Asph: Объектив Leica Summilux-M 35mm f/1.4 ASPH, черный
404 page | Leica Camera AG
Страна ChooseAustriaFranceGermanyItalyPortugalRussiaSpainSwitzerlandUnited KingdomUnited StatesAustraliaChinaIndiaJapanSingaporeSouth KoreaNew ZealandAfghanistanAlbaniaAlgeriaAndorraAngolaAnguillaAntigua and BarbudaArgentinaArmeniaArubaAzerbaijanBahamasBahrainBangladeshBarbadosBelarusBelgiumBelizeBeninBermudaBhutanBoliviaBosnia and HerzegovinaBotswanaBrazilBritish Virgin IslandsBruneiBulgariaBurkina FasoBurundiCambodiaCameroonCanadaCape VerdeCayman IslandsCentral African RepublicChadChileCittà del VaticanoColombiaComorosCongoCosta RicaCote d’IvoireCroatiaCubaCyprusCzech RepublicDenmarkDjiboutiDominicaDominican RepublicEcuadorEgyptEl SalvadorEquatorial GuineaEritreaEstoniaEthiopiaFalkland IslandsFinlandFrench GuianaFrench PolynesiaGabonGambiaGeorgiaGhanaGibraltarGreeceGrenadaGuadeloupeGuatemalaGuineaGuinea BissauGuyanaHaitiHondurasHong KongHungaryIcelandIndonesiaIraqIrelandIsraelJamaicaJerseyJordanKazakhstanKenyaKuwaitKyrgyzstanLaosLatviaLebanonLesothoLiberiaLibyaLiechtensteinLithuaniaLuxembourgMacauMacedoniaMadagascarMalawiMalaysiaMaldivesMaliMaltaMartiniqueMauritaniaMauritiusMexicoMicronesiaMoldovaMonacoMongoliaMontenegroMontserratMoroccoMozambiqueMyanmarNamibiaNepalNetherlandsNetherlands AntillesNicaraguaNigerNigeriaNorwayOmanPakistanPalestinian TerritoryPanamaPapua New GuineaParaguayPeruPhilippinesPolandPuerto RicoQatarRomaniaRwandaRéunionSaint HelenaSaint Kitts and NevisSaint LuciaSaint Vincent and the GrenadinesSan MarinoSao Tome and PrincipeSaudi ArabiaSenegalSerbiaSeychellesSierra LeoneSlovakiaSloveniaSomaliaSouth AfricaSri LankaSudanSurinameSwazilandSwedenTaiwanTajikistanThailandTimor-LesteTogoTrinidad and TobagoTunisiaTurkeyTurkmenistanTurks and Caicos IslandsUgandaUkraineUnited Arab EmiratesUnited Republic of TanzaniaUnited States Virgin IslandsUruguayUzbekistanVenezuelaVietnamWestern SaharaYemenZambiaZimbabwe
Доступные языки English
I want to receive advertising information based on my interests and activities from the Leica Camera Group on Leica Camera products, services, events, and marketing promotions.
Объектив DJI DL 35mm F2.8 LS ASPH Lens для Zenmuse X7 от ведущего дистрибьютора и интегратора беспилотных решений SKYMEC
Объектив из легкого углеродного волокна с DL-креплением и фокусным расстоянием 35 мм предназначен для использования с камерой Zenmuse X7. Крепление DL обеспечивает быстрый монтаж объектива на камеру и снижает вес устройства, что актуально для увеличения полетного времени при аэросъемке. Множитель фокусного расстояния 1,5 достигается при использовании объектива с камерой Zenmuse X7.
Характеристики объективов:
| Объектив | DL-S 16mm F2.8 ND ASPH | DL 24mm F2.8 LS ASPH | DL 35mm F2.8 LS ASPH |
DL 50mm F2. 8 LS ASPH
|
| Масса | около 182 г | около 178 г | около 180 г | около 182 г |
| Макс. значение диафрагмы | F2.8 | F2.8 | F2.8 | F2.8 |
| Элементы/Группы/Асферические элементы | 13 элементов в 12 группах (включая 4 асферических элемента) | 9 элементов в 8 группах (включая 3 асферических элемента) | 9 элементов в 8 группах (включая 3 асферических элемента) | 9 элементов в 7 группах (включая 2 асферических элемента) |
Мин. фокусное расстояние
|
0,40 м | 0,65 м | 0,85 м | 0,93 м |
| Диаметр | 46 мм | 46 мм | 46 мм | 46 мм |
| Размеры (диаметр*длина) | φ55 × 69,1 мм (с блендой) | φ55 × 71,2 мм (с блендой) | φ55 × 71,2 мм (с блендой) | φ55 × 71,2 мм (с блендой) |
| Другие | Встроенный ND-фильтр | Центральный затвор | Центральный затвор | Центральный затвор |
404
false
/content/honor/gr.
html
Greece
Ελληνικά
false https://www.hihonor.com/nl/ Netherlands English
false https://www.honor.ru/ Russia Pусский
false /content/honor/cz.html Czech Čeština
false
https://www.
false https://www.hihonor.com/spain/ Spain Español
false /content/honor/fi.html Finland Suomi
false
/content/honor/hu.
html
Hungary
Magyar
false /content/honor/pl.html Poland Polski
false https://www.hihonor.com/unitedkingdom/ United Kingdom English
false
https://www.hihonor.
com/france/?intcid=marketing:france:officialsite-to-store:everypage:country-selector:20180620
France
Français
false https://www.hihonor.com/italy/ Italy Italiano
false /content/honor/rs.html Serbia Srpski
false
/content/honor/tr.
html
Turkey
Türkçe
false /content/honor/by.html Belarus Pусский
false /content/honor/sk.html Slovakia Slovenčina
false /content/honor/ua.html Ukraine Українська
false
/content/honor/bg/.
html
Bulgaria
Български
false /content/honor/ro.html Romania Română
| Функциональный ключ | Позиция (я) | Описание Действия | Графическое представление | Длина |
|---|---|---|---|---|
В этом подразделе раздела «Последовательность» сообщается о различиях между канонической последовательностью (отображаемой по умолчанию в записи) и различными отправленными последовательностями, объединенными в записи.Эти различные материалы могут происходить из разных проектов секвенирования, разных типов экспериментов или разных биологических образцов. Конфликты последовательностей обычно имеют неизвестное происхождение. Конфликт последовательностей i | 519 | D → N в BAG65166 (PubMed: 14702039). | 1 | |
| Конфликт последовательностей i | 565 | Y → I в AAA82108 (PubMed: 7821814). | 1 | |
| Конфликт последовательностей i | 575 — 577 | WWT → CG в AAA82108 (PubMed: 7821814). | 3 | |
| Конфликт последовательностей i | 585 | E → Q в AAA82108 (PubMed: 7821814). | 1 | |
| Конфликт последовательностей i | 599 | D → Y в BAG65166 (PubMed: 14702039). | 1 | |
| Конфликт последовательностей i | 709 | K → R в AAB50779 (PubMed: 8823296). | 1 | |
| Конфликт последовательностей i | 734 | F → L в BAG65166 (PubMed: 14702039). | 1 | |
| Условные обозначения | Позиция (я) | Описание Действия | Графическое изображение | Длина |
| Естественный вариант i VAR_053781 | 354 | R → M. Соответствует варианту dbSNP : rs6995412Ensembl. | 1 | |
| Естественный вариант i VAR_071821 | 735 | R → W в FDLAB. Ручное утверждение, основанное на эксперименте и
| 1 | |
| Функциональный ключ | Позиция (я) | Описание Действия | Графический вид | Длина |
В этом подразделе раздела «Последовательность» описывается последовательность встречающейся в природе альтернативной изоформы (ов) белка. Изменения в аминокислотной последовательности могут быть связаны с альтернативным сплайсингом, использованием альтернативного промотора, альтернативным инициированием или рибосомным сдвигом рамки считывания. Альтернативная последовательность i VSP_039165 | 1 — 34 | MAQRK… PGARR → MAEDK in изоформа 3, изоформа 4, изоформа 5, изоформа 8, изоформа 9 и изоформа 10. Информация, подобранная вручную, основанная на утверждениях в научных статьях, для которых нет экспериментальной поддержки. Утверждение вручную на основании заключения в i
| 34 | |
| Альтернативная последовательность i VSP_039166 | 84 | L → LAKAKDFRYNLSEVLQ в изоформе 3, изоформе 5, изоформе 7, изоформе 8 и мнении изоформы 9. in i
| 1 | |
| Альтернативная последовательность я VSP_039167 | 108 — 239 | GLKER … NPDSS → EGPSGVAKRKTKAKVKELTK EELKKEKEKPESRKESKNEE RKKGKKEDVRKDKKIADADL SRKESPKGKKDREKEKVDLE KSAKTKENRKKSTNMKDVSS KMASRDKDDRKESRSSTRYA HLTKGNTQKRNG в изоформы 3 и 4 изоформы. Руководство утверждение основано на мнении в я Добавить BLAST | 132 | |
| Альтернативная последовательность я VSP_044235 | 110 — 188 | Kerst … DEFLM → TKDGSNENIDSLEEVLNILA EESSDWFYGFLSFLYDIMTP FEMLEEEEEESETADGVDGT SQNEGVQGKTCVILDLHNQ в изоформы 7. Руководство по утверждению на основании заключения i Добавить BLAST | 79 | |
| Альтернативная последовательность i VSP_044236 | 164-206 | Отсутствует в изоформе 6 и изоформе 9. Manual assertion based on opinion in i
| 43 | |
| Альтернативная последовательность i VSP_044237 | 189-758 | Отсутствует в изоформе 7. Ручное утверждение на основе заключения в i Добавить BLAST | 570||
| Альтернативная последовательность i VSP_059345 | 218-236 | Отсутствует в изоформе 11.Добавить BLAST | 19 | |
| Альтернативная последовательность i VSP_039168 | 240-758 | Отсутствует в изоформе 3 и изоформе 4. Ручное утверждение на основе мнения в i Добавить BLAST | 519 | |
| Альтернативная последовательность i VSP_044238 | 264 | Отсутствует в изоформе 5. Ручное утверждение на основе мнения в i | 1 | |
Альтернативная последовательность i25 VSP_02439 3169 313 | ET → DT в изоформе 2, изоформе 5, изоформе 6, изоформе 8, изоформе 9 и изоформе 11. Ручное утверждение, основанное на мнении в i
| 2 | ||
| Альтернативная последовательность i VSP_039170 | 314 — 758 | Отсутствует в изоформе 2, изоформе 5, изоформе 6, изоформе 8, изоформе 9 и изоформе 11. Ручное утверждение, основанное на мнении в i
| 445 |
.. 
, Сюн Й., Мегарбейн А., Трабулси Е.И., Алкурая Ф.С. 
. 
» 
, Moriya S., Momiyama H., Satoh N., Takami S., Terashima Y., Suzuki O., Nakagawa S., Senoh A., Mizoguchi H., Goto Y., Shimizu F., Wakebe H., Hishigaki H., Watanabe T., Sugiyama A., Takemoto M., Kawakami B., Yamazaki M., Watanabe K., Kumagai A., Itakura S., Fukuzumi Y., Fujimori Y., Komiyama M., Tashiro H., Tanigami A., Fujiwara T., Ono T., Yamada K., Fujii Y., Ozaki K., Hirao M., Ohmori Y., Kawabata A., Hikiji T., Kobatake N., Inagaki H., Ikema Y., Okamoto S., Okitani R., Kawakami T., Noguchi S., Itoh T., Shigeta K., Сенба Т., Мацумура К., Накадзима Ю., Мидзуно Т., Моринага М., Сасаки М., Тогаши Т., Ояма М., Хата Х., Ватанабэ М., Комацу Т., Мидзусима-Сугано Дж. , Сато Т., Шираи Ю., Такахаши Ю., Накагава К., Окумура К., Нагасе Т., Номура Н., Кикучи Х., Масухо Ю., Ямасита Р., Накай К., Яда Т., Накамура Ю., Охара О., Исогай Т., Сугано С. 
» 
, Moriya S., Momiyama H., Satoh N., Takami S., Terashima Y., Suzuki O., Nakagawa S., Senoh A., Mizoguchi H., Goto Y., Shimizu F., Wakebe H., Hishigaki H., Watanabe T., Sugiyama A., Takemoto M., Kawakami B., Yamazaki M., Watanabe K., Kumagai A., Itakura S., Fukuzumi Y., Fujimori Y., Komiyama M., Tashiro H., Tanigami A., Fujiwara T., Ono T., Yamada K., Fujii Y., Ozaki K., Hirao M., Ohmori Y., Kawabata A., Hikiji T., Kobatake N., Inagaki H., Ikema Y., Okamoto S., Okitani R., Kawakami T., Noguchi S., Itoh T., Shigeta K., Senba T., Matsumura K., Nakajima Y., Mizuno T., Morinaga M., Sasaki M., Togashi T., Oyama M., Hata H., Watanabe M., Komatsu T., Mizushima-Sugano J., Satoh T., Shirai Y., Takahashi Y., Nakagawa K., Okumura K., Nagase T., Nomura N., Kikuchi H., Masuho Y., Yamashita R., Nakai K., Yada T., Nakamura Y., Охара О., Исогай Т., Сугано С. 
, Kikkawa E., Omura Y., Abe K., Kamihara K., Katsuta N., Sato K., Tanikawa M., Yamazaki M., Ninomiya K., Ishibashi T., Yamashita H., Murakawa K., Fujimori K., Tanai H., Kimata M., Watanabe M., Hiraoka S., Chiba Y., Ishida S., Ono Y., Takiguchi S., Watanabe S., Yosida M., Hotuta T., Kusano J., Kanehori K., Takahashi-Fujii A., Hara H., Tanase T.-O., Nomura Y., Togiya S., Komai F., Hara R., Takeuchi K., Arita M., Imose N., Musashino K., Yuuki H., Oshima A., Sasaki N., Aotsuka S., Yoshikawa Y., Matsunawa H., Ichihara T., Shiohata N., Sano S., Moriya S., Momiyama H., Satoh N., Takami S., Terashima Y., Suzuki O., Nakagawa S., Senoh A., Mizoguchi H., Goto Y., Shimizu F., Wakebe H., Hishigaki H., Watanabe T., Sugiyama A., Takemoto M., Kawakami B., Yamazaki M., Watanabe K., Kumagai A., Itakura S., Fukuzumi Y., Fujimori Y., Komiyama M., Tashiro H., Tanigami A., Fujiwara T., Ono T., Yamada K., Fujii Y., Ozaki K., Hirao M., Ohmori Y., Kawabata A., Hikiji T., Kobatake N., Inagaki H., Ikema Y., Okamoto S.
, Okitani R., Kawakami T., Noguchi S., Itoh T., Shigeta K., Senba T., Matsumura K., Nakajima Y., Mizuno T., Morinaga M., Sasaki M., Togashi T., Oyama M., Hata H., Watanabe M., Komatsu T., Mizushima-Sugano J., Satoh T., Shirai Y., Takahashi Y., Nakagawa K., Okumura K., Nagase T., Nomura N., Kikuchi H., Masuho Y., Yamashita R., Nakai K., Yada T., Nakamura Y., Ohara O., Isogai T., Sugano S. 
uniprot.org/annotation/VSP_059345″>
, Сато Х., Нагаи К., Кимура К., Макита Х., Секин М., Обаяси М., Ниси Т., Шибахара Т., Танака Т., Исии С., Ямамото Дж., Saito K., Kawai Y., Isono Y., Nakamura Y., Nagahari K., Murakami K., Yasuda T., Iwayanagi T., Wagatsuma M., Shiratori A., Sudo H., Hosoiri T., Kaku Y., Kodaira H., Kondo H., Sugawara M., Takahashi M., Kanda K., Yokoi T., Furuya T., Kikkawa E., Omura Y., Abe K., Kamihara K., Katsuta N., Sato K., Tanikawa M., Yamazaki M., Ninomiya K., Ishibashi T., Yamashita H., Murakawa K., Fujimori K., Tanai H., Kimata M., Watanabe M., Hiraoka S., Chiba Y., Ishida S., Ono Y., Takiguchi S., Watanabe S., Yosida M., Hotuta T., Kusano J., Kanehori K., Takahashi-Fujii A., Hara H., Tanase T.-O., Nomura Y., Togiya S., Komai F., Hara R., Takeuchi K., Arita M., Imose N., Musashino K., Yuuki H., Oshima A., Sasaki N., Aotsuka S., Yoshikawa Y., Matsunawa H., Ichihara T., Shiohata N., Sano S., Moriya S., Momiyama H., Satoh N., Takami S., Terashima Y., Suzuki O., Nakagawa S., Senoh A., Mizoguchi H., Goto Y.
