×350 крестов (в сантиметрах) DMC (ДМС),
34 солида,
61 бленд,
перемешивание: 75%
Скачать черно-белую схему (*.pdf) Скачать цветную схему(*.pdf) В буквенно-цифровых обозначениях
Оригинал
Предпросмотр
6
1
Создана 26 июн 2020 в 16:22. Эта схема в избранном у Tiriny, Наталья141078, dyaknad1970, sneshanamm и еще у 2 авторов.
Комментарии к схеме вышивки «Морской коллаж» (№2120559)
tonatetona1, 26 июн 2020 в 18:31.+++
sunnγ05, 27 июн 2020 в 20:25.+++
Оставить комментарий
Схемы вышивки, похожие на «Морской коллаж» (№2120559) по сюжету
Katrinbmv,8 ноя 2012 в 01:42. №135082
300×235 крестов.
Гамма, 69 цветов.
Теги: море, маяк, лодка. Татьяна90,
3 мар 2013 в 07:05. Морской бриз
198×300 крестов.
DMC (ДМС), 70 цветов.
Теги: пара, море, романтика, пляж. Makka,
24 мар 2013 в 23:15. Морской берег
200×252 креста.
Гамма, 59 цветов.
Теги: песок, пляж, море. yelenaazia,
10 сен 2013 в 23:20. Китайская джонка на закате
275×172 креста.
Гамма, 60 цветов.
Теги: азия, морской пейзаж, лодка, китай, восток.
Фотообои «Коллаж Морской отдых» №3250pw на заказ под свой размер
Фотообои «Коллаж Морской отдых» №3250pw на заказ под свой размер — picwalls.ruЗагрузите свое
изображение
cloud_upload
Ваше сообщение
отправлено
- Фотообои
- Обои
По типу помещения
if (count($wallpapers_by_material)): ?> endif; ?>Подбор по цвету
По типу помещения 0 руб
Цена
0 руб
0 руб
Непонятно как будет смотреться у меня
Непонятно как будет смотреться у меня. Заказать бесплатный макет
Укажите размер для фотообоев
Выберите материал
Папирус АКЦИЯ ★★★★★★★★★★
740 руб/м2keyboard_arrow_right
?
★★★★★★★★★★
390 руб/м2
?
★★★★★
★★★★★
740 руб/м2?
★★★★★
★★★★★
940 руб/м2
Виниловые на флизелиновой основе
Мелкая нить?
★★★★★
★★★★★
1400 руб/м2
Песок?
★★★★★
★★★★★
1190 руб/м2
Прованс?
★★★★★
★★★★★
1200 руб/м2
Декоративная штукатурка?
★★★★★
★★★★★
1440 руб/м2
Роспись?
★★★★★
★★★★★
1540 руб/м2
Папирус★★★★★
★★★★★
740 руб/м2
ДополнительноОтзывы
Показать больше Благодарим за подписку!
zabtestМорской коллаж с объектами стиля морской жизни. • наклейки на стену круг, имеет, триггер
становите кадр, перемещая его мышью с нажатой левой кнопкой. Если Вы используете сенсорные устройства, переместите выделенный фрагмент графики.
Наклейка:
Морской коллаж с объектами стиля морской жизни..
Автор: ©
Номер фотографии:
#118798073
другие темы:
круг, имеет, триггер, морская звезда, оболочка, раковины, белый, коллаж, Алло.
Посмотреть в комнате:
Классическая наклейка
Классическую наклейку печатают на самоклеющейся пленке. С помощью наших наклеек можно быстро изменить надоевший внешний вид стен, мебели, дверей, стекол, ноутбуков и бытовой техники. Имеется возможность вырезать сюжет по контуру, для этого просим обращаться к нам.
- ✓ Эластичная и долговечная
- ✓ Молниеносное изменение аранжировки интерьеров
- ✓ Печать непрозрачная (белые элементы сюжета остаются видимыми)
Максимальная ширина полосы: 133 см. Если размер превышает максимальную ширину, распечатка будет состоять из нескольких равных листов
Применение: гладкие, ровные стены и гладкие поверхности мебели, стекла или бытовой техники
Способ очистки: влажной салфеткой
Отделка: полуматовая
Витражная наклейка
Витражные наклейки печатают на прозрачной пленке, пропускающей свет, благодаря чему достигается эффект цветного стекла. Рекомендуется как украшение окон, застекленных дверей, стеклянных частей мебели (шкафов, буфетов, столов), а также для украшения гладких одноцветных стен. Возможность вырезать наклейку по контуру. Для этого просим обращаться в отдел обслуживания клиентов..
- ✓ Прозрачное украшение
- ✓ Эластичная и долговечная
- ✓ Молниеносное изменение аранжировки интерьеров
- ✓ Прозрачное украшение – белые элементы сюжета совершенно прозрачны
Максимальная ширина полосы: 133 см. Если размер превышает максимальную ширину, распечатка будет состоять из нескольких равных листов
Применение: гладкие, ровные стены, стеклянные или пластиковые поверхности
Способ очистки: влажной салфеткой
Отделка: глянцевая
Опция FrontStick: Дополнительной опцией, доступной по заказу, является нанесение клея со стороны печати. Такое украшение выглядит фантастически при заклеивании стеклянной поверхности изнутри. Если Вы выберете это – свяжитесь с нами. Опция оплачивается дополнительно
Магнитная наклейка
Магнитная наклейка изготовлена на магнитной основе. Это обеспечивает возможность ее свободной установки и удаления. Магнитными наклейками можно украсить металлические поверхности (например, бытовых приборов, холодильников), не пользуясь клеем или клейкой лентой. Эластичный материал облегчает наложение графического украшения.
- ✓ Многократное использование
- ✓ Установка без клея или клейкой ленты
- ✓ Эластичная и долговечная
- ✓ Молниеносное изменение аранжировки интерьеров
Максимальная ширина полосы: 98 см. Если размер превышает максимальную ширину, распечатка будет состоять из нескольких равных листов
Применение: украшение бытовой техники, металлических поверхностей
Способ очистки: влажной салфеткой
Отделка: полуматовая
дальшеСпрятать
Эта кнопка позволяет вращать выбранный размер и заменить ширину с высотой.
Морской коллаж в фотошоп
Лето осталось позади, а порой хочется снова погрузиться в теплую морскую воду. Почему бы не создать для себя эдакую иллюзию в программе Фотошоп? Берем фотографию парня, помещаем его частично, частично оставляем поверх воды. Для этого нам потребуется изображение парня, изображение дна и изображение на котором вода как бы срезана и пейзаж. Открываем изображения.
Можно создать новый файл и вставить в него все изображения, а можно использовать одно из изображений за основное. Изображение парня отделяем от фона: инструментом «Лассо» обводим контуры тела и вырезаем. Когда все слои с изображениями вставлены, то инструментом «Ластик» нужно стереть их грани, чтобы не те не просвечивали под изображениями. Итак, набросок выглядит так.
Сперва располагаем пейзаж с небом, на него накладываем срез воды, сверху изображение с песком и поверх изображение мужчины. Теперь делаем две копии слоя с мужчиной и одну копию слоя среза воды: становимся левой кнопкой мыши на миниатюру нужного слоя в окне слоев и во вкладке «Слои» выбираем «Создать дубликат слоя».
Снимаем видимость слоя с двух изображений мужчины: глазик у слоя в окне слоев, и выравниваем его цветовую тональность, чтобы она соответствовала общей тональности коллажа, то есть зелено-синие тона. В данном примере изменим у каждого из трех слоев с мужчиной тональность с помощью следующей функции: вкладка «Изображение», далее «Коррекция» и далее «Цветовой баланс». В открывшемся окошке придаем этому слою с мужчиной зеленый оттенок, который сочетается с дном под его ногами.
Снимаем с этого слоя видимость и устанавливаем видимость на втором слое с изображением мужчины, которому мы также изменяем тональность, но так чтобы она сочеталась с тоном воды.
Снимаем видимость с этого слоя и устанавливаем её на третьем слое с мужчиной и придаем этому слою тон, сочетаемый с тоном пейзажа. Изменяем яркость слоя: вкладка «Изображение» — «Коррекция» — «Яркость/Контрастность».
Возвращаем видимость всем слоям с мужчиной и аккуратно с помощью инструмента «Ластик» стираем с верхнего слоя (№ 3) с мужчиной ноги и нижнюю часть туловища, оставляя только ту часть тела, которая находится над водой. Со второго слоя с мужчиной (№ 2) снимаем верх мужчины, то есть ту часть, что находится над водой и нижнюю часть ног, которая должна находиться на песке. С первого слоя (№ 1) с мужчиной стираем все кроме самой нижней части ног, которая находится на песке.
Слои с мужчиной не должны стираться так, чтобы между ними был просвет, то есть должны заходить один на другой.
Все слои с мужчиной соединяем в один: правой кнопкой мыши нажимаем по слою находящемуся сверху и выбираем в контекстном меню «Объединить с предыдущим».
Теперь ставим на самый верх слой со срезом воды. Этому слою со срезом воды создаем слой-маску. Для этого нужно нажать на иконку, как показано на рисунке.