, Shimizu F., Wakebe H., Hishigaki H., Watanabe T., Sugiyama A., Takemoto M., Kawakami B., Yamazaki M., Watanabe K., Kumagai A., Itakura S., Fukuzumi Y., Fujimori Y., Komiyama M., Tashiro H., Tanigami A., Fujiwara T., Ono T., Yamada K., Fujii Y., Ozaki K., Hirao M., Ohmori Y., Kawabata A., Hikiji T., Kobatake N., Inagaki H., Ikema Y., Okamoto S., Okitani R., Kawakami T., Noguchi S., Itoh T., Shigeta K., Senba T., Matsumura K., Nakajima Y., Mizuno T., Morinaga M., Sasaki M., Togashi T., Oyama M., Hata H., Watanabe M., Komatsu T., Mizushima-Sugano J., Satoh T., Shirai Y., Takahashi Y., Nakagawa K., Okumura K., Nagase T., Nomura N., Kikuchi H., Masuho Y., Yamashita R., Nakai K., Yada T., Nakamura Y., Ohara O., Isogai T., Sugano S. 
, Yuuki H., Oshima A., Sasaki N., Aotsuka S., Yoshikawa Y., Matsunawa H., Ichihara T., Shiohata N., Sano S., Moriya S., Momiyama H., Satoh N., Takami S., Terashima Y., Suzuki O., Nakagawa S., Senoh A., Mizoguchi H., Goto Y., Shimizu F., Wakebe H., Hishigaki H., Watanabe T., Sugiyama A., Takemoto M., Kawakami B., Yamazaki M., Watanabe K., Kumagai A., Itakura S., Fukuzumi Y., Fujimori Y., Komiyama M., Tashiro H., Tanigami A., Fujiwara T., Ono T., Yamada K., Fujii Y., Ozaki K., Hirao M., Ohmori Y., Kawabata A., Hikiji T., Kobatake N., Inagaki H., Ikema Y., Okamoto S., Okitani R., Kawakami T., Noguchi S., Itoh T., Shigeta K., Senba T., Matsumura K., Nakajima Y., Mizuno T., Morinaga M., Sasaki M., Togashi T., Oyama M., Hata H., Watanabe M., Komatsu T., Mizushima-Sugano J., Satoh T., Shirai Y., Takahashi Y., Nakagawa K., Okumura K., Nagase T., Nomura N., Kikuchi H., Masuho Y., Yamashita R., Nakai K., Yada T., Nakamura Y., Ohara O., Isogai T., Sugano S. 
Аспартат-бета-гидроксилаза ASPH [Homo sapiens (human)] — Ген
НОВЫЙ Попробуйте новую таблицу расшифровок
RefSeqs поддерживается независимо от аннотированных Геномы
Эти эталонные последовательности существуют независимо от построения генома.Объясните
Эти эталонные последовательности курируются независимо от генома. цикл аннотаций, поэтому их версии могут не совпадать с версиями RefSeq в текущем построение генома. Определите несовпадения версий, сравнив версию RefSeq в этот раздел к разделу, указанному в геномных регионах, стенограммы и продукты, указанные выше.
Геномный
НГ_013210.
1 RefSeqGene- Диапазон
- 5049..219085
- Скачать
- GenBank, FASTA, Sequence Viewer (графика)
1 RefSeqGeneмРНК и белок (белки)
NM_001164750.2 → NP_001158222.1 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы f
Статус: ПЕРЕСМОТРЕН
- Описание
- Вариант транскрипции: Этот вариант (6) представляет использование альтернативного промотора и 5 ‘UTR и использует отдельный стартовый кодон по сравнению с вариантом 1.Полученная изоформа (f) имеет более короткий и отчетливый N-конец по сравнению с изоформой а. Эта изоформа включает бета-гидроксилазный домен, обнаруженный в изоформе а, и, вероятно, обладает каталитической активностью.
- Исходная последовательность (и)
- AC0
, AF339775, AK304314, BC025236, DN993915, S83325 - Консенсус CDS
- CCDS55234.
1- UniProtKB / Swiss-Prot
- Q12797
- Связанные
- ENSP00000437864.1, ENST00000541428.5
- Консервированные домены (5) сводка
- TIGR02795
Расположение: 313 → 426 - tol_pal_ybgF; белок системы тол-пал YbgF
- pfam05279
Расположение: 14 → 281 - Asp-B-Hydro_N; N-концевая область аспартил-бета-гидроксилазы
- sd00006
Расположение: 429 → 453 - TPR; Повторение TPR [структурный мотив]
- pfam05118
Расположение: 562 → 715 - Asp_Arg_Hydrox; Аспартил / аспарагинил бета-гидроксилаза
- pfam13428
Расположение: 316 → 355 - TPR_14; Тетратрикопептидный повтор
NM_001164751.
2 → NP_001158223.1 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы gСм. Идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_001158223.1
Статус: ПЕРЕСМОТРЕН
- Описание Вариант транскрипции
- : этот вариант (7) представляет использование альтернативного промотора и 5 ‘UTR и использует отдельный стартовый кодон, использует отдельный шаблон сплайсинга 3’, в котором отсутствуют многие кодирующие экзоны, включает альтернативный экзон в кадре и использует альтернативный сайт внутрикадрового монтажа, по сравнению с вариантом 1.Полученная изоформа (g) имеет более короткий и отчетливый N-конец, существенно более короткий и отчетливый C-конец и несколько внутренних отличий по сравнению с изоформой a. Эта изоформа похожа на изоформу b, которая также известна как юнктат.
- Исходная последовательность (и)
- AC067881, BC144362, BU623111, DN993915
- Консенсус CDS
- CCDS55236. 1
- UniProtKB / Swiss-Prot
- Q12797
- Связанные
- ENSP00000430245.1, ENST00000517903.5
- Консервированные домены (1) сводка
- pfam05279
Расположение: 14 → 295 - Asp-B-Hydro_N; N-концевая область аспартил-бета-гидроксилазы
- pfam05279
NM_001164752.2 → NP_001158224.1 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы h
См. Идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_001158224.1
Статус: ПЕРЕСМОТРЕН
- Описание
- Вариант транскрипции: этот вариант (8) представляет использование альтернативного промотора и 5 ‘UTR и использует отдельный стартовый кодон, использует отдельный шаблон сплайсинга 3’, в котором отсутствуют многие кодирующие экзоны, включает альтернативный экзон в кадре, отсутствует альтернативный экзон в рамке считывания и использует альтернативный сайт сплайсинга в рамке по сравнению с вариантом 1. Полученная изоформа (h) имеет более короткий и отчетливый N-конец, существенно более короткий и отчетливый C-конец и несколько внутренних отличий по сравнению с изоформа а.Эта изоформа похожа на изоформу b, которая также известна как юнктат.
- Исходная последовательность (и)
- AC067881, BC144363, BU623111, DN993915
- UniProtKB / TrEMBL
- B7ZM96
- Консервированные домены (1) сводка
- pfam05279
Расположение: 14 → 276 - Asp-B-Hydro_N; N-концевая область аспартил-бета-гидроксилазы
- pfam05279
NM_001164753.2 → NP_001158225.1 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы i
См. Идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_001158225.
1Статус: ПЕРЕСМОТРЕН
- Описание Вариант транскрипции
- : этот вариант (9) представляет использование альтернативного промотора и 5 ‘UTR и использует отдельный стартовый кодон, использует отдельный шаблон сплайсинга 3’, в котором отсутствуют многие кодирующие экзоны, включает альтернативный экзон в кадре и отсутствует альтернативный экзон в рамке считывания по сравнению с вариантом 1.Полученная изоформа (i) имеет более короткий и отчетливый N-конец, существенно более короткий и отчетливый С-конец и несколько внутренних отличий по сравнению с изоформой а. Эта изоформа похожа на изоформу b, которая также известна как юнктат.
- Исходная последовательность (и)
- AC067881, AK295528, BU623111, DN993915
- Консенсус CDS
- CCDS55235.1
- UniProtKB / Swiss-Prot
- Q12797
- Связанные
- ENSP00000429160. 1, ENST00000522835.5
- Консервированные домены (1) сводка
- pfam05279
Расположение: 14 → 253 - Asp-B-Hydro_N; N-концевая область аспартил-бета-гидроксилазы
- pfam05279
NM_001164754.2 → NP_001158226.1 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы j
Статус: ПЕРЕСМОТРЕН
- Описание
- Вариант транскрипта: В этом варианте (10) отсутствует альтернативный экзон в кадре и используется отчетливый 3′-шаблон сплайсинга, в котором отсутствуют многие кодирующие экзоны по сравнению с вариантом 1.Полученная изоформа (j) не имеет внутреннего сегмента и имеет существенно более короткий и отчетливый С-конец по сравнению с изоформой а.
- Исходная последовательность (и)
- AC067881, AK298577, BU623111, DA136318
- Консенсус CDS
- CCDS75746. 1
- UniProtKB / TrEMBL
- B4DQ07
- Связанные
- ENSP00000394013.4, ENST00000445642.6
- Консервированные домены (1) сводка
- pfam05279
Расположение: 43 → 291 - Asp-B-Hydro_N; N-концевая область аспартил-бета-гидроксилазы
- pfam05279
NM_001164755.2 → NP_001158227.1 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы k
См. Идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_001158227.1
Статус: ПЕРЕСМОТРЕН
- Описание
- Вариант транскрипта: В этом варианте (11) отсутствует альтернативный экзон в рамке и используется отчетливый 3′-шаблон сплайсинга, в котором отсутствуют многие кодирующие экзоны по сравнению с вариантом 1. Полученная изоформа (k) не имеет внутреннего сегмента и имеет существенно более короткий и отдельный С-конец по сравнению с изоформой а.
- Исходная последовательность (и)
- AC067881, BC025236, BU623111
- Консенсус CDS
- CCDS55237.1
- UniProtKB / Swiss-Prot
- Q12797
- Связанные
- ENSP00000429286.1, ENST00000518068.5
- Консервированные домены (1) сводка
- pfam05279
Расположение: 43 → 267 - Asp-B-Hydro_N; N-концевая область аспартил-бета-гидроксилазы
- pfam05279
NM_001164756.2 → NP_001158228.1 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы l
См.
Идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_001158228.1Статус: ПЕРЕСМОТРЕН
- Описание
- Вариант транскрипции: этот вариант (12) включает альтернативный экзон в рамке и использует отдельный 3′-шаблон сплайсинга, в котором отсутствует много кодирующих экзонов по сравнению с вариантом 1. Полученная изоформа (l) включает альтернативный сегмент и имеет существенно более короткий и отдельный С-конец по сравнению с изоформой а.
- Исходная последовательность (и)
- BC066929, BU741737, DA136318
- Консенсус CDS
- CCDS55238.1
- UniProtKB / Swiss-Prot
- Q12797
- Связанные
- ENSP00000368762.5, ENST00000379449.10
- Консервированные домены (1) сводка
- pfam05279
Расположение: 43 → 146 - Asp-B-Hydro_N; N-концевая область аспартил-бета-гидроксилазы
- pfam05279
NM_004318.
4 → NP_004309.2 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазыСм. Идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_004309.2
Статус: ПЕРЕСМОТРЕН
- Описание
- Вариант транскрипта: Этот вариант (1) представляет самый длинный транскрипт и кодирует самую длинную изоформу. Отдельный С-конец этой изоформы обладает ферментативной активностью, которая гидроксилирует бета-углерод аспарагиновой кислоты или остатков аспарагина в определенных доменах белков, подобных эпидермальному фактору роста, таких как протеин C, факторы свертывания крови VII, IX и X, а также факторы комплемента. C1R и C1S.Этот вариант широко выражен в тканях сердца, плаценты, скелетных мышц, почек и легких.
- Исходная последовательность (и)
- AC067881, AC0
, S83325, U03109 - Консенсус CDS
- CCDS34898.
1- UniProtKB / Swiss-Prot
- Q12797
- Связанные
- ENSP00000368767.4, ENST00000379454.9
- Консервированные домены (5) сводка
- TIGR02795
Расположение: 342 → 455 - tol_pal_ybgF; белок системы тол-пал YbgF
- pfam05279
Расположение: 43 → 310 - Asp-B-Hydro_N; N-концевая область аспартил-бета-гидроксилазы
- sd00006
Расположение: 458 → 482 - TPR; Повторение TPR [структурный мотив]
- pfam05118
Расположение: 591 → 744 - Asp_Arg_Hydrox; Аспартил / аспарагинил бета-гидроксилаза
- pfam13428
Расположение: 345 → 384 - TPR_14; Тетратрикопептидный повтор
NM_020164.
5 → NP_064549.1 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы eСм. Идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_064549.1
Статус: ПЕРЕСМОТРЕН
- Описание Вариант транскрипции
- : этот вариант (5) представляет использование альтернативного промотора и 5 ‘UTR, использует отдельный стартовый кодон, включает альтернативный экзон в кадре и использует отдельный шаблон сплайсинга 3’, в котором отсутствуют многие кодирующие экзоны, по сравнению с вариант 1.Кодируемая изоформа (е) имеет немного более короткий и отчетливый N-конец и частично перекрывается с N-концом изоформы а. Эта изоформа лишена каталитического домена и ферментативной функции изоформы а. Эта изоформа также упоминается как изоформа 1 юнктина и образует комплекс с кальсеквестрином, триадином и рецептором рианодина путем прямого взаимодействия в С-концевой части молекулы. Этот белок, по-видимому, стабилизирует комплекс и играет решающую роль в регуляции высвобождения кальция из саркоплазматического ретикулума. Этот вариант выражен в сердечной и скелетной мышцах.
- Исходная последовательность (и)
- AC067881, AF224469, BX102882, DN993915
- Консенсус CDS
- CCDS34900.1
- UniProtKB / Swiss-Prot
- Q12797
- Связанные
- ENSP00000373856.4, ENST00000389204.8
- Консервированные домены (1) сводка
- pfam05279
Расположение: 14 → 205 - Asp-B-Hydro_N; N-концевая область аспартил-бета-гидроксилазы
- pfam05279
NM_032466.4 → NP_115855.1 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы c
См. Идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_115855.
1Статус: ПЕРЕСМОТРЕН
- Описание
- Вариант транскрипции: В этом варианте (3) используется отдельный 3′-шаблон сплайсинга, в котором отсутствуют многие кодирующие экзоны, по сравнению с вариантом 1. Кодируемая изоформа (с), также известная как обман, идентична N-концевой и центральной области изоформа а. Поскольку в этом варианте транскрипта отсутствует альтернативный 3′-концевой экзон, который кодирует каталитический домен для изоформы a, изоформа c считается некаталитической изоформой.Этот вариант широко выражен в тканях сердца, плаценты, скелетных мышц, почек и легких.