С помощью инструмента «Кисть» черного цвета закрашиваем в окошке слоя маски ту часть изображения, которая находится над кромкой воды, чтобы линия кромки оставалась четкой.
Создаем дубликат слоя со срезом с водой и для этого слоя с водой, что оказался ниже задаем режим наложения слоев «Мягкий свет», а на том слое с водой, что оказался выше в слое маске кистью черного цвета с мягкими краями стираем слегка низ, чтобы было видно дно с песочком.
Снова создаем копию слоя с водой и среднему из слоев с водой изменяем режим наложения на «Замена светлым», а слою, что находится выше всех на слое-маске черной кистью зарисовываем ту часть, где находится мужчина, но не достигая кромки с водой.
Возвращаемся на слой с мужчиной и с помощью инструмента «Размытие» искажаем ту часть тела, которая находится под водой. Для того, чтобы максимально справиться с задачей нужно в параметрах инструмента задать диаметр и жесткость побольше.
Создаем поверх всех слоев корректирующий слой «Цветовой баланс» и выравниваем общую тональность коллажа.
Контуры тела мужчины обрабатываем инструментом «Размытие» маленького диаметра и жесткостью 0%. Далее создаем корректирующий слой «Яркость».
Добавляем завершающие штрихи в виде кистей имитирующих пузыри под водой.
Создаем новый слой непосредственно над слоем с мужчиной: вкладка «Слои» — «Новый» — «Слой» и кистью белого, зеленого и голубого цвета рисуем пузыри. Также добавляем новые слои за слоем с мужчиной и ещё один слой над слоями с водой, чтобы подрисовать кистью брызги над кромкой воды.
Дорабатываем коллаж: придаем тени и свет мужчине на собственное усмотрение, для этого копируем слой с мужчиной и задаем этому слою режим наложения «Экран» и инструментом «Ластик» стираем ту часть тела, что находится под водой и частично с той стороны, где должна приходиться тень, то есть придаем эффект солнечного света. Дополняем коллаж обводкой. Также можно добавить световое пятно: создаем новый слой, берем кисть с мягкими краями и ставим большое пятно яркого цвета в области воды. Этому слою задаем режим наложения «Разделить».
Ссылки на изображение:
- Морское дно
- Морская вода
- Мужчина
- Небо
- Кисть «пузырьки«
- Кисть «уровень воды»
Фотообои Коллаж Морской отдых арт. 3250, коллекция Море
Оформление заказа
1. Выберите размер 2. Выберите материалЖаккард™
888 грн
Видеообзор текстур
Гладь★★★★★
★★★★★
195 грн/м2
3. Контактные данныеРассрочка при заказе на сумму от 300 грн.
Фреска Морской коллаж | Фотообои на заказ
«Гладкие» АКЦИЯ 775 р/м2 вместо 1290р !
Стоимость материала: 775₽/м²
Ширина материала: 103 см. см.
Длинна материала: Любая см.
Плотность материала: 200 гр/м²
Основа материала: Виниловые на флизелиновой основе
«Бесшовные песок» АКЦИЯ 1190р/м2 вместо 1990р !
Стоимость материала: 1 190₽/м²
Ширина материала: Любая см.
Длинна материала: Любая см.
Плотность материала: 250 гр/м²
Основа материала: Полиэстер
Стоимость материала: Не задано/м²
Стоимость материала: Не задано/м²
«Самоклеящиеся гладкие» 690 р/м2
Стоимость материала: 690₽/м²
Ширина материала: 105 см. см.
Длинна материала: Любая см.
Плотность материала: 150 гр/м²
Основа материала: Винил
«Фреска» АКЦИЯ 775р/м2 вместо 1290р !
Стоимость материала: 775₽/м²
Ширина материала: 103 см. см.
Длинна материала: Любая см.
Плотность материала: 300 гр/м²
Основа материала: Виниловые на флизелиновой основе
Стоимость материала: Не задано/м²
Исследование хронической оральной токсичности препарата пептидов морского коллагена из кожи кеты (Oncorhynchus keta) с использованием крысы Sprague-Dawley
Abstract
Из-за повышенного потребления препарата морских коллагеновых пептидов (MCP) в качестве ингредиентов в функциональных продуктах питания и фармацевтических препаратах, необходимо было выполнить требования безопасности в форме оценки хронической токсичности при пероральном приеме. Чтобы определить хроническую пероральную токсичность MCP, было проведено 24-месячное исследование кормления MCP.Крысам Sprague-Dawley (S-D) в возрасте четырех недель обоих полов вводили MCP при концентрациях в рационе 0%, 2,25%, 4,5%, 9% и 18% (вес / вес). Фактическое потребление пищи и вес тела отдельных животных регистрировали периодически до умерщвления. Были собраны образцы крови и мочи для оценки химического состава сыворотки и анализа мочи. На протяжении всего экспериментального периода не было токсикологически значимой разницы между животными, получавшими носитель, и животными, получавшими МСР, в отношении выживаемости, массы тела, потребления пищи, анализа мочи, параметров клинической биохимии и относительной массы органов у обоих полов.Более того, частота неопухолевых поражений в группах, получавших MCP, не увеличилась значительно по сравнению с контрольной группой. В настоящих экспериментальных условиях не наблюдалось более высокого риска хронических токсических эффектов у крыс, получавших MCP, при концентрациях в рационе 2,25%, 4,5%, 9% и 18% (вес / вес), чем у крыс, получавших базовую диету для грызунов. .
Ключевые слова: пептидов морского коллагена, хроническая пероральная токсичность, крысы Sprague-Dawley
1. Введение
В последние годы было признано, что биоактивные пептиды, полученные из пищевых белков растений и животных, могут оказывать широкий спектр физиологических или гормоноподобная биологическая активность, превышающая их пищевую ценность [1].С морскими видами, составляющими почти половину всего глобального биоразнообразия, море предлагает огромные ресурсы для изучения морских биоактивных пептидов [2,3]. Препарат морских коллагеновых пептидов (MCP) представляет собой низкомолекулярный пептид, ферментативно гидролизованный из тканей коллагена морских рыб. Коллагеновые ткани, в том числе кожа, кости и чешуя, составляют 30% отходов переработки морской рыбы [4]. Было обнаружено, что как специфические белковые фрагменты МСР обладают широким спектром функциональных и биологических свойств, включая антиоксидантное [4,5], антигипертензивное [6,7] и противовозрастное действие [8].Эти биоактивные свойства или возможности для улучшения здоровья привели к использованию пептидов морского коллагена в качестве ингредиентов функциональных пищевых продуктов или фармацевтических препаратов [2,3].
Поскольку пептиды морского коллагена представляют собой модифицированные натуральные продукты, существуют требования безопасности для проведения исследований зависимости реакции от дозы на животных и клинических испытаний для оценки их переносимости и потенциальных хронических побочных эффектов, которые могут быть вызваны самими пептидами коллагена или их побочными эффектами. продукты при переработке [1].Кроме того, для пептидов коллагена из морской рыбы существуют значительные различия в физико-химических свойствах и аминокислотном составе по сравнению с пептидами коллагена из домашнего скота, такого как корова и свинья [9,10]. Следовательно, предыдущие данные оценки безопасности пептидов коллагена от домашнего скота все еще недостаточны для оценки профилей безопасности пептидов морского коллагена.
В настоящее время отсутствуют данные о пероральной хронической токсичности пептидов морского коллагена in vivo .Учитывая повышенное потребление пептидов морского коллагена в качестве ингредиентов в пищевых продуктах и фармацевтических препаратах, оценка потенциальной хронической токсичности этого соединения имеет важное значение [11,12]. Таким образом, 24-месячное диетическое исследование, проведенное на крысах Sprague-Dawley (S-D), получавших разные уровни MCP, было проведено для оценки профилей хронической пероральной токсичности MCP.
2. Результаты
2.1. Показатели выживаемости
Ни в одной из групп, получавших препарат пептидов морского коллагена (MCP) в течение 12 месяцев, не было обнаружено смертности.В 24-месячном исследовании показатели выживаемости 0%, 2,25%, 4,5%, 9% и 18% групп, получавших MCP, составили 55%, 70%, 55%, 60% и 60% для женщин и 45%. , 65%, 65%, 70% и 60% для мужчин соответственно. Статистически значимой разницы не было отмечено в анализе выживаемости между контрольной группой и группами, получавшими MCP ( P > 0,05) ().
2.2. Общее состояние, масса тела, эффективность питания, потребление пищи и потребление MCP
Не было заметной разницы в общих условиях между группами, получавшими носитель и получавшими MCP.Как показано в, наблюдалась возрастная тенденция к увеличению массы тела той же группы. Между тем, прирост массы тела значительно снизился после 18-месячного лечения MCP. Что касается потребления продуктов питания, то в каждой группе наблюдалась заметная возрастная тенденция к снижению; в то время как никаких дозозависимых изменений в потреблении пищи не было обнаружено ни у одного пола, когда животных лечили MCP в течение 12 или 24 месяцев.
Рисунок 1
Данные о месячной выживаемости крыс Sprague-Dawley (S-D), получавших препарат пептидов морского коллагена (MCP) в течение 24 месяцев.Значения были проанализированы на предмет статистической значимости различий с помощью анализа выживаемости Каплана-Мейера. Все P > 0,05 по сравнению с контрольными значениями.
Рисунок 2
Кривые роста крыс S-D, получавших препарат пептидов морского коллагена (MCP) в течение 24 месяцев. Уровни массы тела выражали как средние значения и анализировали с помощью теста однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA). Множественное сравнение теста Даннета t использовали для оценки разницы между группами, получавшими МСР, и контрольной группой.Все P > 0,05 по сравнению с контрольными значениями.
Более того, эффективность питания в той же группе с возрастом значительно снизилась (). На протяжении всего экспериментального периода, поскольку не было обнаружено статистической разницы или дозозависимой тенденции массы тела и эффективности питания между контрольной группой и группами, получавшими МСР, у обоих полов, фактическое суточное потребление тестируемого вещества показало хорошую корреляцию с его диетическими концентрациями. в разных группах. В течение 24 месяцев лечения прием МКП 2.25%, 4,5%, 9% и 18% групп, получавших MCP, оценивались как 1,063, 2,216, 4,609 и 8,586 г / кг · мт / день для женщин и 0,907, 1,798, 3,418, 6,658 г / кг · мт / день для мужчин соответственно ().
Таблица 1
Пищевая эффективность крыс S-D, получавших препарат пептидов морского коллагена (MCP) в течение 24 месяцев.
Пол | MCP (%) | n | 6 месяцев Пищевая эффективность (г / 100 г) | n | 12 месяцев Пищевая эффективность (г / 100 г) | n | 18 месяцев Пищевая эффективность (г / 100 г) | n | 24 месяца Пищевая эффективность (г / 100 г) |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Женский | 0 | 20 | 3.54 ± 1,41 a | 20 | 2,04 ± 5,80 | 16 | −0,86 ± 5,82 | 10 | −0,02 ± 0,08 |
2,25 | 20 | 2,21 ± 1,50 | 20 | 2,74 ± 6,57 | 19 | 0,42 ± 3,15 | 10 | 0,04 ± 0,06 | |
4,5 | 20 | 2,74 ± 1,98 | 20 | 4,04 ± 2,49 | 18 | — 0.35 ± 2,49 | 10 | 0,03 ± 0,05 | |
9 | 20 | 3,53 ± 2,24 | 20 | 3,50 ± 5,11 | 19 | 0,99 ± 2,22 | 10 | 0,01 ± 0,04 | |
18 | 20 | 2,74 ± 3,14 | 20 | 2,49 ± 1,78 | 17 | 0,39 ± 2,32 | 10 | 0,04 ± 0,05 | |
Мужской | 0 | 20 | 2.13 ± 1,46 | 20 | 2,11 ± 3,00 | 18 | 0,76 ± 1,46 | 9 | -0,12 ± 0,30 |
2,25 | 20 | 3,05 ± 2,40 | 20 | 4,48 ± 1,66 | 19 | 0,57 ± 1,57 | 10 | −0,09 ± 0,14 | |
4,5 | 20 | 2,78 ± 2,86 | 20 | 2,79 ± 2,45 | 19 | 1.55 ± 2,82 | 10 | 0,00 ± 0,02 | |
9 | 20 | 3,33 ± 1,75 | 20 | 3,02 ± 2,44 | 18 | −0,50 ± 2,57 | 10 | −0,02 ± 0,07 | |
18 | 20 | 3,97 ± 2,06 | 20 | 3,54 ± 3,18 | 18 | 0,46 ± 1,53 | 10 | −0,05 ± 0,06 |
Таблица 2
Потребление пищи и потребление препарата пептидов морского коллагена (MCP) крысам SD в течение 12 месяцев и 24 месяцев.
Пол | MCP (%) | n | 12 месяцев | n | 24 месяца | ||
---|---|---|---|---|---|---|---|
Расход продуктов питания a (г / кг · ч / м / день) | Потребление MCP b (г / кг · веса тела / день) | Потребление пищи a (г / кг · веса тела / день) | Потребление MCP b (г / кг · веса тела / день) | ||||
Женский | 0 | 20 | 65.4 ± 5,7 | 0,000 | 10 | 57,0 ± 3,9 | 0,000 |
2,25 | 20 | 63,7 ± 8,9 | 1,290 | 10 | 52,5 ± 4,1 | 1,063 | |
4,5 | 20 | 65,2 ± 9,2 | 2,641 | 10 | 54,7 ± 7,7 | 2,216 | |
9 | 20 | 61,4 ± 6,2 | 4.973 | 10 | 56,9 ± 4,9 | 4,609 | |
18 | 20 | 62,7 ± 7,2 | 10,157 | 10 | 53,0 ± 4,2 | 8,586 | |
Мужской | 0 | 20 | 51,7 ± 4,9 | 0,000 | 9 | 43,7 ± 3,9 | 0,000 |
2,25 | 20 | 51,3 ± 4,6 | 1.039 | 10 | 44.8 ± 3,2 | 0,907 | |
4,5 | 20 | 50,6 ± 5,8 | 2,049 | 10 | 44,4 ± 3,8 | 1,798 | |
9 | 20 | 50,7 ± 5,8 | 4,107 | 10 | 42,2 ± 3,4 | 3,418 | |
18 | 20 | 48,8 ± 3,6 | 7,906 | 10 | 41,1 ± 3,5 | 6.658 |
2.3. Клинические биохимические параметры
Как показано на фигуре, не было обнаружено никаких дозозависимых изменений или статистических различий в сывороточных уровнях аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), альбумина (АЛБ), общего белка (ТР) и азота мочевины крови. (АМК) после 12-месячного и 24-месячного лечения. Когда животных лечили MCP в течение 24 месяцев, уровни креатинина (CR) незначительно увеличивались в 9% и 18% группах самцов по сравнению с контрольной группой ( P > 0.05). Кроме того, значительное увеличение уровня ТП в сыворотке наблюдалось в группе мужчин, получавших 9% МСР ( P <0,05), тогда как в группах женщин, получавших МСР , по сравнению с контрольной группой , не было обнаружено значительного увеличения уровня ТП. В то время как повышение уровня ТП в сыворотке в группе мужчин, получавших 9% МСР, считалось случайным и не связанным с лечением из-за отсутствия значительной дозовой зависимости.
После 12 месяцев лечения значительно сниженные уровни триглицеридов (ТГ) в сыворотке крови наблюдались у 2 пациентов.25% и 4,5% женских групп, получавших МСР, по сравнению с женщинами контрольной группы ( P <0,05), тогда как сывороточные уровни ТГ в мужских группах существенно не различались между контрольной и обработанной МСР группами (P > 0,05). ). Более того, не было никакого эффекта, связанного с MCP, на сывороточные уровни общего холестерина (TCHOL) у обоих полов ( P > 0,05). После 24 месяцев лечения МСР значительно более низкие уровни ТГ в сыворотке наблюдались в группах женщин, получавших 4,5% и 9%, а также во всех группах мужчин, получавших МСР, по сравнению с контрольной группой ( P <0.05). Аналогичным образом, уровни TCHOL в сыворотке в группах мужчин, получавших 4,5%, 9% и 18% МСР, заметно снизились по сравнению с контрольной группой мужчин ( P <0,05), в то время как у женщин значимых межгрупповых различий не наблюдалось. группы ( P > 0,05). Кроме того, по данным оценки за 12 месяцев и 24 месяца не было выявлено значительной разницы в уровнях глюкозы в сыворотке (GLU) между контрольной и получавшей MCP группами (2).
2.4. Общий анализ мочи
В параметрах анализа мочи и микроскопическом исследовании осадка мочи не было обнаружено связанного с MCP эффекта.Объем мочи, pH и удельный вес были в пределах нормы (данные не показаны).
2,5. Относительный вес органов
Вариабельность веса органов была связана с наличием общих результатов, таких как масса, атрофия, опухоль, фиброз, увеличение площади и области гиперемии [13]. После 24 месяцев приема МСР не было выявлено значительных связанных с МСР различий по относительной массе органов мозга, сердца, легких, печени, селезенки, почек, надпочечников, семенников и яичников ().
2.6. Гистопатологическое исследование
При гистологическом исследовании данные неопухолевых поражений представлены в. Большинство поражений, связанных с воспалительными изменениями и возрастными дегенерациями (фиброз, эмфизема, атрофия и гиперплазия), были обнаружены во всех группах. По сравнению с контрольной группой, частота жировой вакуолизации гепатоцитов заметно снизилась в группах обоих полов, получавших МСР, при этом значимости не было ( P > 0,05). Никакого другого значительного увеличения частоты патологических изменений или поражений в группах, получавших MCP, по сравнению с контрольной группой не наблюдалось ( P > 0.05).
Таблица 3
Биохимические параметры сыворотки крови крыс S-D, получавших препарат пептидов морского коллагена (MCP) в течение 12 месяцев и 24 месяцев.