- Исходная последовательность (и)
- AC067881, AF289489, BC025236, BU623111
- Консенсус CDS
- CCDS43742.1
- UniProtKB / Swiss-Prot
- Q12797
- Связанные
- ENSP00000348841. 5, ENST00000356457.9
- Консервированные домены (1) сводка
- pfam05279
Расположение: 43 → 310 - Asp-B-Hydro_N; N-концевая область аспартил-бета-гидроксилазы
- pfam05279
NM_032467.4 → NP_115856.1 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы d
См. Идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_115856.1
Статус: ПЕРЕСМОТРЕН
- Описание Вариант транскрипции
- : этот вариант (4) представляет использование альтернативного промотора и 5 ‘UTR, использует отдельный стартовый кодон и использует отдельный шаблон сплайсинга 3’, в котором отсутствуют многие кодирующие экзоны по сравнению с вариантом 1. Кодированная изоформа (d ) имеет немного более короткий и отчетливый N-конец и частично перекрывается с N-концом изоформы а, но лишен каталитического домена и ферментативной функции изоформы а. Эта изоформа также называется юнктином и образует комплекс с кальсеквестрином, триадином и рецептором рианодина путем прямого взаимодействия в С-концевой части молекулы. Этот белок, по-видимому, стабилизирует комплекс и играет решающую роль в регуляции высвобождения кальция из саркоплазматического ретикулума. Этот вариант выражен в сердечной и скелетной мышцах.
- Исходная последовательность (и)
- AC067881, AF224468, BX102882, DN993915
- Консенсус CDS
- CCDS34899.1
- UniProtKB / Swiss-Prot
- Q12797
- Связанные
- ENSP00000436188.1, ENST00000522603.5
- Консервированные домены (1) сводка
- pfam05279
Расположение: 14 → 190 - Asp-B-Hydro_N; N-концевая область аспартил-бета-гидроксилазы
- pfam05279
NM_032468.
5 → NP_115857.1 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы bСм. Идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_115857.1
Статус: ПЕРЕСМОТРЕН
- Описание Вариант транскрипции
- : этот вариант (2) представляет использование альтернативного промотора и 5 ‘UTR, использует отдельный стартовый кодон, включает альтернативный экзон в кадре и использует отдельный шаблон сплайсинга 3’, в котором отсутствуют многие кодирующие экзоны, по сравнению с вариант 1.Кодируемая изоформа (b) имеет общие остатки с центральной областью изоформы а. Эта изоформа лишена каталитического домена и ферментативной функции изоформы а. Изоформа b также называется юнктатом и находится как в эндоплазматическом, так и в саркоплазматическом ретикулуме. Свойства связывания кальция этой изоформы предполагают активную роль в процессе хранения и высвобождения кальция в эндоплазматическом ретикулуме. Этот вариант экспрессируется в сердце, головном мозге, поджелудочной железе, плаценте, легких, печени, почках и тканях скелетных мышц.
- Исходная последовательность (и)
- AC067881, AF306765, BU623111, DN993915
- Консенсус CDS
- CCDS47866.1
- UniProtKB / Swiss-Prot
- Q12797
- Связанные
- ENSP00000429954.2, ENST00000517847.6
- Консервированные домены (1) сводка
- pfam05279
Расположение: 14 → 296 - Asp-B-Hydro_N; N-концевая область аспартил-бета-гидроксилазы
- pfam05279
RefSeqs of Annotated Genomes: Homo sapiens Обновленная аннотация, выпуск 109.20211119
Гидроксилазная активность ASPH способствует метастазам гепатоцеллюлярной карциномы посредством пути перехода от эпителия к мезенхиме
https://doi. org/10.1016/j.ebiom.2018.05.004 Получить права и контентОсновные моменты
- •
Сверхэкспрессия ASPH способствовал развитию HCC внутрипеченочных и отдаленных метастазов in vivo.
- •
ASPH взаимодействует с виментином, способствуя миграции клеток HCC.
- •
Повышенная активность гидроксилазы в опухоли предсказывала худшие прогнозы пациентов с ГЦК.
Гепатоцеллюлярная карцинома имеет агрессивную инвазивность и высокую скорость метастазирования. Причина метастазирования в значительной степени неизвестна, и эффективное лечение все еще отсутствует. Хотя было продемонстрировано, что сверхэкспрессия ASPH увеличивает инвазивность гепатоцеллюлярной карциномы, необходимость его гидроксилазной активности остается нехарактеризованной. Здесь мы обнаружили, что активность гидроксилазы имеет решающее значение для стимулирования инвазивности гепатоцеллюлярной карциномы in vitro и метастазирования in vivo, а также связана с выживаемостью после операции.
Активность гидроксилазы ASPH играет важную роль в эпителиально-мезенхимальном переходе через взаимодействие с виментином. Наши результаты предполагают, что антагонисты ASPH могут быть многообещающими при разработке новой терапии.Abstract
Сверхэкспрессия аспартил (аспарагинала) -β-гидроксилазы (ASPH) способствует инвазивности гепатоцеллюлярной карциномы (HCC), но роль активности гидроксилазы ASPH в этом процессе еще предстоит определить. Таким образом, в текущем исследовании изучается роль активности гидроксилазы ASPH в передаче сигналов опухолевого генеза HCC и, в частности, в развитии метастазов.Сверхэкспрессия ASPH дикого типа, но не мутанта гидроксилазы, способствовала миграции клеток HCC in vitro, а также внутрипеченочным и отдаленным метастазам in vivo. Повышенная миграция и активация эпителиально-мезенхимального перехода (EMT) заметно отсутствовали в ответ на блокаду активности гидроксилазы. Виментин, регулятор EMT, взаимодействует с ASPH и, вероятно, опосредует влияние активности гидроксилазы ASPH на миграцию клеток.
Повышенная активность гидроксилазы в опухолевых тканях предсказывала худшие прогнозы пациентов с ГЦК.В совокупности гидроксилазная активность ASPH влияет на метастазирование ГЦК через взаимодействие с виментином и регулирование EMT. Таким образом, ASPH может быть многообещающей терапевтической мишенью для HCC.Ключевые слова
ASPH
Гидроксилаза
Гепатоцеллюлярная карцинома
Метастаз
Эпителиально-мезенхимальный переход
Виментин
Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)
76 9116
Информационные технологии — Моя школа Арнольда
Компьютерная лаборатория Школы общественного здравоохранения Арнольда
Наша команда также курирует главную компьютерную лабораторию школы Арнольд для студентов, которая расположен в Discovery Room 431.
В компьютерном классе 34 рабочих места и
два черно-белых лазерных принтера.Из-за Covid-19 будет зарезервировано 20 социально удаленных рабочих мест для личного общения использовать и 14 рабочих станций, доступных удаленно с помощью VMware Horizon.
Удаленно доступные лабораторные рабочие станции следует использовать только для запланированных курсов или когда нет других резервов для курсов в лаборатории .Запланированным курсам в это время может потребоваться доступ к удаленным рабочим станциям. Пожалуйста обратитесь к календарю бронирования, указанному ниже, чтобы узнать подходящее время для подключения.
Только те студенты, которые были предварительно авторизованы их инструкторами
с ASPH OIT можно будет подключиться. Если вы получили
сообщение о том, что вы не авторизованы.Инструкции по загрузке и настройке VMware Horizon на вашем компьютере см. В этой PDF: Удаленный доступ к компьютерной лаборатории Discovery
Текущий календарь резервирования лабораторий
Часы работы компьютерной лаборатории:
Компьютерная лаборатория теперь открыта весь день, 7 дней в неделю без штатных сотрудников GA.В лаборатория обычно закрывается каждый раз, когда университет закрывается на каникулы или по другим причинам. Закрытия будут заблокированы в календаре онлайн-бронирования, указанном выше.Заметки компьютерной лаборатории:
В настоящее время рабочие станции автоматически перезагружаются в полночь и блокируют клавиатуры. и мышей до 4:00, чтобы войти в период обслуживания обновлений безопасности. Вся работа, сохраненная на локальном диске C (папки «Рабочий стол», «Документы» и т. Д.), Потеряна ЛЮБОЙ время перезагрузки рабочей станции. Работу следует сохранять только на флэш-накопители USB, диск P на рабочей станции или временно в папки диска C только для загрузки в университетский OneDrive. Если в лаборатории возникла проблема, отправьте заявку в службу поддержки ИТ, войдя в в https: // support.asph.sc.edu или обратитесь за помощью к ИТ-специалисту в офисах DISC 423-427.Leica 18mm f / 3.8 ASPH
Домой Пожертвовать Новый Поиск Галерея Практические инструкции Ссылки Семинары О нас Контакт
Leica 18mm f / 3.8 ASPH
Super-Elmar-M 2 895 долларов (с 2009 г. по настоящее время)
© 2009 KenRockwell.com.Все права защищены.Введение Средство поиска спецификаций Производительность по сравнению с рекомендациями
Leica Super-Elmar-M 18 мм f / 3,8 ASPH 11 649 и 77 мм кольцо фильтра 14 484 (10,9 унций / 310 г). увеличить. Я бы купил его в Адораме; вы также можете получить его на Amazon. Когда вы пользуетесь этими ссылками, чтобы получать свои подарки, мне помогает продолжать добавлять материалы на этот сайт.
Спасибо! Кен.июнь 2009 г. Leica Обзоры фотоаппаратов Обзоры объективов Рекомендуемые объективы
Как использовать сверхширокоугольные линзы Как позволить себе все
Сравнительный тест Leica 18 мм и Zeiss 18 мм
Введение верх
Введение Средство поиска спецификаций Производительность по сравнению с рекомендациями
Это новый Leica 18mm f / 3.8 Супер-Эльмар-М великолепен. Он супер-острый и, что не менее важно, отлично себя чувствует. Его легко держать и носить с собой. Он кажется прочным, но точным и легким.
Новый Leica 18mm f / 3.8 ASPH — знаковый объект в линейке объективов Leica.
Впервые за более чем 50 лет Leica расширила диапазон фокусных расстояний фиксированных объективов для своих дальномерных камер серии M.
21 мм был самым широкоугольным фиксированным объективом, предлагаемым для Leica M с 1958 года.Этот 18-миллиметровый объектив впервые был предложен Leica для своих фотоаппаратов с фиксированным объективом шириной более 21 мм.
Эти 18 мм стали долгожданным дополнением после более чем 50 лет ожидания. (Leica предлагает зум 16-21 мм f / 4, но это зум, а не фиксированный объектив, и он не маневрен с фильтрами.)
Leica выбрала правильную дату в истории, чтобы объявить о выпуске первого в истории 18-мм объектива. Об этом объявлено не только 18-го числа, но и в феврале 2009 года. 2 x 9 = 18, как и (2) x 09 февраля. Вы должны отдать должное немцам за их тщательность; Фактически, есть слово, обозначающее немецкую тщательность: «Deutsche Gruendlichkeit».«
Не ложитесь спать допоздна, волнуясь, что f / 3.8 быстрее, чем f / 4; это меньше, чем на одну шестую остановки быстрее.
Для этого 18-миллиметрового фильтра требуется 77-миллиметровый фильтр для использования с пленкой, но только если вы купите специальный держатель фильтра.
Для использования с пленкой для цифровой или цветной печати, где вам обычно не нужны фильтры, вы справитесь с прилагаемой специальной блендой и без держателя фильтра.Leica также представила новый фиксированный 18-миллиметровый видоискатель в сочетании с новым 18-миллиметровым объективом.
Совместимость
Этот новый 18-миллиметровый объектив безупречно работает с любой камерой Leica M, когда-либо созданной, от M3 1954 года до сегодняшней Leica M7.Безупречно значит безупречно: в отличие от Nikon, абсолютно все работает так же хорошо, как и с любым другим объективом Leica M, произведенным с 1954 года.
(Старые полукадровые M8 и M8.2 отбрасывали половину изображения, поэтому на M8 этот 18-миллиметровый объектив дает только угол обзора, аналогичный тому, который 24-миллиметровый объектив видит на любой другой полнокадровой Leica.)
На M3 работает так же, как и на большинстве новых камер.
Вам необходимо использовать внешний видоискатель с каждой камерой Leica, поэтому использование M3 1954 года просто означает, что вам нужно измерять внешний вид, а не через объектив.Leica 18 мм и 77 мм адаптер для фильтра 14 484 на M7, с 18-мм искателем Zeiss. увеличить.
Характеристики с комментарием вверху
Введение Средство поиска спецификаций Производительность по сравнению с рекомендациями
Имя
Leica называет это LEICA SUPER-ELMARIT-M 18mm f / 3.8 ASPH, номер продукта 11649.
«Супер-Эльмарит» — это маркетинговое слово, означающее «f / 3,8».
Оптика верх
8 элементов в 7 группах.
Один асферический элемент с двумя асферическими поверхностями.
Фокусное расстояние вверху
18мм.
(Используется на старом M8.2, его угол обзора соответствует только тому, который 24-миллиметровый объектив видел бы на полнокадровом Leica.
Мембрана верхняя
Leica 18 / 3.8 . увеличить.
9 лезвий, что идеально.
Он должен давать великолепные 18-конечные солнечные звезды вместо хоккейных 8-конечных звезд 8-лопастных диафрагм.
Равномерные полутонные щелчки.
Уменьшается до f / 16.
Close Focus верх
2.3 фута (28 дюймов или 0,7 метра).
Максимальный коэффициент воспроизведения верхний
1: 34,6.
(Совсем не очень близко, но это не должно быть макрообъективом.)Leica 18 мм и 77 мм адаптер для фильтра 14 484 на M7, с 18-мм искателем Zeiss. увеличить.
Фильтр Резьба верхняя
Naked Leica 18mm SUPER-ELMARIT-M (без бленды). увеличить.
Leica 18 мм не имеет резьбы для фильтра. Есть только внешняя наружная резьба, на которую вы навинчиваете прилагаемую бленду или дополнительный 77-миллиметровый держатель фильтра 14 484. Вы навинчиваете держатель фильтра на объектив вместо бленды.
В держателе фильтра используется тот же «Deutsche Gruendlichkeit», который Leica использовала при создании даты объявления. Его сложнее прикрутить, чем фильтр, поэтому после установки создается впечатление, что объектив был построен с резьбой 77 мм.
Держатель фильтра фиксируется в правильном положении, чтобы вырезы находились наверху, как и положено, так что искатели блокируются как можно меньше.(Для старого M8 был специальный УФ / ИК-фильтр 13 422, который помещался между объективом и блендой объектива.)
Вытяжка верх
Leica 18 мм со стандартной блендой без фильтра. увеличить.
Включено.
Запатентованное резьбовое соединение прямоугольной формы.Это круто!
В нем есть вырез для минимизации блокировки (основного) искателя.
Материалы верх
Черный анодированный алюминий.
Размер верх
Удлинитель 48,8 мм (1,92 дюйма) от фланца, без кожуха.
Удлинитель на 2,27 дюйма (57,7 мм) от фланца, с кожухом.
Наибольший диаметр 2,40 дюйма (61 мм).
Вес верх
10.925 унций (309,7 г), измерено с фильтрующим кольцом 14 484 77 мм.
10,900 унций (309,0 г), измерено с прилагаемым капюшоном 12 643.
10.400 унций. (294,8 г) измеряется без одежды (без капюшона или держателя; без защиты передний элемент).
10,9 унции (310 г) указано.
Ура! Это на волосы светлее, чем 21 мм f / 2,8 ASPH.
Номера продуктов Leica вверху
18-миллиметровый объектив и специальная бленда 12 643: 11 649 (2895 долларов).
Запасной капюшон: 12 463 (220 $).
Держатель фильтра 77 мм: 14 484 (100 долларов США).
Затемняющая полоса представляет собой пластиковый лист и предварительно снимается.Специальный УФ / ИК-фильтр: 13 422 (220 долл. США).
18-миллиметровый Finder: 12022 (черный) (760 долларов), 12023 (серебристый) (760 долларов).
Объявлено верх
18 февраля 2009г.
Доставка с верх
912, 16 марта 2009 г.Цена верх
2895 долларов США.
18-мм искатель верх
Введение Средство поиска спецификаций Производительность по сравнению с рекомендациями
18-миллиметровый искательLeica — воплощение качества. Что бы вы ожидали от Leica?
Откройте коробку, и из нее выскользнет специальный держатель из темного поролона, в котором находится футляр из натуральной кожи.