Месяцы | Параметр | Женский MCP (%) | Мужской MCP (%) | |||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
0% | 2,25% | 4,5% | 9% | 18% | 0 % | 2,25% | 4,5% | 9% | 18% | |||
n | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | ||
12 | ALT (Е / л) | 61.80 ± 12,17 а | 59,95 ± 16,43 | 67,79 ± 18,09 | 70,27 ± 11,39 | 68,93 ± 11,59 | 63,15 ± 16,78 | 58,40 ± 9,77 | 65,36 ± 14,71 | 58,07 ± 19,87 16,88 | ||
АСТ (Ед / л) | 126,15 ± 38,96 | 137,70 ± 31,27 | 130,38 ± 28,35 | 134,67 ± 27,07 | 135,00 ± 43,59 | 151,10 ± 45,51 | 134.13 ± 37,31 | 163,00 ± 42,07 | 125,50 ± 45,85 | 123,64 ± 34,70 | ||
ALB (г / л) | 37,96 ± 5,24 | 38,66 ± 2,41 | 39,49 ± 3,94 | 39,65 ± 3,12 | 39,54 ± 3,65 | 31,64 ± 2,03 | 31,55 ± 1,48 | 31,20 ± 2,88 | 29,37 ± 3,26 | 31,08 ± 2,01 | ||
TP (г / л) | 80,00 ± 4,62 | 77,70 ± 5.11 | 80,81 ± 3,99 | 82,38 ± 5,39 | 81,20 ± 5,99 | 70,00 ± 2,81 | 68,06 ± 6,09 | 69,50 ± 4,45 | 65,87 ± 6,33 | 67,86 ± 2,71 | ||
BUN (ммоль / л ) | 9,36 ± 2,57 | 8,14 ± 1,71 | 9,43 ± 1,82 | 9,93 ± 1,87 | 9,41 ± 1,38 | 6,09 ± 1,05 | 5,56 ± 0,87 | 6,73 ± 1,68 | 6,90 ± 2,68 | 5.86 ± 0,69 | ||
CR (мкмоль / л) | 74,85 ± 13,63 | 78,65 ± 10,80 | 75,19 ± 11,86 | 83,07 ± 12,60 | 71,60 ± 12,11 | 68,85 ± 4,90 | 67,25 ± 3,00 | 73,86 ± 10,27 | 75,67 ± 16,39 | 68,57 ± 3,74 | ||
TCHOL (ммоль / л) | 2,57 ± 1,63 | 2,42 ± 0,56 | 2,43 ± 1,01 | 2,52 ± 0,39 | 2 .51 ± 1,00 | 2,95 ± 1,44 | 2,31 ± 0,33 | 2,54 ± 1,36 | 2,67 ± 0,78 | 2,39 ± 0,67 | ||
ТГ (ммоль / л) | 4,14 ± 2,09 | 2,47 ± 1,64 * | 2,87 ± 2,11 * | 3,09 ± 1,65 | 3,22 ± 1,48 | 2,45 ± 1,35 | 2,03 ± 1,01 | 1,81 ± 1,01 | 2,13 ± 1,54 | 2,03 ± 0,79 | ||
GLU (ммоль / L) | 6.27 ± 0,69 | 6,27 ± 0,52 | 6,50 ± 0,37 | 6,66 ± 0,44 | 6,57 ± 0,40 | 6,07 ± 1,65 | 6,25 ± 0,41 | 6,04 ± 0,62 | 6,24 ± 0,31 | 6,39 ± 0,40 | ||
24 | n | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 9 | 10 | 10 | 10 | 10 | |
ALT (U / L) | 41.89 ± 13,93 | 41,30 ± 5,95 | 45,30 ± 12,28 | 43,17 ± 7,14 | 45,63 ± 15,77 | 43,50 ± 12,99 | 41,67 ± 10,97 | 41,25 ± 7,76 | 41,89 ± 8,34 | 43,50 ± 17,13 | ||
АСТ (Ед / л) | 152,11 ± 26,94 | 181,70 ± 47,22 | 162,70 ± 30,79 | 153,17 ± 40,59 | 166,13 ± 57,35 | 164,60 ± 63,55 | 132,56 ± 43,02 | 163.25 ± 37,21 | 160,89 ± 28,94 | 133,71 ± 50,51 | ||
ALB (г / л) | 37,39 ± 2,65 | 37,38 ± 2,64 | 35,00 ± 2,12 | 35,07 ± 1,73 | 35,94 ± 1,57 | 28,65 ± 2,47 | 28,19 ± 2,81 | 29,20 ± 0,82 | 29,29 ± 2,82 | 29,53 ± 1,45 | ||
TP (г / л) | 75,11 ± 7,46 | 78,33 ± 5,10 | 73,80 ± 6.07 | 76,50 ± 4,97 | 74,50 ± 3,51 | 63,00 ± 4,55 | 64,11 ± 4,70 | 61,75 ± 3,86 | 69,44 ± 5,81 * | 67,43 ± 2,57 | ||
BUN (ммоль / л) | 6,76 ± 1,55 | 6,41 ± 1,35 | 6,64 ± 1,59 | 6,08 ± 2,15 | 6,21 ± 0,72 | 6,05 ± 1,46 | 7,01 ± 4,80 | 5,08 ± 0,83 | 5,83 ± 0,87 | 7,64 ± 4,88 | ||
CR (мкмоль / л) | 67.22 ± 5,14 | 71,10 ± 5,32 | 66,90 ± 5,02 | 72,00 ± 5,34 | 71,25 ± 5,50 | 56,90 ± 6,45 | 58,43 ± 4,12 | 53,25 ± 2,63 | 61,10 ± 4,62 | 61,30 ± 3,01 | ||
TCHOL (ммоль / л) | 2,61 ± 0,58 | 2,49 ± 0,42 | 2,48 ± 0,35 | 2,79 ± 0,37 | 2,48 ± 0,45 | 4,02 ± 1,32 | 3,49 ± 0,76 | 2,47 ± 0,27 * | 2.98 ± 0,58 * | 3,08 ± 0,73 * | ||
ТГ (ммоль / л) | 4,33 ± 1,37 | 3,63 ± 0,88 | 2,48 ± 1,11 * | 2,96 ± 1,34 * | 3,42 ± 1,24 | 3,99 ± 2,07 | 2,67 ± 0,85 * | 2,21 ± 0,86 * | 2,31 ± 1,02 * | 2,35 ± 0,87 * | ||
GLU (ммоль / л) | 5,27 ± 0,46 | 5,06 ± 1,09 | 4,73 ± 0,82 | 5,58 ± 0.43 | 4,94 ± 1,15 | 4,82 ± 0,65 | 4,63 ± 0,93 | 5,18 ± 0,57 | 5,53 ± 0,69 | 5,37 ± 0,93 |
Таблица 4
Относительный вес органов крыс SD, получавших морской коллаген препарат пептидов (МСР) в течение 24 месяцев.
Пол | MCP (%) | n | Мозг (г / 100 г · массы тела) | Сердце (г / 100 г · массы тела) | Легкие (г / 100 г · массы тела) | Печень (г / 100 г · мт) | Селезенка (г / 100 г · мт) | Почки (г / 100 г · мт) | Надпочечники (г / 100 г · мт) | Яичники (г / 100 г · мт) | Яички (г / 100 г · мт) |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Самка | 0 | 11 | 0.433 ± 0,195 a | 0,320 ± 0,070 | 0,354 ± 0,066 | 2,808 ± 0,819 | 0,196 ± 0,232 | 0,665 ± 0,182 | 0,034 ± 0,012 | 0,020 ± 0,010 | |
2,25 | 14 | 0,450 ± 0,157 | 0,404 ± 0,096 | 0,367 ± 0,139 | 2,638 ± 0,880 | 0,114 ± 0,059 | 0,606 ± 0,276 | 0,030 ± 0,018 | 0,026 ± 0,010 | ||
4.5 | 11 | 0,519 ± 0,275 | 0,381 ± 0,118 | 0,351 ± 0,110 | 2,387 ± 0,609 | 0,115 ± 0,046 | 0,629 ± 0,253 | 0,025 ± 0,006 | 0,019 ± 0,008 | ||
9 | 12 | 0,494 ± 0,240 | 0,430 ± 0,035 | 0,412 ± 0,094 | 2,573 ± 0,459 | 0,111 ± 0,016 | 0,734 ± 0,290 | 0,032 ± 0,007 | 0,026 ± 0.002 | ||
18 | 12 | 0,416 ± 0,099 | 0,350 ± 0,071 | 0,348 ± 0,094 | 2,423 ± 0,849 | 0,155 ± 0,093 | 0,659 ± 0,177 | 0,031 ± 0,007 | 0,023 ± 0,016 | ||
Мужской | 0 | 9 | 0,281 ± 0,082 | 0,410 ± 0,059 | 0,391 ± 0,123 | 3,218 ± 1,216 | 0,129 ± 0,037 | 0.726 ± 0,214 | 0,022 ± 0,009 | 0,276 ± 0,067 | |
2,25 | 13 | 0,318 ± 0,046 | 0,433 ± 0,099 | 0,441 ± 0,079 | 2,761 ± 0,850 | 0,134 ± 0,040 | 0,770 ± 0,246 | 0,016 ± 0,011 | 0,384 ± 0,110 | ||
4,5 | 13 | 0,369 ± 0,150 | 0,471 ± 0,079 | 0,425 ± 0,028 | 2.468 ± 0,727 | 0,135 ± 0,087 | 0,637 ± 0,162 | 0,017 ± 0,013 | 0,397 ± 0,135 | ||
9 | 14 | 0,338 ± 0,099 | 0,490 ± 0,110 | 0,406 ± 0,111 | 2,870 ± 0,877 | 0,118 ± 0,072 | 0,762 ± 0,431 | 0,019 ± 0,008 | 0,380 ± 0,090 | ||
18 | 12 | 0,382 ± 0,133 | 0,465 ± 0.088 | 0,412 ± 0,090 | 3,199 ± 0,642 | 0,151 ± 0,052 | 0,833 ± 0,275 | 0,015 ± 0,004 | 0,301 ± 0,098 |
Таблица 5
Ненеопластические поражения у крыс SD, пролеченных с препаратом пептидов морского коллагена (MCP) в течение 24 месяцев.