Чехол пахнет тонкой кожей и отделан прекрасным велюром.Откройте кожаный чехол, и внутри окажется ваш новый искатель в собственном пластиковом пакете.
Выньте искатель, и он сделан как раньше, но лучше, потому что он многослойный. Он полностью металлический, с гравировкой.
18-миллиметровый искатель короче классического 21-миллиметрового искателя Leica. И 18-миллиметровые, и 21-миллиметровые искатели показывают изображение примерно того же размера, что и вы просматриваете через искатель, при этом 18-миллиметровый искатель показывает больший угол изображения при соответственно меньшем увеличении.
Вид хуже, чем у классических 21-миллиметровых искателей, потому что он усеян внутренними линиями кадра для 24-миллиметрового объектива, а прямоугольники не идут полностью. Вы получаете четыре больших угла вместо целой прямоугольной рамки.
Вид через искатель Leica 18 мм представляет собой прямоугольник в середине черного цвета с зеркальными линиями рамки 18 мм, очерчивающими видимое изображение.
За зеркальными линиями кадра нет изображения, но, как ни странно, в отличие от 21-миллиметровых искателей, есть более светлый серый прямоугольник, в котором находится активное изображение.В целом, это хорошее изображение, но искатель Zeiss 18 мм больше, четче и меньше отвлекает.
Ваш выбор будет очевиден: Leica Man подойдет не меньше, чем 18-миллиметровый искатель Leica, в то время как практичный фотограф выберет более крупное и четкое изображение Zeiss. Zeiss показывает увеличенное изображение, а также предполагает, что вы получите немного меньше в кадре, чем искатель Leica 18 мм (искатель Zeiss дает больше возможностей для маневра при ошибке кадрирования, в то время как Leica пытается показать больше того, что должно быть в вашем кадре) .18-миллиметровый искатель Zeiss также вдвое дешевле и сделан без кожаного футляра.
18-миллиметровый искатель Leica имеет оптическую конструкцию, аналогичную 21-миллиметровым искателям, и имеет такие же искажения: середина выпирает, но стороны снова прямые.
Вес: 1,225 унции. (35,7 г), черная модель, что, как ни странно, немного больше, чем классический металлический 21-миллиметровый искатель немного большего размера.
18-миллиметровые искатели Leica черного (12 022) и серебристого (12 023) цветов. увеличить.
18-миллиметровый искатель Leica выпускается в хромированном или черном цвете, оба имеют окуляры с резиновыми накладками.
Меня только смущает то, что на нем есть граффити в половину кадра (для полнокадровых снимков), которые мешают полнокадровым фотографам. В активной области изображения есть отметки, обозначающие, какая небольшая часть изображения будет снята на M8 или M8.2, но этот мусор мешает истинному (полнокадровому) фотографу Leica.
Если вы соглашаетесь на полурам (M8 и M8.
2), я бы вместо этого серьезно посмотрел на зум-видоискатель Leica 21-24-28 мм, у которого изображение намного больше, чем у этого фиксированного 18-мм искателя. Если вы снимаете полукадр, у вас нет поля зрения 18 мм, вы получаете только 24 мм, и поэтому вы захотите оставить зум-искатель установленным на 24 мм для использования с объективом 18 мм на M8.Для настоящего фотографа Leica (полнокадровый) я считаю специальный видоискатель Zeiss 18mm превосходным, потому что он не имеет полукадровых каракулей в поле зрения.
Leica Man принимает только лучшее.Leicaman использует Leica Universal Wide Finder, который имеет специальные настройки для 18 мм (и 24 мм, но Leica Men не довольствуется полукадром), а также пузырьковый уровень с подсветкой и настройки дискретного расстояния.
Производительность верх
Введение Средство поиска спецификаций Производительность по сравнению с рекомендациями
Эргономика и обращение
Этот 18 выглядит как еще один отличный эргономичный объектив Leica.
Похоже, что у него есть фирменный рычаг фокусировки одним пальцем, а кольцо диафрагмы выглядит так, как будто оно идеально расположено, а также упрощает настройку одним пальцем.
Посмотрим. Если бы Leica правильно подобрала адаптер фильтра, у нас был бы настоящий победитель.
Резкость
Критический анализ технических данных Leica говорит нам, что это будет чрезвычайно резкий объектив, даже широко открытый.Широкая диафрагма не такая уж и большая проблема, поскольку f / 3,8 (на самом деле f / 4) — это то место, где вы будете снимать большую часть времени при любом освещении, но не при дневном свете.
Характеристики резкости (кривые MTF) просто потрясающие. Этот объектив не становится более резким при остановке, поэтому для получения наилучших результатов обязательно следуйте моим рекомендациям по оптимальной диафрагме, чтобы избежать эффектов дифракции.
Искажение
Искажение незначительное, рейтинг -1.Максимум 8%.
Это намного хуже, чем у Zeiss 18mm с максимумом -1,0% и Leica 21mm f / 2.8 ASPH с максимумом -1,5%.
Объектив Contax G 21 мм намного лучше, его максимальное значение составляет -0,5%, и самым лучшим объективом из всех является Zeiss 21 мм f / 4,5 с искажением 0%, который можно использовать с Leica M.
Использование с фильтрами
Leica производит специальный фильтр 13 422 UV / IR для пользователей M8; Я не обсуждаю это здесь.
Чтобы использовать настоящие фильтры на пленке, такие как градиентные, тепловые фильтры и цветные фильтры для черно-белой пленки, вам понадобится адаптер для фильтров 14 484 77 мм, как я показал на большинстве своих фотографий.
Когда делаешь это, это туго.
Стандартный фильтр с крепежным кольцом толщиной 5 мм (без учета задней резьбы) — самое толстое, что не виньет.Фильтр во вращающемся держателе толщиной 7 мм или более, как ввинчиваемый градиент, начнет слегка виньетировать. С фильтром такой толщины вы можете увидеть небольшую виньетку на необработанной пленке, но с установленными слайдами проблем не возникнет.
Забудьте о сложении двух фильтров. Прости.
Призраки и вспышки
Понятия не имею, пока не получу один в руки. Эти и другие аспекты никогда не рассматриваются в спецификациях.
Использование на камерах с полукадром (M8, M8.2)
Глупо тратить большую часть этого объектива, отбрасывая лучшую часть изображения, стороны и углы, которые и составляют основу сверхширокоугольного объектива.
Я снимаю в полнокадровом формате RealRaw digital для наилучшего качества и особенно для получения широкоугольного изображения, за которое я заплатил.
Все, что вам нужно сделать, чтобы получить полнокадровые цифровые изображения из этого 18, — это сканировать в лаборатории все в процессе обработки. Я получаю файлы, эквивалентные полнокадровым 25-мегапиксельным датчикам, всего за 11,95 долларов за рулон от NCPS, который выполняет заказы по почте из любой точки на Земле.
Если вам нужна полнокадровая Leica M, любая Leica M, когда-либо созданная, даже самая старая модель M3 или очень недорогие M1, MD или MDa без видоискателя, подойдут идеально, поскольку вам в любом случае понадобится внешний искатель.Если вы сэкономите на камере без видоискателя, угадать расстояние фокусировки для сверхшироких объективов — тривиально, в противном случае дальномер сработает даже на M3 1954 года.
Если вы действительно хотите справиться с расходами и хлопотами, связанными с M8, зарядными устройствами и компьютерами, и потерять большую часть вашего изображения, вам также следует использовать специальный УФ / ИК-фильтр 13 422, чтобы компенсировать неадекватный внутренняя фильтрация M8 / 8.
2, чтобы ваши черные рекламные цвета выглядели правильно.Поскольку на M8 вы получите только среднюю (эквивалент 24 мм) часть 18-миллиметрового изображения, вам не понадобится 18-миллиметровый искатель.Все, что вам нужно, это 24-миллиметровый искатель, и для этого я бы посоветовал Leica 21-24-28-миллиметровый зум-искатель, так как он дает самое большое и яркое изображение.
по сравнению верх
Введение Средство поиска спецификаций Производительность по сравнению с рекомендациями
Давайте сравним его с собственным зумом Leica 16-21 мм, Leica 21mm f / 2.8 ASPH и Zeiss 18mm f / 4, сделанным в Японии.
За исключением Leica 21mm f / 2.8 ASPH, они взяты из опубликованных производителями данных и не подтверждены.
Рекомендации наверх
Введение Средство поиска спецификаций Производительность по сравнению с рекомендациями
Если хочешь ультра-
Не могу сказать, пока не получу один в свои горячие ручонки.
Исходя из того, что нам сообщает Leica, мне действительно нужен один из них для ночной съемки с 9-лепестковой диафрагмой.Исходя из Leica, мы можем быть уверены, что его оптика не имеет себе равных, но что действительно важно, так это:
1.) Видим ли мы нашу композицию с помощью 18-мм искателя Leica, Zeiss или универсального широкоугольного искателя Leica.
Я подозреваю, что любой из этих объективов достаточно длинный и достаточно толстый, чтобы фактическая съемка могла быть затруднительной, потому что объектив будет отображаться в нижней части изображения искателя. Это настоящая проблема с меньшими и менее широкими 21-миллиметровыми объективами.
2.) Фильтры. Если вы действительно собираетесь снимать этот объектив, а не просто держать его запертым в стеклянной витрине ваших коллекционеров, вам нужно быстро включать и выключать фильтры, и нужно одновременно включать как минимум два фильтра без виньетирования.
.Меня пугает то, что мне приходится покупать специальный фильтродержатель.
С 21-миллиметровым объективом Leica я могу использовать обычные 55-миллиметровые фильтры, а если мне нужно сложить два, я могу увеличить их до большего размера. 21-миллиметровая бленда опускается прямо на любой 55-миллиметровый фильтр, защищая как его, так и объектив.
Если фильтр используется не для жидкости, то 21 мм останется, а 18 мм — нет. Если фильтры не подходят для этого объектива, Zeiss 18mm будет гораздо лучшим объективом для реальной фотографии.
Если Leica правильно спроектировала держатель фильтра, он мог бы стать шедевром. В отличие от некоторых недавно представленных сверхтяжелых объективов, таких как 50 мм f / 0,95, этот 18 мм достаточно мал и достаточно легок, чтобы соответствовать духу настоящего фотографа Leica.
Этот 18-миллиметровый объектив является важной вехой как для коллекционеров, так и для фотографов.
Впервые за более чем 50 лет Leica расширила ассортимент своей системы Leica M.Так как размер и вес примерно такие же, как у вполне разумного 21 мм f / 2,8 ASPH, если искажения достаточно низки, а блокировка видоискателя и проблемы с фильтрами разумны, мне нужен один из этих 18-миллиметровых объективов без промедления. Я живу за сверхширокие углы, и, если этот объектив победит, он спасет меня от неуважения к Leica с объективом Zeiss 18mm стороннего производителя.
Единственное, что имеет значение в фотографии, — это быть в нужном месте в нужное время и знать, что ты делаешь.Если это не так, то объектив Tokina 17mm f / 3.5, который я купил в 1984 году за 150 долларов, по-прежнему будет давать изображения, практически неотличимые от этого нового объектива Leica.
Дополнительная информация
Технические данные: MTF, искажения и засветка
Leica USA Fluff Страница
Leica Glossy Illustrated Brochure (также на немецком языке)
Брошюра и рекламные фотографии забавны: они показывают только эту великолепную 18 мм f / 3.
8 сидит на полукадровой камере M8, на которой 18 мм — это совсем не сверхширокоугольный объектив. Углы обзора указаны для полнокадровой пленочной камеры Leica MP (и все фотографии в качестве примера были сняты), а не для M8 с сенсорным экраном. Хи хи! Маркетологи никогда не должны вводить своих потенциальных клиентов в заблуждение.ВИЛКА
Я поддерживаю свою растущую семью через этот сайт.
Если вы найдете это так же полезны, как книга, которую вам, возможно, пришлось купить, или семинар, который вы можете пришлось принять, не стесняйтесь помогать мне продолжать помогать всем.
Если вы получили свое снаряжение по одной из моих ссылок или помогли другим способом, вы — семья. Такие замечательные люди, как вы, позволяют мне постоянно добавлять на этот сайт. Спасибо!
Если вы еще не помогли, сделайте это, и подумайте о том, чтобы помочь мне подарком в размере 5 долларов.
Самым большим подспорьем является использование этих ссылок на Adorama, Amazon, B&H, Calumet, Ritz и J&R, когда вы получаете свои лакомства. Это вам ничего не стоит и очень помогает. В этих местах лучшие цены и лучший сервис, поэтому я пользовался ими еще до того, как появился этот сайт.Я рекомендую их всех лично.
Спасибо за чтение!
Кен
Домой Пожертвовать Новый Поиск Галерея Практические инструкции Ссылки Семинары О нас Контакты
Frontiers | ASPH регулирует остеогенную дифференцировку и клеточное старение BMSC
Введение
Остеопороз характеризуется уменьшением костной массы и дисфункцией костной микроархитектуры (Al Anouti et al., 2019; Ян и др., 2019). С прогрессирующим старением населения в целом возрастной остеопороз становится распространенным хроническим заболеванием в различных странах. Пожилые люди подвержены возрастному остеопорозу из-за потери костной массы и прочности, вызванной старением скелета (Li et al.
, 2015, 2018; Yu et al., 2018; Xiao et al., 2020). Связанная со старением скелетная потеря костной массы может быть прослежена до мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (BMSC). BMSC играют большую роль в формировании костей из-за их способности к самообновлению и дифференцировке нескольких линий, включая остеогенные линии (Li et al., 2018; Peng et al., 2019). Во время старения BMSCs проявляют сниженную способность к самообновлению и приверженности остеогенным клонам, что тем самым приводит к аберрантному возрастному формированию кости (Childs et al., 2015; Li H. et al., 2017).Клеточное старение относится к состоянию необратимой остановки клеточного цикла и различных клеточных изменений в ответ на различные стрессы (Childs et al., 2015). Этот процесс контролируется различными типами опухолевых супрессоров, такими как p16 INK4A , p15 INK4b , Rb и p21 CIP1 (Campisi and d’Adda di Fagagna, 2007; Childs et al., 2015; Li C. et al., 2017).
Сообщалось, что старение связано с повышенным клеточным старением. Накопление клеточного старения, в свою очередь, может ускорять старение организма и вносить вклад в фенотип старения (Childs et al., 2015). BMSCs начнут процесс старения рано, то есть преждевременное старение, под воздействием стресса. Предыдущие исследования также показали, что BMSC претерпевают клеточное старение во время старения скелета, а связанные с возрастом модуляторы могут вызывать или предотвращать преждевременное старение (Lin et al., 2014; Ли Х. и др., 2017; Чжоу и др., 2020).Аспартат-β-гидроксилаза, кодируемая ASPH , представляет собой мембранный белок типа II, который включает несколько доменов, в основном включающих N-концевой цитоплазматический домен, трансмембранный (TM) домен, Ca 2+ связывающий домен и C-концевые каталитические домены (Treves et al., 2000; Finotti et al., 2008). ASPH имеет различные изоформы из-за его обширного альтернативного сплайсинга. Самая длинная изоформа ASPH , содержащая С-концевой каталитический домен аспартил / аспарагинил-бета-гидроксилазы, может регулировать некоторые белки с помощью доменов, подобных эпидермальному фактору роста (EGF) (Dinchuk et al.