Участки | Поражения | Женский МКП (%) | Мужской МКП (%) | ||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
0 | 2,25 | 4.5 | 9 | 18 | 0 | 2,25 | 4,5 | 9 | 18 | ||
( n = 20) | ( n = 20) | ( n = 20 ) | ( n = 20) | ( n = 20) | ( n = 20) | ( n = 20) | ( n = 20) | ( n = 20) | ( n = 20) | ||
Мозг | Сжатие | 2:00 AM | 2 | 2 | 1 | 1 | 2 | 1 | 1 | 2 | 2 |
Гипофиз | Гиперплазия дистальной части | 4 | 3 | 2 | 2 | 3 | 4 | 3 | 2 | 2 | 3 |
Щитовидная железа | Cc гиперплазия эл. | 2 | 3 | 4 | 3 | 2 | 2 | 3 | |||
Очаговый миокардит | 2 | 0 | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | |
Легкое | Очаги воспалительных клеток | 4 | 2 | 2 | 1 | 2 | 3 | 2 | 1 | 2 | 2 |
Эмфизема | 5 | 3 | 3 | 3 | 2 | 5 | 3 | 2 | 2 90 096 | 3 | |
Печень | Вакуолизация гепатоцитов | 8 | 5 | 3 | 4 | 5 | 7 | 3 | 2 | 2 | 4 |
Фиброз | 1 | 1 | 0 | 2 | 1 | 1 | 0 | 1 | 2 | 0 | |
Желудок | Кишечная метаплазия | 1 | 0 | 1 | 0 | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 | 1 |
Кишечник | Дивертикул | 0 | 1 | 0 | 1 | 1 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Селезенка | Повышение экстрамедуллярного кроветворения | 2 | 0 | 1900 96 | 1 | 0 | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 |
Почка | Фиброз | 2 | 1 | 0 | 1 | 0 | 1 | 2 | 1 | 0 | 1 |
Очаги воспалительных клеток, клубочковые | 7 | 6 | 6 | 5 | 4 | 4 | 3 | 5 | 5 | 3 | |
Очаги воспалительных клеток, таз | 1 | 0 | 0 | 1 | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 | 1 | |
Гиперплазия надпочечников | , кора | 2 | 2 | 0 | 0 | 1 | 2 | 1 | 1 | 0 | 1 |
Гиперплазия мозгового вещества | 2 | 0 | 1 | 2 | 1 | 2 | 1 | 0 | 2 | 2 | |
Мочевой пузырь | Гиперплазия переходных клеток | 0 | 0 | 1 | 1 | 1 | 2 | 0 | 1 | 0 | |
Молочная железа | Гиперплазия | 6 | 4 | 5 | 4 | 3 | |||||
Поджелудочная железа | Атрофия, островковая клетка | 6 | 5 | 4 | 4 | 3 | 5 | 4 | 5 | 6 | 4 |
Гиперплазия, островковая клетка | 0 | 1 | 0 | 1 | 1 9009 6 | 0 | 0 | 1 | 1 | 0 | |
Матка | Метаплазия плоскоклеточная | 6 | 5 | 4 | 3 | 4 | |||||
Гиперплазия, эндометрий, | 10 | 8 | 7 | 9 | 7 | ||||||
Яичник | Атрофия | 4 | 3 | 2 | 1 | ||||||
Варгина | Киста подслизистая | 1 | 0 | 1 | 1 | 0 | |||||
Яички | Атрофия яичка | 6 | 5 | 5 | 6 | 4 | |||||
Предстательная железа | Вступление | 1 | 1 | 0 | 0 | 1 |
3.Обсуждение
Обладая различными биоактивными свойствами, препарат пептидов морского коллагена (MCP) становится все более популярным в качестве пищевой добавки. Это долгосрочное исследование кормления MCP на крысах S-D направлено на получение данных оценки безопасности. Насколько нам известно, это первое исследование по оценке хронической токсичности препарата биоактивных пептидов коллагена из кожи кеты ( O. keta ) на крысах S-D.
Показатели выживаемости в контрольной группе для обоих полов соответствовали показателям, о которых сообщалось в предыдущих 24-месячных исследованиях кормления на крысах S-D [14]; это подтверждает адекватность наших экспериментальных условий.В настоящем исследовании средняя масса тела и потребление пищи в течение 24 месяцев исследования не зависели от приема МСР, что соответствовало четырехнедельному исследованию пептидов коллагена из свиной кожи Ву [15]. Кроме того, в предыдущем сообщении предполагалось, что комбинированные препараты, содержащие желатин, проявляют побочные эффекты, включая ощущение неприятного вкуса, периодический изжогенность и отрыжку [16]. В то время как данные о массе тела, потреблении пищи и эффективности питания в нашем исследовании показали, что диета с добавлением MCP из кожи кеты может не иметь значительного влияния на пищевой аппетит и / или абсорбцию у крыс.
По данным биохимии сыворотки или гистопатологического исследования печени не было выявлено хронических побочных эффектов или токсичности для органов-мишеней на печень. Более того, нет предшествующих сообщений о гепатотоксичности, вызванной пероральным введением пептидов коллагена пищевого происхождения. Что касается профиля почечной токсичности пептидов коллагена, пептиды коллагена, полученные из кожи свиньи, в дозе 16,6 г / кг · м.т. / день, как сообщалось, вызывают гипертрофию почек у растущих крыс [15]. Однако это исследование имело методологические недостатки, которые вызывают сомнения относительно вывода.Во-первых, только шесть крыс-самцов / группа были выделены для 4-недельного воздействия в этом исследовании, что, согласно последним рекомендациям FDA, было менее оптимальным. Во-вторых, введение пептидов коллагена в дозе 16,6 г / кг · м.т. / день увеличивало содержание белка в рационе до 34%. Как известно, высокое содержание белка может вызывать рост почек за счет индукции инсулиноподобного фактора роста-I [17]. Таким образом, этот неблагоприятный эффект может быть связан с высоким содержанием белка в рационе. В нашем настоящем исследовании количество сырого протеина в рационе групп, получавших МСР, было уменьшено на 2.25%, 4,5%, 9% и 18% соответственно для поддержания постоянного уровня белка в рационе. Таким образом, на основании данных биохимических параметров сыворотки, включая азот мочевины крови (АМК) и креатинин (CR) и анализа мочи в группах, получавших МСР, в течение всего экспериментального периода не было выявлено клинического неблагоприятного воздействия на функцию почек. Короче говоря, MCP из кожи кеты до максимальной дозы 18% в рационе в долгосрочном диетическом исследовании, по-видимому, не токсичен для печени и почек.
На протяжении всего эксперимента наблюдалась возрастная тенденция к увеличению уровней триглицеридов (ТГ) и общего холестерина (ТХОЛ) в сыворотке крови в контрольной группе и группах, получавших МСР, что соответствовало другим сообщениям [18].В исследовании Wergedahl было обнаружено, что гидролизат рыбьего белка, полученный из костных рамок лосося, снижает уровень общего холестерина в плазме и увеличивает долю холестерина ЛПВП у крыс Zucker (fa / fa) с генетическим ожирением [19]. Следует отметить, что частота вакуолизации гепатоцитов в группах, получавших МСР, была снижена по сравнению с контрольной группой. Микроскопически «жировые изменения» или стеатоз гепатоцитов морфологически совместим с цитоплазматической вакуолизацией гепатоцитов, повреждением клеток, вызванным липотоксичностью чрезмерного накопления нейтральных липидов в гепатоцитах [20,21].Wergedahl et al. обнаружил, что крысы, получавшие гидролизат белка лосося, имели более низкое содержание липидов в печени, чем крысы, получавшие казеин, поскольку первые, скорее всего, имели более высокую секрецию из печени липопротеинов, богатых триацилглицерином [19]. Более того, исследование Масатаки показало, что пептид коллагена кеты или радужной форели может влиять на абсорбцию липидов и метаболизм у крыс и может быть полезен для подавления кратковременного повышения уровня триглицеридов в плазме [22]. Из-за отсутствия значительной дозовой зависимости гиперлипидемический потенциал МСР в нашем исследовании все еще требует подтверждения в дальнейших исследованиях.Эти результаты сывороточного TCHOL и TG, однако, позволяют предположить, что длительное введение MCP не оказывает неблагоприятного воздействия на абсорбцию и метаболизм липидов.
4. Экспериментальная часть
4.1. Приготовление и процедура идентификации исследуемого вещества
Препарат морских коллагеновых пептидов (MCP), предоставленный CF Haishi Biotechnology Ltd. Co. (Пекин, Китай), был приготовлен из кожи выловленного в дикой природе лосося кета ( O. keta ) (из Восточно-Китайское море, средняя масса тела, 1.47 кг). Процедура приготовления и идентификации МКП проводилась по методике, описанной в нашем предыдущем исследовании [23]. Вкратце, кожу рыбы очищали, снимали чешую, разрезали на мелкие кусочки, обезжиривали и гомогенизировали. После гомогенизации и эмульгирования в дистиллированной воде материал ферментативно гидролизовали комплексной протеазой (3000 Ед / г белка), которая включает 7% трипсина, 65% папаина и 28% щелочной протеиназы, при 40 ° C и pH 8. за 3 ч. Полученный гидролизат повторно экстрагировали центрифугированием и затем разделяли через керамическую мембрану (200 мкм).После очистки с помощью процедуры нанофильтрации, конденсации путем криоконцентрирования в вакууме, обесцвечивания активированным углем, фильтрации и сушки путем распылительной сушки был получен порошок МСР, используемый в следующих исследованиях.
4.2. Характеристика MCP
Образец MCP содержит около 90% гидролизованного белка, 6,0% золы, 1,4% углеводов, 2,5% воды и 0,1% жира. Затем молекулярно-массовое распределение образцов было проанализировано с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC, Waters Corp., Милфорд, Массачусетс, США) и определено методом времяпролетной масс-спектрометрии с лазерной десорбцией и ионизацией на основе матрицы LDI-1700 (MALDI-TOF-MS) (Liner Scientific Inc., Рино, штат Невада, США). анализировали с помощью аминокислотного анализатора (H835-50; Hitachi, Tokyo, Japan). Кроме того, аминокислотный состав дополнительно анализировали с помощью автоматического аминокислотного анализатора H835-50 (Hitachi, Токио, Япония). Анализ MCP показал 86,5% молекулярных масс, распределенных между 130 и 1000 Да.Результаты аминокислотного состава показывают, что MCP богат глицином> глутаминовой кислотой> пролином> гидроксипролином> аспарагиновой кислотой> аланином> аргинином.
Таблица 6
Аминокислотный состав препарата пептидов морского коллагена из кожи кеты.
Аминокислота | Кол-во остатков / 100 остатков | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Глицин | 23,77 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Глутаминовая кислота | 12.22 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Пролин | 9,79 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Гидроксипролин | 7,51 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Аспарагиновая кислота | 7,29 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Аланин | 6,59 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Аргинин | 6,08 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Аргинин | 6,08 | 6,08 | Лизин | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Лейцин | 4,64 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Серин | 4,23 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Валин | 2,94 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Изолейцин | 2.57 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Треонин | 2,53 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Фенилаланин | 2,51 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Гистидин | 1,61 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Метионин | 0,03 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Тирозин | 0,03 91 904,39 Экспериментальные животные и условия содержания Молодых отъемных крыс S-D, четырехнедельного возраста, обоих полов, массой 80-90 г, были приобретены в Научном центре службы животных при Пекинском университете.Крыс содержали в двух пластиковых клетках со свободным доступом к корму и водопроводной воде и содержали в помещении с кондиционированным воздухом, защищенным фильтром, с контролируемой температурой (25 ± 2 ° C), относительной влажностью воздуха (60 ± 5%) и продолжительностью 12 часов. Циклы свет / темнота (свет 07: 30–19: 30 ч). Со всеми животными обращались в соответствии с указаниями Принципа ухода за лабораторными животными [24] и руководящими принципами Комитета по исследованиям животных Пекинского университета. 4.4. План экспериментаПосле однонедельного периода акклиматизации 200 крыс были случайным образом разделены на пять групп (20 животных / пол / группу), i.е. , контрольная группа носителя и четыре экспериментальные группы. Контрольных крыс кормили основной диетой для грызунов (GB 14924.3-2001, Vital River Limited Company, Пекин, Китай). Базовая диета содержала около 25% белка, 4% жира, 5% клетчатки и 60% углеводов. Крыс в экспериментальных группах кормили 2,25%, 4,5%, 9% и 18% (вес / вес) МСР в контрольной диете, соответственно. Здесь, по сравнению с контрольной диетой, 2,25%, 4,5%, 9% и 18% (вес / вес) сырого протеина в рационах с добавлением МСР четырех экспериментальных групп были соответственно уменьшены, чтобы поддерживать постоянный диетический белок. 4.5. Клинические исследованияКлинические исследования включали наблюдения за ежедневным общим состоянием, массой тела, потреблением пищи, эффективностью питания, клиническими биохимическими исследованиями и анализом мочи. Всех животных наблюдали три раза в день, в 08:00, 14:00 и 20:00, соответственно, на предмет смертности и гибели. Наблюдения за общим состоянием включали изменения кожи, шерсти, глаз, сомато-двигательной активности и поведения. Животные были одноквартирными.Каждому животному еженедельно давали определенное количество свежего корма. Остаток рациона и пролитый рацион измеряли еженедельно для расчета фактического потребления пищи отдельным животным. Величина потребления пищи (г / кг · м.т. / день) представляет собой отношение среднего суточного потребления пищи отдельным животным и средней массы тела в индивидуальный период наблюдения. Эффективность питания (г / 100 г) отдельных животных для отдельных интервалов была средним значением прироста массы тела от приема пищи на 100 г. Фактическое потребление пищи и вес тела отдельных животных регистрировали еженедельно в течение первых шести месяцев и каждые две недели после этого до умерщвления.Расчеты потребления корма и эффективности корма для отдельных интервалов и отдельных животных последовательно суммировались для расчета общего потребления корма и эффективности корма. Образцы крови для оценки химического состава сыворотки отбирали из боковой хвостовой вены у десяти выживших животных / группы / пола каждые три месяца в течение исследования. Чтобы избежать систематической ошибки отбора, первые десять животных были отобраны в соответствии с их серийными номерами в порядке от маленького к большому. Перед взятием образцов крови животных не кормили в течение ночи.Клинические биохимические параметры включали аланинаминотрансферазу (ALT), аспартатаминотрансферазу (AST), общий белок (TP), альбумин (ALB), азот мочевины крови (BUN), креатинин (CR), триглицерид (TG), общий холестерин (TCHOL). и глюкоза (GLU), которые определяли с использованием автоматического биохимического анализатора Olympus AU400 (Olympus Optical Co., Ltd., Токио, Япония). Стандартные исследования мочи проводились, когда животные получали MCP в течение 12 месяцев и 24 месяцев. Первые десять выживших животных каждой группы были помещены в метаболические клетки для сбора мочи в течение 24 часов.Мочу исследовали на предмет объема, цвета, pH и удельного веса, а также на уровни белка, кетонов, уробилирубина, уробилиногена, глюкозурии, крови и нитритов. Микроскопическое исследование осадка мочи проводилось для оценки возможных изменений количества эпителиальных клеток, лейкоцитов, эритроцитов, цилиндрических и кристаллических осадков. 4.6. Патологические исследованияВсе животные, находившиеся в состоянии смерти в течение периода лечения, были немедленно умерщвлены путем обескровливания и подвергнуты полному вскрытию.Кожа, все внутренние органы, а также черепная, грудная, брюшная и тазовая полости были исследованы для выявления любых повреждений. Промежуточных плановых вскрытий не проводилось. Все оставшиеся выжившие животные, которым вводили MCP в течение 24 месяцев, были подвергнуты полному вскрытию трупа. Во время вскрытия были собраны и зафиксированы в 10% забуференном растворе формалина следующие ткани и органы: мозг, гипофиз, сердце, легкие, печень, селезенка, почки, надпочечники, желудок, кишечник, поджелудочная железа, мочевой пузырь, кожа, молочная железа, трахея, пищевод, щитовидная железа, бедренная мышца, придаток яичка, семенные пузырьки, предстательная железа, яичко, матка, яичник, влагалище и глаза.Затем фиксированные образцы ткани заливали парафином и делали срезы толщиной 5 мкм. После окрашивания гематоксилином и эозином слайды исследовали с помощью микроскопа Olympus Bh3 (Olympus Optical Co., Ltd., Токио, Япония) для обнаружения любых повреждений. Органы , т.е. , мозг, сердце, легкие, печень, селезенка, почки, надпочечники, семенники и яичники первых десяти выживших животных / группы / пола были удалены от постороннего жира и взвешены для расчета относительного веса органов ( соотношение органа к конечной массе тела).Парные органы взвешивали вместе. 4.7. Статистический анализСтатистический анализ выполняли с использованием SPSS (версия 13.0, SPSS Inc.). Различия в данных измерения массы тела, эффективности питания, потребления пищи, параметров клинической биохимии и веса органов проверяли на однородность с помощью теста Бартлетта. Когда данные о дисперсии были однородными, использовали односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) и множественное сравнение теста Даннета t .Неоднородные случаи были проанализированы с помощью критерия суммы рангов Краскела-Уоллиса. Результаты частоты патологических изменений или поражений сравнивали с использованием критерия хи-квадрат и критерия точной вероятности Фишера. Данные о выживаемости анализировали с использованием метода выживаемости Каплана-Мейера. Дозозависимую тенденцию анализировали с помощью критерия ранговой корреляции Спирмена. Значение p <0,05 считалось значимым. Исследование хронической пероральной токсичности препарата пептидов морского коллагена из кожи кеты (Oncorhynchus keta) с использованием крысы Sprague-DawleyРефератИз-за повышенного потребления препарата пептидов морского коллагена (MCP) в качестве ингредиентов в функциональных продуктах питания и фармацевтических препаратах необходимо было выполнить требования безопасности в форме оценки хронической токсичности при пероральном приеме.