, 2000). На основании текущих исследований сообщается, что ASPH участвует в регуляции онкогенеза посредством пролиферации клеток, образования колоний и клеточного старения (Iwagami et al., 2016; Hou et al., 2018). Примечательно, что исследование геномной ассоциации (GWAS), проведенное Koller et al. (2010) описали SNP, расположенный близко к 3’-области ASPH. Они обнаружили, что этот SNP, вероятно, был связан с минеральной плотностью костей поясничного отдела позвоночника у женщин европейско-американского происхождения в пременопаузе (Koller et al., 2010). Кроме того, в некоторых исследованиях сообщалось, что ASPH участвует в регуляции различных сигнальных путей, таких как передача сигналов Wnt, передача сигналов Notch, передача сигналов IGF, передача сигналов IRS и так далее (Cantarini et al., 2006; Tomimaru et al., 2013 ; Iwagami et al., 2016; Hou et al., 2018). Отмечено, что эти сигнальные пути являются каноническими путями во время моделирования и ремоделирования костей (Malaguarnera and Belfiore, 2014; Tu et al. , 2015; Yang et al., 2017). Однако молекулярная сеть, организующая образование костей и клеточное старение BMSCs, опосредованное ASPH , все еще остается неясной.В этом исследовании мы сообщили, что уровень ASPH снижался с возрастом или старением. Интересно, что ASPH — самая длинная изоформа А, способствующая остеогенной дифференцировке BMSC, в то же время предотвращая процесс клеточного старения. Напротив, нокдаун ASPH ускорял клеточное старение, но подавлял остеогенную дифференцировку. Механически эти наблюдения могут быть связаны с аберрантной передачей сигналов Wnt. Взятые вместе, наше исследование выявило ASPH , способствующее процессу остеогенеза, в то же время ингибируя клеточное старение посредством регуляции Gsk3β-опосредованной передачи сигналов Wnt, что потенциально предоставило новое понимание потери костной массы, связанной с возрастом.
Материалы и методы
Фильтрация дифференциально экспрессируемых мРНК и биоинформатический анализ
Данные по экспрессии мРНК человека были загружены из Gene Expression Omnibus (доступ GEO: GEO35955).
Дифференциально экспрессируемые мРНК между группами среднего и пожилого возраста были отфильтрованы с использованием t -теста. Пакет R «limma» (Ritchie et al., 2015) применяется для нормализации данных и идентификации DEG. DEG сохраняли при настройке p = 0.01 и | logFC | = 2. Затем сохраненные гены были оценены на предмет функционального обогащения, включая термин биологических процессов GO (онтология генов) и путь KEGG (Киотская энциклопедия генов и геномов) с использованием пакета R «Clusterprofiler» (Yu et al., 2012). Все пробы интересующего гена ASPH были извлечены из исходных данных. Мы рассчитали экспрессию ASPH в разных кодирующих областях в соответствии с сайтами узнавания зондов. Затем его выражения в различных регионах были выведены в виде фигур скрипок с использованием t -теста.Коэкспрессия
ASPH с другими генамиНеобработанные данные экспрессии генов ASPH и RUNX2 , COL1A1 , GSK3B и CTNNB1 были загружены из проекта Cancer Genome Atlas (TCGA), программы Genotype Tissue Expression (GTEx) и Энциклопедия линии раковых клеток).
Корреляция Пирсона (r) и значение p были рассчитаны с использованием R и R Studio. Значение p было отмечено как «0», когда оно меньше 1 ∗ 10 –8 .BMSC Культура
BMSC мышей (MUBMX-01001; Cyagen Biosciences) культивировали в среде для роста мезенхимальных стволовых клеток мыши (MUBMX-
; Cyagen Biosciences). Для человеческих BMSC мы очистили от костного мозга участников, подвергшихся замене тазобедренного сустава. Пол этих испытуемых — мужской. Возраст молодых групп был 24, 28, 31, 27 и 32 соответственно. Возраст в старых группах был 75, 75, 78, 79 и 85 соответственно. Анализ qRT-PCR
Для анализа экспрессии мРНК общую РНК из культивированных клеток экстрагировали с использованием реагента Trizol (Takara).Тысячу нанограмм РНК подвергали обратной транскрипции в кДНК первой цепи с использованием набора для обратной транскрипции (Takara). РНК и кДНК для BMSC человека были собраны ранее. qPCR выполняли с использованием SYBR Green PCR Master Mix (Takara), и экспрессию мРНК нормализовали по эталонным генам GAPDH .
Вестерн-блот
Белок лизировали с использованием смеси RIPA, ингибитора протеазы (1: 100) и ингибитора фосфатазы (1: 100). Вестерн-блот выполняли согласно описанному ранее методу (Li et al., 2015). Первичные антитела: mAb кролика GSK-3β (№ 9315; CST), нефосфо (активное) β-катенин (Ser33 / 37 / Thr41) mAb кролика (№ 8814; CST), антитело к β-катенину (№ 9562; CST ), мышиное моноклональное антитело к бета-актину (# TA811000, ORIGENE), антитело к фосфо-GSK-3β (Ser9) (# 9336; CST) и альфа-тубулин (11224-1-AP; Proteintech) инкубировали в течение ночи при 4 ° C. , затем инкубировали с соответствующими вторичными антителами, конъюгированными с HRP, в течение 1 ч при комнатной температуре. Блоты визуализировали с использованием реагентов для обнаружения ECL.
Иммунофлуоресценция
Для иммунофлуоресценции клетки трижды промывали фосфатно-солевым буфером (PBS). Затем клетки фиксировали в 4% параформальдегиде в течение 15 минут с последующей пермеабилизацией и блокированием 7% FCS, 1% TritonX100 в PBS в течение 30 минут при комнатной температуре.
Первичные антитела общего β-катенина (# 9562; CST, 1: 200) и нефосфо (активного) β-катенина (Ser33 / 37 / Thr41) (# 8814; CST, 1: 800) инкубировали в течение ночи в 7% BSA в PBS в течение ночи при 4 ° C, а затем — Alexa Fluor R 488 Goat Anti-rabbit (Thermo Fisher Scientific, США) в разведении 1: 400, и, наконец, окрашивали и устанавливали среду для закрепления.Изображения визуализировали на микроскопе Olympus с помощью программного обеспечения cellSense Dimension.Трансфекция клеток
Asph siRNA, Gsk3b siRNA и отрицательный контроль (NC) были приобретены у Ribibio (Гуанчжоу, Китай). SiRNA трансфицировали в концентрации 100 нМ с помощью липофектамина RNAiMAX (Invitrogen, США) в соответствии с рекомендациями производителя. m Asph Конструкция pcDNA3.1-3xFlag-C (GenBank: NM_004318.4) была приобретена у YouBao Biology.Один микрограмм конструкции Asph (AAH) и отрицательный контроль трансфицировали в BMCS на лунку 6-луночного планшета с использованием Lipofectamine RNAiMAX (Invitrogen) в соответствии с рекомендациями производителя.
Анализ остеогенной дифференцировки и минерализации
Чтобы вызвать остеогенную дифференцировку BMSC, BMSC культивировали в 6-луночных планшетах по 2,5 × 106 клеток на лунку с остеогенной дифференцировкой мезенхимальных стволовых клеток (MUBMX-; Cyagen Biosciences). На 2-й день остеогенной дифференцировки клеточные лизаты гомогенизировали для анализа активности ЩФ путем спектрофотометрического измерения высвобождения п-нитрофенола с использованием набора для анализа щелочной фосфатазы (P0321S, Beyotime).На 7-й день остеогенной дифференцировки проводили окрашивание щелочной фосфатазой (окрашивание ALP) для оценки минерализации клеточного матрикса. Сначала мы трижды промывали клетки PBS, а затем 10% параформальдегидом в течение 5 минут. Затем клетки инкубировали в буфере для инкубации ALP (0,2 г барбитала натрия, 0,4 г сульфата магния, 0,2 г хлорида кальция и 0,3 г бета-глицерофосфата) при 37 ° C в течение 2 часов. Далее промывали клетки 2% хлористым кальцием и инкубировали с 2% нитратом кобальта в течение 5 мин.
Затем клетки инкубировали в сульфате аммония 1:80 в течение 10 с. На 21-й день остеогенной дифференцировки проводили окрашивание ализарином красным для оценки минерализации клеточного матрикса в соответствии с инструкциями производителя (MUBMX-; Cyagen Biosciences). Вкратце, клетки промывали трижды PBS, а затем 4% параформальдегидом в течение 30 минут. После трехкратной промывки PBS клетки окрашивали в растворе ализарина красным при 37 ° C в течение 5 мин. Окрашенные лунки визуализировали с помощью камеры (ILCE-5100, SONY).Высвобождение ализарина Red S из клеточного матрикса в раствор цетилпиридиния хлорида количественно определяли спектрофотометрией при 540 нм.Окрашивание β-галактозидазой
BMSC с интерференцией Asph siRNA были обнаружены с помощью набора для окрашивания старения β-галактозидазой в соответствии с инструкциями производителя (G1580, Solarbio Life Science). Вкратце, мы сначала приготовили рабочий раствор для окрашивания, который состоял из 10 мкл красителя A -галактозидазы, 10 мкл красителя B -галактозидазы, 930 мкл красителя C -галактозидазы и 50 мкл раствора X-Gal для каждой лунки.
Затем промывали планшеты с клетками PBS с последующей фиксацией 1 мл фиксирующего раствора для окрашивания β-галактозидазой при комнатной температуре в течение 15 мин. После удаления фиксирующего раствора планшеты трижды ополаскивали. Затем клетки инкубировали с 1 мл окрашивающего рабочего раствора в инкубаторе при 37 ° C в течение ночи. Наконец, пластины были визуализированы с помощью микроскопа Olympus.Окрашивание по Гимзе
BMSC с интерференцией Asph siRNA было обнаружено с помощью набора для окрашивания Giemsa в соответствии с инструкциями производителя (G4640, Solarbio Life Science).Вкратце, мы промывали планшеты с клетками PBS с последующей фиксацией с использованием 1 мл метанола в течение 2 минут. После удаления фиксирующего раствора планшеты трижды промывали PBS. Затем клетки инкубировали в 1 мл окрашивающего раствора в течение 15 мин. Наконец, CFU были записаны с помощью камеры (ILCE-5100, SONY).
Статистический анализ
Данные были импортированы в Excel, масштабированы и нормализованы до соответствующих элементов управления.
Непарные двусторонние тесты Стьюдента t были выполнены для сравнения двух групп и однофакторный дисперсионный анализ ANOVA для сравнения внутри нескольких групп.Критические значения P были скорректированы Бонферрони и выражены следующим образом: ns: Нет значимости, ∗ P <0,05, ∗∗ P <0,01, ∗∗ P <0,001, # ## P <0,001.Результаты
ASPH является возрастным геном в BMSCЧтобы определить возможные причины возрастной потери костной массы, мы проанализировали дифференциально экспрессируемые гены GSE35955 с использованием программного обеспечения R и R studio (версия 3.5) (Исходные данные были получены из общедоступного хранилища GEO, которое включает людей среднего и пожилого возраста) (Benisch et al., 2012). Во-первых, мы нормализовали экспрессию всех образцов (рис. 1А). Во-вторых, мы сохранили почтительно экспрессируемые зонды, установив отсечку для параметра adjust p -value равным 0,01 и LogFC (Log FoldChange) равным 2,0, соответственно.
Всего сохранено 152 зонда (включая 127 генов). Из 152 дифференциально экспрессируемых зондов экспрессия 116 зондов снизилась, в то время как экспрессия 36 зондов увеличилась в группах пожилого возраста по сравнению с группой среднего возраста (Фигуры 1B, C).В-третьих, мы проанализировали 10 лучших обогащенных сигналов с использованием трех суб-онтологий (BP для биологического процесса, MF для молекулярной функции и CC для клеточного компонента) биологических процессов GO и анализа пути KEGG (рисунки 1D, E). Анализ KEGG показал, что дифференциально экспрессируемые гены были в значительной степени обогащены клеточным старением, устойчивостью к ингибитору тирозинкиназы EGFR и некоторым развитием рака (рис. 1E). В-четвертых, мы провели поиск потенциальных ролей всех генов в формировании костей, задав «Старение ИЛИ старение», «Кость» и «Символ гена (из дифференциально экспрессируемых генов)» в качестве ключевых слов в базе данных Pubmed.Неожиданно мы обнаружили, что ASPH связан с клеточным старением при раке и, возможно, участвует в здоровье костей. Таким образом, мы выбрали « ASPH » в качестве интересующего нас гена для проведения дальнейших исследований.Рисунок 1. Анализ дифференциально экспрессируемых генов в BMSC от людей среднего и пожилого возраста, добытых из GSE35955. (A) Коробчатая диаграмма профилирования RNA-seq нормализованной экспрессии мРНК в BMSC. (B) Volcano График нормализованной экспрессии мРНК в BMSC. (C) Тепловая карта экспрессии мРНК в BMSC. | Сложить изменение | > 2, отрегулируйте p <0,01. (D) GO (Онтология гена) анализ дифференциально экспрессируемого гена в двух группах. (E) KEGG (Киотская энциклопедия генов и геномов) анализ дифференциально экспрессируемого гена в двух группах. p <0,05.
ASPH способствует остеогенной дифференцировкеПредыдущие исследования показали, что ASPH может быть связан с минеральной плотностью костей (Koller et al., 2010; Mantila Roosa et al.
, 2011; Benisch et al., 2012). Чтобы выяснить, играет ли ASPH роль в формировании костей, мы проанализировали коэкспрессию ASPH с остеогенными маркерами, такими как RUNX2 и COL1A1 в различных базах данных. В большинстве нормальных тканей из GTEX корреляции ASPH с RUNX2 и COL1A1 были положительными, что представлено в верхнем правом углу рисунков 2A, E. ASPH имел умеренную положительную корреляцию с RUNX2 в 7858 тканях (Pearson r = 0.4, p = 0) (Рисунок 2B) и, в частности, в 70 тканях костного мозга (Pearson r = 0,51, p = 0) (Рисунок 2C). Аналогичным образом, ASPH имел положительную корреляцию с COL1A1 в 7858 тканях (Pearson r = 0,48, p = 0) (рис. 2F), хотя не продемонстрировал значимой корреляции с RUNX2 в костном мозге. (Рисунок 2G). В 7801 опухолевой ткани ASPH также показал положительную корреляцию с RUNX2 , а также COL1A1 (рисунки 2D, H). Более того, в 1019 линиях раковых клеток была положительная корреляция между ASPH и RUNX2 (Рисунок 2I) или COL1A1 (Рисунок 2J). Примечательно, что 26 линий клеток, связанных с костями, не показали значительной коэкспрессии между ASPH и RUNX2 (рис. 2K), но показали положительную корреляцию между ASPH и COL1A1 (Pearson r = 0,74, p = 0) (Рисунок 2L). В совокупности эти результаты частично подтверждают, что ASPH положительно коррелировал с этими двумя генами (Рисунки 2A – L).Рисунок 2. Коэкспрессия ASPH с остеогенными маркерами. (A – D) Корреляция ASPH с RUNX2 при экспрессии в нормальных тканях (A, B) , костном мозге из нормальных тканей (C) и образцах рака (D) , на основе по данным баз данных Genotype Tissue Expression (GTEx) и The Cancer Genome Atlas (TCGA) соответственно. (E – H) Корреляция ASPH с COL1A1 при экспрессии в нормальных тканях (E, F) , костном мозге из нормальных тканей (G) и образцах рака (H) , на основе данные из GTEx и баз данных соответственно.
(I, J) Корреляция ASPH с RUNX2 в экспрессии в линиях раковых клеток (I) и в линиях раковых клеток, связанных с костями (J) , на основе данных из Энциклопедии линий раковых клеток ( CCLE). (K, L) Корреляция ASPH с COL1A1 в экспрессии в линиях раковых клеток (K) и в линиях раковых клеток, связанных с костями (L) , на основе данных CCLE. Коэффициент корреляции (r) и значение P были рассчитаны с помощью корреляционного анализа Пирсона.Обратите внимание, что каждая точка представляет один тип ткани (A – C, E – G) или один тип рака (D, H) или одну клеточную линию (I – L) .ASPH представляет собой трансмембранный белок 85KD типа II, который может генерировать различные варианты сплайсинга, включая аспартил-бета-гидроксилазу (AAH), юнктин и юнктат (рис. 3А). Самая длинная изоформа a (GenBank: NM_004318.4) состоит из нескольких доменов, в основном включающих N-концевой цитоплазматический домен, трансмембранный (TM) домен, связывающий домен Ca 2+ и C-концевые каталитические домены.