Чтобы определить хроническую пероральную токсичность MCP, было проведено 24-месячное исследование кормления MCP. Крысам Sprague-Dawley (S-D) в возрасте четырех недель обоих полов вводили MCP при концентрациях в рационе 0%, 2,25%, 4,5%, 9% и 18% (вес / вес). Фактическое потребление пищи и вес тела отдельных животных регистрировали периодически до умерщвления. Были собраны образцы крови и мочи для оценки химического состава сыворотки и анализа мочи. На протяжении всего экспериментального периода не было токсикологически значимой разницы между животными, получавшими носитель, и животными, получавшими МСР, в отношении выживаемости, массы тела, потребления пищи, анализа мочи, параметров клинической биохимии и относительной массы органов у обоих полов.Более того, частота неопухолевых поражений в группах, получавших MCP, не увеличилась значительно по сравнению с контрольной группой. В настоящих экспериментальных условиях не наблюдалось более высокого риска хронических токсических эффектов у крыс, получавших MCP, при концентрациях в рационе 2,25%, 4,5%, 9% и 18% (вес / вес), чем у крыс, получавших базовую диету для грызунов. . Ключевые слова: пептидов морского коллагена, хроническая пероральная токсичность, крысы Sprague-Dawley 1. ВведениеВ последние годы было признано, что биоактивные пептиды, полученные из пищевых белков растений и животных, могут оказывать широкий спектр физиологических или гормоноподобная биологическая активность, превышающая их пищевую ценность [1].С морскими видами, составляющими почти половину всего глобального биоразнообразия, море предлагает огромные ресурсы для изучения морских биоактивных пептидов [2,3]. Препарат морских коллагеновых пептидов (MCP) представляет собой низкомолекулярный пептид, ферментативно гидролизованный из тканей коллагена морских рыб. Коллагеновые ткани, в том числе кожа, кости и чешуя, составляют 30% отходов переработки морской рыбы [4]. Было обнаружено, что как специфические белковые фрагменты МСР обладают широким спектром функциональных и биологических свойств, включая антиоксидантное [4,5], антигипертензивное [6,7] и противовозрастное действие [8].Эти биоактивные свойства или возможности для улучшения здоровья привели к использованию пептидов морского коллагена в качестве ингредиентов функциональных пищевых продуктов или фармацевтических препаратов [2,3]. Поскольку пептиды морского коллагена представляют собой модифицированные натуральные продукты, существуют требования безопасности для проведения исследований зависимости реакции от дозы на животных и клинических испытаний для оценки их переносимости и потенциальных хронических побочных эффектов, которые могут быть вызваны самими пептидами коллагена или их побочными эффектами. продукты при переработке [1].Кроме того, для пептидов коллагена из морской рыбы существуют значительные различия в физико-химических свойствах и аминокислотном составе по сравнению с пептидами коллагена из домашнего скота, такого как корова и свинья [9,10]. Следовательно, предыдущие данные оценки безопасности пептидов коллагена от домашнего скота все еще недостаточны для оценки профилей безопасности пептидов морского коллагена. В настоящее время отсутствуют данные о пероральной хронической токсичности пептидов морского коллагена in vivo .Учитывая повышенное потребление пептидов морского коллагена в качестве ингредиентов в пищевых продуктах и фармацевтических препаратах, оценка потенциальной хронической токсичности этого соединения имеет важное значение [11,12]. Таким образом, 24-месячное диетическое исследование, проведенное на крысах Sprague-Dawley (S-D), получавших разные уровни MCP, было проведено для оценки профилей хронической пероральной токсичности MCP. 2. Результаты2.1. Показатели выживаемостиНи в одной из групп, получавших препарат пептидов морского коллагена (MCP) в течение 12 месяцев, не было обнаружено смертности.В 24-месячном исследовании показатели выживаемости 0%, 2,25%, 4,5%, 9% и 18% групп, получавших MCP, составили 55%, 70%, 55%, 60% и 60% для женщин и 45%. , 65%, 65%, 70% и 60% для мужчин соответственно. Статистически значимой разницы не было отмечено в анализе выживаемости между контрольной группой и группами, получавшими MCP ( P > 0,05) (). 2.2. Общее состояние, масса тела, эффективность питания, потребление пищи и потребление MCPНе было заметной разницы в общих условиях между группами, получавшими носитель и получавшими MCP.Как показано в, наблюдалась возрастная тенденция к увеличению массы тела той же группы. Между тем, прирост массы тела значительно снизился после 18-месячного лечения MCP. Что касается потребления продуктов питания, то в каждой группе наблюдалась заметная возрастная тенденция к снижению; в то время как никаких дозозависимых изменений в потреблении пищи не было обнаружено ни у одного пола, когда животных лечили MCP в течение 12 или 24 месяцев. Рисунок 1Данные о месячной выживаемости крыс Sprague-Dawley (S-D), получавших препарат пептидов морского коллагена (MCP) в течение 24 месяцев.Значения были проанализированы на предмет статистической значимости различий с помощью анализа выживаемости Каплана-Мейера. Все P > 0,05 по сравнению с контрольными значениями. Рисунок 2Кривые роста крыс S-D, получавших препарат пептидов морского коллагена (MCP) в течение 24 месяцев. Уровни массы тела выражали как средние значения и анализировали с помощью теста однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA). Множественное сравнение теста Даннета t использовали для оценки разницы между группами, получавшими МСР, и контрольной группой.Все P > 0,05 по сравнению с контрольными значениями. Более того, эффективность питания в той же группе с возрастом значительно снизилась (). На протяжении всего экспериментального периода, поскольку не было обнаружено статистической разницы или дозозависимой тенденции массы тела и эффективности питания между контрольной группой и группами, получавшими МСР, у обоих полов, фактическое суточное потребление тестируемого вещества показало хорошую корреляцию с его диетическими концентрациями. в разных группах. В течение 24 месяцев лечения прием МКП 2.25%, 4,5%, 9% и 18% групп, получавших MCP, оценивались как 1,063, 2,216, 4,609 и 8,586 г / кг · мт / день для женщин и 0,907, 1,798, 3,418, 6,658 г / кг · мт / день для мужчин соответственно (). Таблица 1Пищевая эффективность крыс S-D, получавших препарат пептидов морского коллагена (MCP) в течение 24 месяцев.
Таблица 2Потребление пищи и потребление препарата пептидов морского коллагена (MCP) крысам SD в течение 12 месяцев и 24 месяцев.
2.3. Клинические биохимические параметрыКак показано на фигуре, не было обнаружено никаких дозозависимых изменений или статистических различий в сывороточных уровнях аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), альбумина (АЛБ), общего белка (ТР) и азота мочевины крови. (АМК) после 12-месячного и 24-месячного лечения. Когда животных лечили MCP в течение 24 месяцев, уровни креатинина (CR) незначительно увеличивались в 9% и 18% группах самцов по сравнению с контрольной группой ( P > 0.05). Кроме того, значительное увеличение уровня ТП в сыворотке наблюдалось в группе мужчин, получавших 9% МСР ( P <0,05), тогда как в группах женщин, получавших МСР , по сравнению с контрольной группой , не было обнаружено значительного увеличения уровня ТП. В то время как повышение уровня ТП в сыворотке в группе мужчин, получавших 9% МСР, считалось случайным и не связанным с лечением из-за отсутствия значительной дозовой зависимости. После 12 месяцев лечения значительно сниженные уровни триглицеридов (ТГ) в сыворотке крови наблюдались у 2 пациентов.25% и 4,5% женских групп, получавших МСР, по сравнению с женщинами контрольной группы ( P <0,05), тогда как сывороточные уровни ТГ в мужских группах существенно не различались между контрольной и обработанной МСР группами (P > 0,05). ). Более того, не было никакого эффекта, связанного с MCP, на сывороточные уровни общего холестерина (TCHOL) у обоих полов ( P > 0,05). После 24 месяцев лечения МСР значительно более низкие уровни ТГ в сыворотке наблюдались в группах женщин, получавших 4,5% и 9%, а также во всех группах мужчин, получавших МСР, по сравнению с контрольной группой ( P <0.05). Аналогичным образом, уровни TCHOL в сыворотке в группах мужчин, получавших 4,5%, 9% и 18% МСР, заметно снизились по сравнению с контрольной группой мужчин ( P <0,05), в то время как у женщин значимых межгрупповых различий не наблюдалось. группы ( P > 0,05). Кроме того, по данным оценки за 12 месяцев и 24 месяца не было выявлено значительной разницы в уровнях глюкозы в сыворотке (GLU) между контрольной и получавшей MCP группами (2). 2.4. Общий анализ мочиВ параметрах анализа мочи и микроскопическом исследовании осадка мочи не было обнаружено связанного с MCP эффекта.Объем мочи, pH и удельный вес были в пределах нормы (данные не показаны). 2,5. Относительный вес органовВариабельность веса органов была связана с наличием общих результатов, таких как масса, атрофия, опухоль, фиброз, увеличение площади и области гиперемии [13]. После 24 месяцев приема МСР не было выявлено значительных связанных с МСР различий по относительной массе органов мозга, сердца, легких, печени, селезенки, почек, надпочечников, семенников и яичников (). 2.6. Гистопатологическое исследованиеПри гистологическом исследовании данные неопухолевых поражений представлены в. Большинство поражений, связанных с воспалительными изменениями и возрастными дегенерациями (фиброз, эмфизема, атрофия и гиперплазия), были обнаружены во всех группах. По сравнению с контрольной группой, частота жировой вакуолизации гепатоцитов заметно снизилась в группах обоих полов, получавших МСР, при этом значимости не было ( P > 0,05). Никакого другого значительного увеличения частоты патологических изменений или поражений в группах, получавших MCP, по сравнению с контрольной группой не наблюдалось ( P > 0.05). Таблица 3Биохимические параметры сыворотки крови крыс S-D, получавших препарат пептидов морского коллагена (MCP) в течение 12 месяцев и 24 месяцев.