Мы извлекли экспрессию всех зондов « ASPH » и классифицировали их на три типа в соответствии с позициями нацеливания зонда (например, экзон 14-25 с С-концевым каталитическим доменом, экзон 4-13 со связыванием Ca 2+ ). домен, и экзон 1–3 с положительно заряженным доменом) (рис. 3А). Затем BMSC индуцировали средой для остеогенной дифференцировки и тестировали ее экспрессию различных доменов ASPH . Данные qRT-PCR показали повышенную экспрессию мыши Asph во время остеогенеза BMSC (фигура 3B).Затем BMSC трансфицировали siRNA Asph мыши, нацеленной на каталитический домен (фиг. 3C), с последующей индукцией остеогенной средой для дифференцировки. Данные qRT-PCR предполагают, что подавление экспрессии Asph сопровождалось снижением остеогенных маркеров на 7-й день, включая Runx2 и Col1a1 (рис. 3E). Кроме того, запоминание матрикса, измеренное по активности щелочной фосфатазы (ЩФ), окрашиванию ЩФ и окрашиванию ализариновым красным, показало, что снижение экспрессии AAH привело к нарушению остеогенеза в BMSC (Фигуры 3F – I). Напротив, BMSC трансфицировали конструкцией самой длинной мышиной изоформы Asph , вариант 1 (GenBank: NM_023066.3) (фигура 3D) с последующей индукцией средой для остеогенной дифференцировки. qRT-PCR предположила, что повышающая регуляция экспрессии Asph коррелировала с увеличением остеогенных маркеров, Runx2 и Col1a1 (рис. 3J). Точно так же запоминание матрикса, измеренное по активности ALP, окрашиванию ALP и окрашиванию Alizarin Red, показало, что избыточная экспрессия Asph приводила к усилению остеогенеза в BMSC (Фигуры 3K – N).Рисунок 3. ASPH способствует остеогенной дифференцировке. (A) схематический график для изоформ ASPH . (B) qRT-PCR анализ экспрессии областей ASPH во время остеогенной дифференцировки. (C) qRT-PCR анализ истощения AAH. (D) qRT-PCR анализ сверхэкспрессии AAH. (E) qRT-PCR анализ относительных уровней Runx2 и Col1a1 в BMSC с истощением AAH.
(F) Анализ активности ЩФ в BMSC с истощением AAH. (G, H) Типичные изображения окрашивания щелочной фосфатазой (ALP) (G) и окрашивания ализарином красным S (H, I) в BMSC с истощением AAH. (J) qRT-PCR анализ относительных уровней Runx2 и Col1a1 в BMSC со сверхэкспрессией AAH. (K) Анализ активности ЩФ в BMSC со сверхэкспрессией AAH. (L, M) Типичные изображения окрашивания ALP (L) и окрашивания Alizarin Red S (M, N) в BMSC со сверхэкспрессией AAH.Эти эксперименты были повторены трижды. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение. * P <0,05, *** P <0,001.Удаление
ASPH приводит к преждевременному старению BMSCASPH , как известно, участвует в клеточном старении при гепатоцеллюлярной карциноме и глиомах (Iwagami et al., 2016; Sturla et al., 2016). Чтобы понять, является ли ASPH геном, связанным с клеточным старением в BMSC, мы вычислили среднюю экспрессию ASPH и экспрессию различных областей ASPH (дополнительная таблица 1; Peng et al.
, 2020а). Результат показал, что ASPH был ниже у людей пожилого возраста, чем у людей среднего возраста (Рисунок 4A). Экзон 4-13 и экзон 14-25 ASPH уменьшались с возрастом в двух группах. Однако экспрессия экзона 1–3, локализованная в общей области различных изоформ ASPH , была стабильной (рис. 4В). Затем мы собрали человеческие BMSC (hBMSC) разного возраста и протестировали их экспрессию ASPH в разных регионах. Как и ожидалось, по сравнению с возрастной группой (возраст от 75 до 90), молодая группа (возраст от 24 до 32) показала более высокую экспрессию более длинных изоформ ASPH (Рисунок 4C).Кроме того, мы протестировали экспрессию Asph в BMSC молодых мышей (пассаж 0) и стареющих BMSC мыши (пассаж 5). Соответственно, экспрессия более длинных изоформ Asph была ниже в стареющих BMSC, чем в молодых BMSC (фиг. 4D). Эти наблюдения предполагают, что старение подавляет экспрессию Asph . Чтобы дополнительно проверить эту гипотезу, мы провели серию функционального анализа. Результаты qRT-PCR продемонстрировали, что экспрессия Asph заметно снижалась вместе с клеточным старением (рис. 4E).Напротив, связанная со старением экспрессия p16 положительно коррелировала со старением клеток (рис. 4E). Кроме того, нарушение репликативной способности наблюдалось в группе, трансфицированной Asph siRNA (фиг. 4F). Колонии КОЕ, полученные при окрашивании по Гимзе, дополнительно продемонстрировали ингибирование пролиферации клеток в BMSC, которым мешала миРНК Asph (фигура 4G). Результаты qRT-PCR показали, что истощение Asph способствует развитию маркеров старения, таких как экспрессия p15, p16 и p21 в BMSC (рисунки 4H – J).Соответственно, окрашивание связанной со старением β-галактозидазой показало, что дефицит Asph способствует клеточному старению (рис. 4К).Рисунок 4. Дефицит ASPH ускоряет клеточное старение в BMSC. (A) Средняя экспрессия ASPH в BMSC от людей среднего и пожилого возраста (необработанные данные были получены из GSE35955).
ASPH регулирует сигнал Wnt, опосредованный Gsk3β (B) Средняя экспрессия различных областей ASPH в BMSC от людей среднего и пожилого возраста (необработанные данные были получены из GSE35955). (C) Экспрессия изоформ ASPH в BMSC от молодых и старых людей. (D) Экспрессия изоформ Asph в молодых или стареющих BMSC. (E) Отрицательная корреляция экспрессии AAH и p16 во время пассирования (P1 – P5) BMSC. (F) Удвоения BMSC интерферируют с миРНК AAH in vitro . (G) Окрашивание по Гимзе колоний CFU-F BMSC из BMSC вмешивалось в siRNA AAH in vitro . (H – J) Экспрессия p15 (H) , p16 (I) и p21 (J) в BMSC с истощением AAH. (K) Типичные изображения окрашивания SA-β-Gal BMSC в Asph siRNA, трансфицированных и контрольной группе. Масштабная полоса = 100 мкм. Эти эксперименты были повторены трижды. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение. * P <0,05, *** P <0,001, ### P <0,001.Хорошо известно, что Gsk3β и β-catenin играют важную роль в формировании кости.Основываясь на участии ASPH в передаче сигналов Wnt и клеточном старении при различных формах рака, мы предположили, что ASPH участвует в формировании костей и клеточном старении посредством регуляции Gsk3β и β-катенина (Iwagami et al., 2016; Peng et al., др., 2020b). Таким образом, мы проанализировали коэкспрессию ASPH с GSK3B и CTNNB1 в базах данных GTEX, TACC и CCLE. Интересно, что анализ показал, что ASPH имеет значительные положительные корреляции в экспрессии мРНК с GSK3B и CTNNB1 в большинстве нормальных / опухолевых тканей (Фигуры 5A, B, D, E).Кроме того, ASPH имеет умеренную или сильную корреляцию с GSK3B и CTNNB1 в нормальных тканях, включая костный мозг из базы данных GTEX (таблицы 1, 2). В линиях костных раковых клеток ASPH имеет значительную корреляцию с GSK3B (Pearson r = 0,50, p = 0,01) (Рисунок 5C) и CTNNB1 (Pearson r = 0,54, p = 0) (Рисунок 5F).
В соответствии с этими корреляциями, экспрессия GSK3B и CTNNB1 показала значительное снижение BMSCs с истощением Asph (Фигуры 5G – O).Отношение фос-Ser9 GSK3β к общему количеству Gsk3β увеличилось в BMSC, трансфицированных Asph siRNA (фиг. 5J). Ингибирование Asph ведет к подавлению общего β-катенина, а также активного β-катенина (рисунки 5K – O). Соответственно, клетки, трансфицированные миРНК Asph , показали преимущественно пониженное распределение белка β-катенина как в цитоплазме, так и в ядре (рис. 6А). Иммунофлуоресцентный анализ также показал, что ингибирование Asph улучшает распределение активного β-катенина в цитоплазме (фиг. 6В).Взятые вместе, эти результаты позволяют предположить, что Asph , возможно, регулирует передачу сигналов Gsk3β / β-catenin, внося вклад в формирование костей и предотвращая клеточное старение (Figure 7).Рисунок 5. ASPH регулирует Gsk3β и β-катенин.
(A – C) Коэкспрессия ASPH с GSK3B при экспрессии в нормальных тканях (A) , образцах рака (B) и клеточных линиях, связанных с костями (C) , на основе по данным из баз GTEx, TCGA и CCLE соответственно. (D – F) Коэкспрессия ASPH с CTNNB1 при экспрессии в нормальных тканях (D) , образцах рака (E) и линиях костных клеток (F) , на основе по данным из баз GTEx, TCGA и CCLE соответственно. Коэффициент корреляции (r) и значение P были рассчитаны с помощью корреляционного анализа Пирсона. Обратите внимание, что каждая точка представляет один тип ткани (A, D) или один тип рака (B, E) . Красные точки обозначают ткань костного мозга. (G) qRT-PCR анализ GSK3B и CTNNB1 в BMSC интерферирует с Asph siRNA in vitro . (H) Вестерн-блоттинг-анализ уровней общего GSK3β и фос-Ser9 GSK3β в BMSC, трансфицированных siRNA Asph . (I) Отношение общего Gsk3β к α-тублину в BMSC, трансфицированных siРНК Asph . (J) Отношение фос-Ser9 GSK3β (pS9 GSK3β) к общему количеству GSK3β в BMSC, трансфицированных siРНК Asph . (K) Вестерн-блот-анализ уровней общего β-катенина (t-β-Cat) в BMSC, трансфицированных siRNA Asph . (L) Вестерн-блот-анализ уровней активного β-катенина [нефосфо-β-катенин (Ser33 / 37 / Thr41): не-p-β-Cat] в BMSC, трансфицированных siRNA Asph . (M) Отношение общего β-катенина к β-актину в BMSC, трансфицированных siRNA Asph . (N) Отношение активного β-катенина к β-актину в BMSC, трансфицированных siRNA Asph . (O) Отношение активного β-катенина к общему β-катенину в BMSC, трансфицированных siRNA Asph . Эти эксперименты были повторены 3 раза. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение. * P <0,05, *** P <0,001.Таблица 1. Коэкспрессия ASPH с GSK3B .
Таблица 2. Коэкспрессия ASPH с CTNNB1 .
Рисунок 6. Субклеточная локализация общего и активного β-катенина. (A) Субклеточная локализация общего белка β-катенина в BMSC, трансфицированных siRNA Asph . Ядра, DAPI (синий), общий β-катенин (зеленый). (B) Субклеточная локализация активного белка β-катенин [нефосфат-β-катенин (Ser33 / 37 / Thr41)] в BMSC, трансфицированных siRNA Asph . Ядра, DAPI (синий), активный β-катенин (зеленый). Масштабная линейка 250 мкм.
Рисунок 7. Схематическое изображение ASPH , регулирующего клеточное старение и остеогенную дифференцировку BMSC во время старения. Низкая экспрессия ASPH сдерживает накопление и активацию Gsk3β и β-катенина для поддержания способности к самообновлению и остеогенной дифференцировке. У пожилых людей уменьшение ASPH сопровождается клеточным старением и нарушением остеогенной дифференцировки BMSC.
Обсуждение
Остеогенез и клеточное старение BMSC играют большую роль в формировании кости (Qadir et al., 2020). В этом исследовании наши данные показали, что ASPH — самая длинная изоформа, способствующая остеогенезу, одновременно подавляя клеточное старение, что указывает на то, что это потенциально приводит к повышенной способности к образованию кости. Механически ASPH модулировал накопление и активацию Gsk3β и β-катенина. В целом, наше исследование показало, что ASPH был зависимым от возраста модулятором для регулирования остеогенной дифференцировки и старения в BMSC (рис. 6).
Аспартат-β-гидроксилаза ( ASPH ) представляет собой мембранный белок типа II, который состоит из нескольких доменов, таких как N-концевой цитоплазматический домен, трансмембранный домен и C-концевой каталитический домен (Finotti et al., 2008). Путем интеллектуального анализа данных в базе данных GEO мы обнаружили, что некоторые гены дифференциально экспрессируются у субъектов среднего возраста по сравнению с субъектами пожилого возраста.
С помощью набора критериев фильтрации, описанных в разделе «Результаты», мы, наконец, предположили, что ген ASPH частично участвует в формировании кости. ASPH связан с регуляцией разборки белковых комплексов и регуляцией деполимеризации белков (Lee et al., 2012), что было представлено в 10-ти лучших передачах сигналов посредством анализа Go (Figure 1D).Кроме того, анализ KEGG показал, что дифференциально экспрессируемые гены обогащены клеточным старением, устойчивостью к ингибитору тирозинкиназы EGFR и некоторым развитием рака. Эти наблюдения дали нам некоторые ключи к разгадке того, что ASPH может участвовать в моделировании костей посредством регулирования клеточного старения.Накопленные данные показали, что Asph высоко экспрессируется во время эмбриогенеза, что имеет решающее значение для поддержания миграции клеток и развития органов (Treves et al., 2000; Махмуд и др., 2010; Hou et al., 2018). Патель и др. (2014) выполнили полную гибридизацию in situ Asph на эмбриональных эмбрионах мыши 11.
5 (E11.5) и E12.5. Они обнаружили сильную экспрессию Asph в морде, конечностях и глазах (Patel et al., 2014). На сегодняшний день установлено, что мутаций ASPH , выявленных у пациентов, связаны с синдромом Трабулси, который характеризуется диморфизмом лица, дислокацией хрусталика, аномалиями переднего сегмента и спонтанными фильтрующими пузырьками (OMIM: 601552) (Patel et al., 2014; Chandran et al., 2019), но не касается аномальной костной массы. Нокаутные мыши Asph также реплицировали сходные фенотипы с этими пациентами (Dinchuk et al., 2002; Yuan et al., 2007; Patel et al., 2014). Однако Пегги и др. продемонстрировали, что ASPH дифференциально экспрессируется в hBMSC и, как полагают, связан с МПК и риском перелома костей (Benisch et al., 2012). Результаты GWAS предполагают, что мутация, произошедшая в 3’-области ASPH , может быть связана с костной массой (Koller et al., 2010). Кроме того, предыдущее исследование показало, что ASPH играет важную роль в других ключевых сигнальных путях, таких как передача сигналов Wnt, передача сигналов Notch и т. Д., Которые все тесно вовлечены в формирование кости (Tomimaru et al., 2013; Hou et al. , 2018). Как и ожидалось, наше исследование показало, что ASPH был важным модулятором во время остеогенеза. Корреляционный анализ показал, что ASPH имеет положительную корреляцию с остеогенными маркерами. Экспрессия Asph также возрастала во время остеогенной дифференцировки.Более того, истощение Asph ингибировало остеогенную дифференцировку, тогда как сверхэкспрессия Asph способствовала остеогенной дифференцировке. Тем не менее, Mantila Roosa et al. (2011) предположили, что Asph подавлялась во время формирования матрицы, что не согласуется с нашими результатами. В этом исследовании стабильная экспрессия в общей области ASPH (экзон 1-3) и сниженная экспрессия в экзоне 4-25 были показаны на рисунке 3B, что указывает на то, что юнктин увеличивается во время старения и старения.Таким образом, мы подозревали, что различных изоформ ASPH могут быть вовлечены в один и тот же процесс с противоположной ролью.Дальнейшее исследование показало, что дефицит Asph в BMSC приводит к дисфункции остеогенеза и клеточного старения. Напротив, сверхэкспрессия самого длинного варианта 1 Asph в BMSCs восстанавливает способность к остеогенной дифференцировке и предотвращает клеточное старение. Сообщалось, что Gsk3β регулируется ингибитором ASPH при гепатоцеллюлярной карциноме (Iwagami et al., 2016). Кроме того, Gsk3β может фосфорилировать сайты β-catenin на сайтах Thr41 / Ser37 / Ser33 с последующей деградацией β-catenin (Wu and Pan, 2010; Peng et al., 2020b). Gsk3β-опосредованная передача сигналов Wnt может способствовать формированию костей и предотвращать клеточное старение (Ye et al., 2007; Seo et al., 2008; Gillespie et al., 2013). Таким образом, мы исследовали, регулирует ли ASPH остеогенную дифференцировку и клеточное старение в BMSC посредством регуляции Gsk3β или β-катенина. Следует отметить, что положительные корреляции ASPH с GSK3B и CTNNB1 были обнаружены в нормальных тканях, раковых тканях, а также в линиях раковых клеток.
Кроме того, мы подтвердили эти положительные корреляции in vitro . Дефицит Asph ингибировал накопление Gsk3β. Тем не менее, нефосфорилирование β-катенина по Thr41 / Ser37 / Ser33 уменьшилось, что объясняет подавление общего β-катенина. Иммунофлуоресцентный анализ также подтвердил подавление передачи сигналов Wnt.Следует отметить, что предыдущие исследования показали, что относительно низкий уровень экспрессии ASPH в нормальных зрелых тканях, в то время как обильная экспрессия ASPH в различных злокачественных опухолях (Lavaissiere et al., 1996; Lin et al., 2019). Таким образом, ASPH считается потенциальной терапевтической мишенью для различных видов рака (Shimoda et al., 2012; Dong et al., 2015; Sturla et al., 2016). Однако, согласно нашим текущим данным in vitro , он предположил, что лечение ингибитором ASPH у онкологических пациентов должно быть обеспокоено из-за их потенциальных рисков потери костной массы или перелома костей.
Заявление о доступности данныхВ данном исследовании были проанализированы общедоступные наборы данных.Эти данные можно найти здесь: база данных GEO (регистрационный номер: GSE35955; https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?acc~=~GSE35955).
Заявление об этике
Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены этическим комитетом больницы Xiangya Центрального Южного университета. Пациенты / участники предоставили письменное информированное согласие на участие в этом исследовании. Исследование на животных было рассмотрено и одобрено этическим комитетом больницы Сянъя Центрального Южного университета.
Авторские взносы
HP разработала это исследование, провела большинство экспериментов и написала рукопись. QG, TS, YX, T-JJ и L-JG помогли собрать образцы. MW руководил экспериментами, анализировал результаты и редактировал рукопись. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.
Финансирование
Работа поддержана грантом № 81873670 Национального фонда естественных наук Китая (NSFC).
Конфликт интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарности
Мы благодарим профессора Стивена П. Робертсона и доктора Зандру А. Дженкинс из Университета Отаго за помощь в формировании гипотезы.
Дополнительные материалы
Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fcell.2020.00872/full#supplementary-material
Сноски
Список литературы
Аль Анути, Ф., Таха, З., Шамим, С., Халаф, К., Аль-Кааби, Л., и Альсафар, Х. (2019). Понимание парадигм остеопороза: от генетики до биомеханики. Bone Rep. 11: 100216. DOI: 10.1016 / j.bonr.2019.100216
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Benisch, P., Schilling, T., Klein-Hitpass, L.
, Frey, S.P., Seefried, L., Raaijmakers, N., et al. (2012). Профиль транскрипции популяций мезенхимальных стволовых клеток при первичном остеопорозе отличается и демонстрирует сверхэкспрессию остеогенных ингибиторов. PLoS One 7: e45142. DOI: 10.1371 / journal.pone.0045142PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Кантарини, М. К., де ла Монте, С. М., Панг, М., Тонг, М., Д’Эррико, А., Тревизани, Ф. и др. (2006). Сверхэкспрессия аспартил-аспарагил-β-гидроксилазы в гепатоме человека связана с активацией инсулиноподобного фактора роста и механизмами передачи сигналов notch. Гепатология 44, 446–457. DOI: 10.1002 / hep.21272
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Чандран, П., Чермакани П., Венкатараман П., Тилагар С. П., Раман Г. В. и Сундаресан П. (2019). Новая мутация с гомозиготной делецией 5 п.н. в гене ASPH ассоциирована с синдромом Трабулси. Офтальм. Genet. 40, 185–187. DOI: 10.1080 / 13816810.
2019.1605390PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Чайлдс, Б. Г., Дурик, М., Бейкер, Д. Дж., И ван Дерсен, Дж. М. (2015). Клеточное старение при старении и возрастных заболеваниях: от механизмов к терапии. Нац.Med. 21, 1424–1435. DOI: 10,1038 / нм. 4000
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Динчук, Дж. Э., Фохт, Р. Дж., Келли, Дж. А., Хендерсон, Н. Л., Золотарёва, Н. И., Винн, Р. и др. (2002). Отсутствие посттрансляционного аспартил-β-гидроксилирования доменов эпидермального фактора роста у мышей приводит к дефектам развития и увеличению случаев кишечной неоплазии. J. Biol. Chem. 277, 12970–12977. DOI: 10.1074 / jbc.M110389200
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Динчук, Я.Е., Хендерсон, Н. Л., Берн, Т. К., Хубер, Р., Хо, С. П., Линк, Дж. И др. (2000). Аспартил-β-гидроксилаза (Asph) и эволюционно консервативная изоформа asph, лишенная каталитического домена, имеют общие экзоны с юнктином.
J. Biol. Chem. 275, 39543–39554. DOI: 10.1074 / jbc.M006753200PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Dong, X., Lin, Q., Aihara, A., Li, Y., Huang, C.-K., Chung, W., et al. (2015). Экспрессия аспартат-β-гидроксилазы способствует развитию злокачественного клеточного фенотипа поджелудочной железы. Oncotarget 6, 1231–1248. DOI: 10.18632 / oncotarget.2840
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Финотти А., Тревес С., Зорзато Ф., Гамбари Р. и Фериотто Г. (2008). Стимулирующие факторы, расположенные выше по течению, участвуют в транскрипции, управляемой промотором P1, локуса AbetaH-J-J. BMC Mol. Биол. 9: 110. DOI: 10.1186 / 1471-2199-9-110
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Гиллеспи, Дж.Р., Буш, Дж. Р., Белл, Г. И., Обри, Л. А., Дюпюи, Х., Феррон, М. и др. (2013). Функция GSK-3β в костях регулирует развитие скелета, метаболизм всего тела и продолжительность жизни мужчин.
Эндокринология 154, 3702–3718. DOI: 10.1210 / en.2013-1155PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Hou, G., Xu, B., Bi, Y., Wu, C., Ru, B., Sun, B., et al. (2018). Последние достижения в исследованиях аспартат-β-гидроксилазы (ASPH) при раке поджелудочной железы: краткое обновление. Bosn. J. Basic Med. Sci. 18, 297–304. DOI: 10.17305 / bjbms.2018.3539
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ивагами, Ю., Хуанг, Ч.-К., Олсен, М.Дж., Томас, Дж.-М., Янг, Г., Ким, М., и др. (2016). Аспартат-β-гидроксилаза модулирует клеточное старение через киназу 3β гликогенсинтазы при гепатоцеллюлярной карциноме. Гепатология 63, 1213–1226. DOI: 10.1002 / hep.28411
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Коллер, Д.L., Ichikawa, S., Lai, D., Padgett, L.R., Doheny, K.F., Pugh, E., et al. (2010). Полногеномное ассоциативное исследование минеральной плотности костной ткани у европейско-американских женщин в пременопаузе и репликация у афро-американских женщин.
J. Clin. Эндокринол. Метаб. 95, 1802–1809. DOI: 10.1210 / jc.2009-1903PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Lavaissiere, L., Jia, S., Nishiyama, M., de la Monte, S., Stern, A.M., Wands, J. R., et al. (1996). Сверхэкспрессия аспартил (аспарагинил) бета-гидроксилазы человека при гепатоцеллюлярной карциноме и холангиокарциноме. J. Clin. Вкладывать деньги. 98, 1313–1323. DOI: 10.1172 / JCI118918
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ли, К. В., Маенг, Дж.-С., Чой, Дж. Й., Ли, Ю. Р., Хван, К. Ю., Парк, С. С. и др. (2012). Роль взаимодействий с белками юнктина в клеточной динамике полимера кальсеквестрина при воздействии кальция. J. Biol. Chem. 287, 1679–1687. DOI: 10.1074 / jbc.M111.254045
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ли, К., Чай, Ю., Ван, Л., Гао, Б., Чен, Х., Гао, П., и др. (2017). Запрограммированное клеточное старение в скелете в конце полового созревания.
Нац. Commun. 8: 1312. DOI: 10.1038 / s41467-017-01509-0PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Li, H., Liu, P., Xu, S., Li, Y., Dekker, J.D., Li, B., et al. (2017). FOXP1 контролирует обязательство и старение мезенхимальных стволовых клеток во время старения скелета. J. Clin. Вкладывать деньги. 127, 1241–1253. DOI: 10.1172 / JCI89511
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ли, К., Cheng, P., Liang, M., Chen, Y., Lu, Q., Wang, J., et al. (2015). MicroRNA-188 регулирует возрастное переключение между дифференцировкой остеобластов и адипоцитов. J. Clin. Вкладывать деньги. 125, 1509–1522. DOI: 10.1172 / JCI77716
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ли, К., Сяо, Ю., Ян, М., Су, Т., Сунь, X., Го, К., и др. (2018). Длинная некодирующая РНК Bmncr регулирует судьбу мезенхимальных стволовых клеток во время старения скелета. J. Clin. Вкладывать деньги.
128, 5251–5266.DOI: 10.1172 / JCI99044PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Линь, К., Чен, X., Мэн, Ф., Огава, К., Ли, М., Сонг, Р., и др. (2019). Доставка прометастатического секретома в экзосому, направляемая осью ASPH, вызывает многоорганные метастазы рака молочной железы. Мол. Рак 18: 156. DOI: 10.1186 / s12943-019-1077-0
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Лин, С. П., Чиу, Ф. Ю., Ван, Ю., Йен, М. Л., Као, С. Ю., и Хунг, С.С. (2014). RB поддерживает состояние покоя и предотвращает преждевременное старение за счет активации DNMT1 в мезенхимальных стромальных клетках. Stem Cell Rep. 3, 975–986. DOI: 10.1016 / j.stemcr.2014.10.002
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Махмуд А., Харкнесс Л., Шредер Х. Д., Абдаллах Б. М. и Кассем М. (2010). Усиленная дифференцировка человеческих эмбриональных стволовых клеток в мезенхимные предшественники путем ингибирования передачи сигналов TGF-β / активин / узел с использованием SB-431542.
J. Bone Miner. Res. 25, 1216–1233. DOI: 10.1002 / jbmr.34PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Малагуарнера Р. и Бельфиоре А. (2014). Возникающая роль инсулина и передачи сигналов инсулиноподобного фактора роста в раковых стволовых клетках. Фронт. Эндокринол. 5:10. DOI: 10.3389 / fendo.2014.00010
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Патель, Н., Хан, А. О., Мансур, А., Мохамед, Дж. Й., Аль-Ассири, А., Haddad, R., et al. (2014). Мутации в ASPH вызывают лицевой дисморфизм, дислокацию хрусталика, аномалии переднего сегмента и спонтанные пузыри фильтрации или синдром трабулси. г. J. Hum. Genet. 94, 755–759. DOI: 10.1016 / j.ajhg.2014.04.002
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Пэн, Х., Го, К., Сяо, Ю., Су, Т., Цзян, Т., Го, Л., и др. (2020a). ASPH регулирует остеогенную дифференцировку и клеточное старение BMSC. Набор данных Figshare.
DOI: 10.6084 / m9.figshare.12436757.v1CrossRef Полный текст | Google Scholar
Пэн, Х., Дженкинс, З.А., Уайт, Р., Коннорс, С., Хантер, М.Ф., Ронан, А. и др. (2020b). Активирующий вариант CTNNB1 связан со склерозирующей дисплазией костей и неоплазией коры надпочечников. J. Clin. Эндокринол. Метаб. 105, 688–695. DOI: 10.1210 / clinem / dgaa034
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Пэн, Х., Ян, М., Го, К., Су, Т., Сяо, Ю. и Ся, З.-Й. (2019). Полисахариды Dendrobium officinale регулируют возрастную приверженность клонов между остеогенной и адипогенной дифференцировкой. Cell Prolif. 52, 1–10. DOI: 10.1111 / cpr.12624
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Кадир А., Лян С., Ву З., Чен З., Ху Л. и Цянь А. (2020). Старческий остеопороз: участие в дифференцировке и старении стромальных клеток костного мозга. Внутр. J. Mol.Sci. 21: 349. DOI: 10.3390 / ijms21010349
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ричи, М.
Э., Фипсон, Б., Ву, Д., Ху, Ю., Лоу, К. В., Ши, В. и др. (2015). limma обеспечивает анализ дифференциальной экспрессии для секвенирования РНК и исследований на микрочипах. Nucleic Acids Res. 43: e47. DOI: 10.1093 / nar / gkv007PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Seo, Y.-H., Jung, H.-J., Shin, H.-T., Kim, Y.-M., Yim, H., Chung, H.-Y., et al. (2008). Усиленный гликогенез участвует в клеточном старении посредством модуляции GSK3 / GS. Ячейка старения 7, 894–907. DOI: 10.1111 / j.1474-9726.2008.00436.x
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Шимода М., Томимару Ю., Шарпантье К. П., Сафран Х., Карлсон Р. И. и Вандс Дж. (2012). Связанная с прогрессированием опухоли трансмембранная протеина аспартат-β-гидроксилаза является мишенью для иммунотерапии гепатоцеллюлярной карциномы. Дж.Гепатол. 56, 1129–1135. DOI: 10.1016 / j.jhep.2011.12.016
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Sturla, L.
-M., Tong, M., Hebda, N., Gao, J., Thomas, J.-M., Olsen, M., et al. (2016). Аспартат-β-гидроксилаза (ASPH): потенциальная терапевтическая мишень при злокачественных глиомах человека. Heliyon 2: e00203. DOI: 10.1016 / j.heliyon.2016.e00203PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Томимару Ю., Кога Х., Яно Х., де ла Монте, С., Вандс, Дж. Р., и Ким, М. (2013). Повышенная регуляция генов-мишеней, чувствительных к изоформе Т-клеточного фактора-4, при гепатоцеллюлярной карциноме. Liver Int. 33, 1100–1112. DOI: 10.1111 / liv.12188
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Тревес, С., Фериотто, Г., Моккагатта, Л., Гамбари, Р., и Зорзато, Ф. (2000). Молекулярное клонирование, экспрессия, функциональная характеристика, хромосомная локализация и генная структура юнктата, нового интегрального кальцийсвязывающего белка мембраны плазматического ретикулума Sarco (эндо). J. Biol. Chem. 275, 39555–39568.
DOI: 10.1074 / jbc.M005473200PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Tu, X., Delgado-Calle, J., Condon, K. W., Maycas, M., Zhang, H., Carlesso, N., et al. (2015). Остеоциты опосредуют анаболические действия канонической передачи сигналов Wnt / β-catenin в кости. Proc. Natl. Акад. Sci. США 112, E478 – E486. DOI: 10.1073 / pnas.1409857112
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Сяо, Ю.-З., Ян, М., Сяо, Ю., Го, К., Хуанг, Ю., Ли, К.-Дж., и др. (2020). Уменьшение старения стволовых клеток гипоталамуса защищает от физиологического спада, связанного со старением. Cell Metab. 31, 534–548.e5. DOI: 10.1016 / j.cmet.2020.01.002
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ян М., Го К., Пэн Х., Сяо Ю.-З., Сяо Ю., Хуанг Ю. и др. (2019). Ингибирование Krüppel-подобного фактора 3 мутированной днРНК Reg1cp приводит к синдрому высокой костной массы человека. J. Exp.