Таблица 4Относительный вес органов крыс SD, получавших морской коллаген препарат пептидов (МСР) в течение 24 месяцев.
Таблица 5Ненеопластические поражения у крыс SD, пролеченных с препаратом пептидов морского коллагена (MCP) в течение 24 месяцев.
3.ОбсуждениеОбладая различными биоактивными свойствами, препарат пептидов морского коллагена (MCP) становится все более популярным в качестве пищевой добавки. Это долгосрочное исследование кормления MCP на крысах S-D направлено на получение данных оценки безопасности. Насколько нам известно, это первое исследование по оценке хронической токсичности препарата биоактивных пептидов коллагена из кожи кеты ( O. keta ) на крысах S-D. Показатели выживаемости в контрольной группе для обоих полов соответствовали показателям, о которых сообщалось в предыдущих 24-месячных исследованиях кормления на крысах S-D [14]; это подтверждает адекватность наших экспериментальных условий.В настоящем исследовании средняя масса тела и потребление пищи в течение 24 месяцев исследования не зависели от приема МСР, что соответствовало четырехнедельному исследованию пептидов коллагена из свиной кожи Ву [15]. Кроме того, в предыдущем сообщении предполагалось, что комбинированные препараты, содержащие желатин, проявляют побочные эффекты, включая ощущение неприятного вкуса, периодический изжогенность и отрыжку [16]. В то время как данные о массе тела, потреблении пищи и эффективности питания в нашем исследовании показали, что диета с добавлением MCP из кожи кеты может не иметь значительного влияния на пищевой аппетит и / или абсорбцию у крыс. По данным биохимии сыворотки или гистопатологического исследования печени не было выявлено хронических побочных эффектов или токсичности для органов-мишеней на печень. Более того, нет предшествующих сообщений о гепатотоксичности, вызванной пероральным введением пептидов коллагена пищевого происхождения. Что касается профиля почечной токсичности пептидов коллагена, пептиды коллагена, полученные из кожи свиньи, в дозе 16,6 г / кг · м.т. / день, как сообщалось, вызывают гипертрофию почек у растущих крыс [15]. Однако это исследование имело методологические недостатки, которые вызывают сомнения относительно вывода.Во-первых, только шесть крыс-самцов / группа были выделены для 4-недельного воздействия в этом исследовании, что, согласно последним рекомендациям FDA, было менее оптимальным. Во-вторых, введение пептидов коллагена в дозе 16,6 г / кг · м.т. / день увеличивало содержание белка в рационе до 34%. Как известно, высокое содержание белка может вызывать рост почек за счет индукции инсулиноподобного фактора роста-I [17]. Таким образом, этот неблагоприятный эффект может быть связан с высоким содержанием белка в рационе. В нашем настоящем исследовании количество сырого протеина в рационе групп, получавших МСР, было уменьшено на 2.25%, 4,5%, 9% и 18% соответственно для поддержания постоянного уровня белка в рационе. Таким образом, на основании данных биохимических параметров сыворотки, включая азот мочевины крови (АМК) и креатинин (CR) и анализа мочи в группах, получавших МСР, в течение всего экспериментального периода не было выявлено клинического неблагоприятного воздействия на функцию почек. Короче говоря, MCP из кожи кеты до максимальной дозы 18% в рационе в долгосрочном диетическом исследовании, по-видимому, не токсичен для печени и почек. На протяжении всего эксперимента наблюдалась возрастная тенденция к увеличению уровней триглицеридов (ТГ) и общего холестерина (ТХОЛ) в сыворотке крови в контрольной группе и группах, получавших МСР, что соответствовало другим сообщениям [18].В исследовании Wergedahl было обнаружено, что гидролизат рыбьего белка, полученный из костных рамок лосося, снижает уровень общего холестерина в плазме и увеличивает долю холестерина ЛПВП у крыс Zucker (fa / fa) с генетическим ожирением [19]. Следует отметить, что частота вакуолизации гепатоцитов в группах, получавших МСР, была снижена по сравнению с контрольной группой. Микроскопически «жировые изменения» или стеатоз гепатоцитов морфологически совместим с цитоплазматической вакуолизацией гепатоцитов, повреждением клеток, вызванным липотоксичностью чрезмерного накопления нейтральных липидов в гепатоцитах [20,21].Wergedahl et al. обнаружил, что крысы, получавшие гидролизат белка лосося, имели более низкое содержание липидов в печени, чем крысы, получавшие казеин, поскольку первые, скорее всего, имели более высокую секрецию из печени липопротеинов, богатых триацилглицерином [19]. Более того, исследование Масатаки показало, что пептид коллагена кеты или радужной форели может влиять на абсорбцию липидов и метаболизм у крыс и может быть полезен для подавления кратковременного повышения уровня триглицеридов в плазме [22]. Из-за отсутствия значительной дозовой зависимости гиперлипидемический потенциал МСР в нашем исследовании все еще требует подтверждения в дальнейших исследованиях.Эти результаты сывороточного TCHOL и TG, однако, позволяют предположить, что длительное введение MCP не оказывает неблагоприятного воздействия на абсорбцию и метаболизм липидов. 4. Экспериментальная часть4.1. Приготовление и процедура идентификации исследуемого веществаПрепарат морских коллагеновых пептидов (MCP), предоставленный CF Haishi Biotechnology Ltd. Co. (Пекин, Китай), был приготовлен из кожи выловленного в дикой природе лосося кета ( O. keta ) (из Восточно-Китайское море, средняя масса тела, 1.47 кг). Процедура приготовления и идентификации МКП проводилась по методике, описанной в нашем предыдущем исследовании [23]. Вкратце, кожу рыбы очищали, снимали чешую, разрезали на мелкие кусочки, обезжиривали и гомогенизировали. После гомогенизации и эмульгирования в дистиллированной воде материал ферментативно гидролизовали комплексной протеазой (3000 Ед / г белка), которая включает 7% трипсина, 65% папаина и 28% щелочной протеиназы, при 40 ° C и pH 8. за 3 ч. Полученный гидролизат повторно экстрагировали центрифугированием и затем разделяли через керамическую мембрану (200 мкм).После очистки с помощью процедуры нанофильтрации, конденсации путем криоконцентрирования в вакууме, обесцвечивания активированным углем, фильтрации и сушки путем распылительной сушки был получен порошок МСР, используемый в следующих исследованиях. 4.2. Характеристика MCPОбразец MCP содержит около 90% гидролизованного белка, 6,0% золы, 1,4% углеводов, 2,5% воды и 0,1% жира. Затем молекулярно-массовое распределение образцов было проанализировано с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC, Waters Corp., Милфорд, Массачусетс, США) и определено методом времяпролетной масс-спектрометрии с лазерной десорбцией и ионизацией на основе матрицы LDI-1700 (MALDI-TOF-MS) (Liner Scientific Inc., Рино, штат Невада, США). анализировали с помощью аминокислотного анализатора (H835-50; Hitachi, Tokyo, Japan). Кроме того, аминокислотный состав дополнительно анализировали с помощью автоматического аминокислотного анализатора H835-50 (Hitachi, Токио, Япония). Анализ MCP показал 86,5% молекулярных масс, распределенных между 130 и 1000 Да.Результаты аминокислотного состава показывают, что MCP богат глицином> глутаминовой кислотой> пролином> гидроксипролином> аспарагиновой кислотой> аланином> аргинином. Таблица 6Аминокислотный состав препарата пептидов морского коллагена из кожи кеты.
|