Med. 216, 1944–1964. DOI: 10.1084 / jem.20181554PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ян, М., Ли, К.-Дж., Сунь, X., Го, К., Сяо, Ю., Су, Т. и др. (2017). Кластер MiR-497 195 регулирует ангиогенез во время связывания с остеогенезом, поддерживая эндотелиальную активность Notch и HIF-1α. Нац. Commun. 8, 1–11. DOI: 10.1038 / ncomms16003
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Е., Х., Зерланко, Б., Кеннеди, А., Банумати, Г., Чжан, Р., и Адамс, П. Д. (2007). Подавление передачи сигналов Wnt является триггером для образования факультативного гетерохроматина и начала клеточного старения в первичных клетках человека. Мол. Ячейка 27, 183–196. DOI: 10.1016 / j.molcel.2007.05.034
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Yu, B., Huo, L., Liu, Y., Deng, P., Szymanski, J., Li, J., et al. (2018). PGC-1α контролирует судьбу скелетных стволовых клеток и баланс костей и жира при остеопорозе и старении скелета, индуцируя TAZ.
Стволовые клетки клеток 23, 193–209.e5. DOI: 10.1016 / j.stem.2018.06.009PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Yu, G., Wang, L.-G., Han, Y., and He, Q.-Y. (2012). clusterProfiler: пакет R для сравнения биологических тем среди генных кластеров. Оми. A. J. Integr. Биол. 16, 284–287. DOI: 10.1089 / omi.2011.0118
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Юань, К., Фан, Г.-К., Донг, М., Альтшафль, Б., Диван А., Рен Х. и др. (2007). Перегрузка кальцием саркоплазматического ретикулума при дефиците юнктина увеличивает сократимость сердца, но увеличивает автоматизм желудочков. Тираж 115, 300–309. DOI: 10.1161 / CIRCULATIONAHA.106.654699
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Чжоу, X., Хун, Y., Zhang, H., и Li, X. (2020). Старение и омоложение мезенхимальных стволовых клеток: текущее состояние и проблемы. Фронт. Cell Dev. Биол. 8: 364.DOI: 10.
3389 / fcell.2020.00364PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
человеческий рекомбинантный фермент ASPH | Юнктатный антиген
Каталожный номер
ЭНЗ-488
Синонимы
AAH, BAH, CASQ2BP1, HAAH, JCTN, Junctin, EC 1.14.11.16, аспартил / аспарагинил-бета-гидроксилаза, аспартат-бета-гидроксилаза, пептид-аспартат-бета-диоксигеназа, ASP-бета-гидроксилаза, ASPH.
Введение
ASPH гидроксилирует остаток Asp или Asn в доменах EGF. ASPH участвует в гомеостазе кальция. ASPH экспрессируется двумя промоторами и подвергается обширному альтернативному сплайсингу. Кодируемый набор белков ASPH разделяет различные количества перекрытия около их N-концов, хотя имеют значительные различия в их C-концевых доменах, что приводит к различным функциональным свойствам.
Самые длинные изоформы (a и f) включают C-концевой домен аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы, который гидроксилирует остатки аспарагиновой кислоты или аспарагина в домене EGF, включая протеин C, факторы свертывания крови VII, IX и X, а также факторы комплемента C1R. и C1S.Другие изоформы расходятся в основном в С-концевой последовательности и лишены гидроксилазного домена, а некоторые были локализованы в эндоплазматической и
саркоплазматический ретикулум.Описание
Человеческий рекомбинантASPH, продуцируемый в кишечной палочке, представляет собой одиночную негликозилированную полипептидную цепь, содержащую 217 аминокислот (75-270 а.о.) и имеющую молекулярную массу 24,5 кДа. ASPH сливают с His Tag из 20 аминокислот и очищают с помощью обычной хроматографии.
Источник
Escherichia Coli.
Внешний вид
Стерильно-фильтрованный бесцветный раствор.
Состав
Раствор протеина ASPH содержит 20 мМ трис-HCl pH-8, 1 мМ DTT и 10% глицерина.
Стабильность
Хранить при 4 ° C, если весь флакон будет использован в течение 2–4 недель.Хранить в замороженном виде при -20 ° C в течение длительного времени.
Для длительного хранения рекомендуется добавить белок-носитель (0,1% HSA или BSA).
Избегайте многократных циклов замораживания-оттаивания.Чистота
Более 90,0% по данным SDS-PAGE.
Аминокислотная последовательность
MGSSHHHHHH SSGLVPRGSH MFDLVDYEEV LGKLGIYDAD GDGDFDVDDA KVLLGLKERS TSEPAVPPEE AEPHTEPEEQ VPVEAEPQNI EDEAKEQIQS LLHEMVHAEH ETEHSYHVEE TVSQDCNQDM EEMMSEQENP DSSEPVVEDE RLHHDTDDVT YQVYEEQAVY EPLENEGIEI TEVTAPPEDN PVEDSQVIVE EVSIFPVEEQ QEVPPDT.
1
2 → NP_001158223.1 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы g
1
Полученная изоформа (h) имеет более короткий и отчетливый N-конец, существенно более короткий и отчетливый C-конец и несколько внутренних отличий по сравнению с изоформа а.Эта изоформа похожа на изоформу b, которая также известна как юнктат.
1
1, ENST00000522835.5
1
Полученная изоформа (k) не имеет внутреннего сегмента и имеет существенно более короткий и отдельный С-конец по сравнению с изоформой а.
Идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_001158228.1
4 → NP_004309.2 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы
1
5 → NP_064549.1 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы e
Этот вариант выражен в сердечной и скелетной мышцах.
1
5, ENST00000356457.9
Эта изоформа также называется юнктином и образует комплекс с кальсеквестрином, триадином и рецептором рианодина путем прямого взаимодействия в С-концевой части молекулы. Этот белок, по-видимому, стабилизирует комплекс и играет решающую роль в регуляции высвобождения кальция из саркоплазматического ретикулума. Этот вариант выражен в сердечной и скелетной мышцах.
5 → NP_115857.1 изоформа аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы b
org/10.1016/j.ebiom.2018.05.004 Получить права и контент
Активность гидроксилазы ASPH играет важную роль в эпителиально-мезенхимальном переходе через взаимодействие с виментином. Наши результаты предполагают, что антагонисты ASPH могут быть многообещающими при разработке новой терапии.
Повышенная активность гидроксилазы в опухолевых тканях предсказывала худшие прогнозы пациентов с ГЦК.В совокупности гидроксилазная активность ASPH влияет на метастазирование ГЦК через взаимодействие с виментином и регулирование EMT. Таким образом, ASPH может быть многообещающей терапевтической мишенью для HCC.
В компьютерном классе 34 рабочих места и
два черно-белых лазерных принтера.
Только те студенты, которые были предварительно авторизованы их инструкторами
с ASPH OIT можно будет подключиться. Если вы получили
сообщение о том, что вы не авторизованы.
Спасибо! Кен.
Для использования с пленкой для цифровой или цветной печати, где вам обычно не нужны фильтры, вы справитесь с прилагаемой специальной блендой и без держателя фильтра.
Вам необходимо использовать внешний видоискатель с каждой камерой Leica, поэтому использование M3 1954 года просто означает, что вам нужно измерять внешний вид, а не через объектив.
(Совсем не очень близко, но это не должно быть макрообъективом.)
Держатель фильтра фиксируется в правильном положении, чтобы вырезы находились наверху, как и положено, так что искатели блокируются как можно меньше.
Затемняющая полоса представляет собой пластиковый лист и предварительно снимается.
Чехол пахнет тонкой кожей и отделан прекрасным велюром.
За зеркальными линиями кадра нет изображения, но, как ни странно, в отличие от 21-миллиметровых искателей, есть более светлый серый прямоугольник, в котором находится активное изображение.
2), я бы вместо этого серьезно посмотрел на зум-видоискатель Leica 21-24-28 мм, у которого изображение намного больше, чем у этого фиксированного 18-мм искателя. Если вы снимаете полукадр, у вас нет поля зрения 18 мм, вы получаете только 24 мм, и поэтому вы захотите оставить зум-искатель установленным на 24 мм для использования с объективом 18 мм на M8.
Стандартный фильтр с крепежным кольцом толщиной 5 мм (без учета задней резьбы) — самое толстое, что не виньет.
2, чтобы ваши черные рекламные цвета выглядели правильно.
Исходя из того, что нам сообщает Leica, мне действительно нужен один из них для ночной съемки с 9-лепестковой диафрагмой.
.
Впервые за более чем 50 лет Leica расширила ассортимент своей системы Leica M.
8 сидит на полукадровой камере M8, на которой 18 мм — это совсем не сверхширокоугольный объектив. Углы обзора указаны для полнокадровой пленочной камеры Leica MP (и все фотографии в качестве примера были сняты), а не для M8 с сенсорным экраном. Хи хи! Маркетологи никогда не должны вводить своих потенциальных клиентов в заблуждение.
, 2015, 2018; Yu et al., 2018; Xiao et al., 2020). Связанная со старением скелетная потеря костной массы может быть прослежена до мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (BMSC). BMSC играют большую роль в формировании костей из-за их способности к самообновлению и дифференцировке нескольких линий, включая остеогенные линии (Li et al., 2018; Peng et al., 2019). Во время старения BMSCs проявляют сниженную способность к самообновлению и приверженности остеогенным клонам, что тем самым приводит к аберрантному возрастному формированию кости (Childs et al., 2015; Li H. et al., 2017).
Сообщалось, что старение связано с повышенным клеточным старением. Накопление клеточного старения, в свою очередь, может ускорять старение организма и вносить вклад в фенотип старения (Childs et al., 2015). BMSCs начнут процесс старения рано, то есть преждевременное старение, под воздействием стресса. Предыдущие исследования также показали, что BMSC претерпевают клеточное старение во время старения скелета, а связанные с возрастом модуляторы могут вызывать или предотвращать преждевременное старение (Lin et al., 2014; Ли Х. и др., 2017; Чжоу и др., 2020).
, 2000). На основании текущих исследований сообщается, что ASPH участвует в регуляции онкогенеза посредством пролиферации клеток, образования колоний и клеточного старения (Iwagami et al., 2016; Hou et al., 2018). Примечательно, что исследование геномной ассоциации (GWAS), проведенное Koller et al. (2010) описали SNP, расположенный близко к 3’-области ASPH. Они обнаружили, что этот SNP, вероятно, был связан с минеральной плотностью костей поясничного отдела позвоночника у женщин европейско-американского происхождения в пременопаузе (Koller et al., 2010). Кроме того, в некоторых исследованиях сообщалось, что ASPH участвует в регуляции различных сигнальных путей, таких как передача сигналов Wnt, передача сигналов Notch, передача сигналов IGF, передача сигналов IRS и так далее (Cantarini et al., 2006; Tomimaru et al., 2013 ; Iwagami et al., 2016; Hou et al., 2018). Отмечено, что эти сигнальные пути являются каноническими путями во время моделирования и ремоделирования костей (Malaguarnera and Belfiore, 2014; Tu et al.
, 2015; Yang et al., 2017). Однако молекулярная сеть, организующая образование костей и клеточное старение BMSCs, опосредованное ASPH , все еще остается неясной.
Дифференциально экспрессируемые мРНК между группами среднего и пожилого возраста были отфильтрованы с использованием t -теста. Пакет R «limma» (Ritchie et al., 2015) применяется для нормализации данных и идентификации DEG. DEG сохраняли при настройке p = 0.01 и | logFC | = 2. Затем сохраненные гены были оценены на предмет функционального обогащения, включая термин биологических процессов GO (онтология генов) и путь KEGG (Киотская энциклопедия генов и геномов) с использованием пакета R «Clusterprofiler» (Yu et al., 2012). Все пробы интересующего гена ASPH были извлечены из исходных данных. Мы рассчитали экспрессию ASPH в разных кодирующих областях в соответствии с сайтами узнавания зондов. Затем его выражения в различных регионах были выведены в виде фигур скрипок с использованием t -теста.
Корреляция Пирсона (r) и значение p были рассчитаны с использованием R и R Studio. Значение p было отмечено как «0», когда оно меньше 1 ∗ 10 –8 .
Первичные антитела общего β-катенина (# 9562; CST, 1: 200) и нефосфо (активного) β-катенина (Ser33 / 37 / Thr41) (# 8814; CST, 1: 800) инкубировали в течение ночи в 7% BSA в PBS в течение ночи при 4 ° C, а затем — Alexa Fluor R 488 Goat Anti-rabbit (Thermo Fisher Scientific, США) в разведении 1: 400, и, наконец, окрашивали и устанавливали среду для закрепления.Изображения визуализировали на микроскопе Olympus с помощью программного обеспечения cellSense Dimension.
Затем клетки инкубировали в сульфате аммония 1:80 в течение 10 с. На 21-й день остеогенной дифференцировки проводили окрашивание ализарином красным для оценки минерализации клеточного матрикса в соответствии с инструкциями производителя (MUBMX-; Cyagen Biosciences). Вкратце, клетки промывали трижды PBS, а затем 4% параформальдегидом в течение 30 минут. После трехкратной промывки PBS клетки окрашивали в растворе ализарина красным при 37 ° C в течение 5 мин. Окрашенные лунки визуализировали с помощью камеры (ILCE-5100, SONY).Высвобождение ализарина Red S из клеточного матрикса в раствор цетилпиридиния хлорида количественно определяли спектрофотометрией при 540 нм.
Затем промывали планшеты с клетками PBS с последующей фиксацией 1 мл фиксирующего раствора для окрашивания β-галактозидазой при комнатной температуре в течение 15 мин. После удаления фиксирующего раствора планшеты трижды ополаскивали. Затем клетки инкубировали с 1 мл окрашивающего рабочего раствора в инкубаторе при 37 ° C в течение ночи. Наконец, пластины были визуализированы с помощью микроскопа Olympus.
Непарные двусторонние тесты Стьюдента t были выполнены для сравнения двух групп и однофакторный дисперсионный анализ ANOVA для сравнения внутри нескольких групп.Критические значения P были скорректированы Бонферрони и выражены следующим образом: ns: Нет значимости, ∗ P <0,05, ∗∗ P <0,01, ∗∗ P <0,001, # ## P <0,001.
Всего сохранено 152 зонда (включая 127 генов). Из 152 дифференциально экспрессируемых зондов экспрессия 116 зондов снизилась, в то время как экспрессия 36 зондов увеличилась в группах пожилого возраста по сравнению с группой среднего возраста (Фигуры 1B, C).В-третьих, мы проанализировали 10 лучших обогащенных сигналов с использованием трех суб-онтологий (BP для биологического процесса, MF для молекулярной функции и CC для клеточного компонента) биологических процессов GO и анализа пути KEGG (рисунки 1D, E). Анализ KEGG показал, что дифференциально экспрессируемые гены были в значительной степени обогащены клеточным старением, устойчивостью к ингибитору тирозинкиназы EGFR и некоторым развитием рака (рис. 1E). В-четвертых, мы провели поиск потенциальных ролей всех генов в формировании костей, задав «Старение ИЛИ старение», «Кость» и «Символ гена (из дифференциально экспрессируемых генов)» в качестве ключевых слов в базе данных Pubmed.Неожиданно мы обнаружили, что ASPH связан с клеточным старением при раке и, возможно, участвует в здоровье костей.
Таким образом, мы выбрали « ASPH » в качестве интересующего нас гена для проведения дальнейших исследований.
, 2011; Benisch et al., 2012). Чтобы выяснить, играет ли ASPH роль в формировании костей, мы проанализировали коэкспрессию ASPH с остеогенными маркерами, такими как RUNX2 и COL1A1 в различных базах данных. В большинстве нормальных тканей из GTEX корреляции ASPH с RUNX2 и COL1A1 были положительными, что представлено в верхнем правом углу рисунков 2A, E. ASPH имел умеренную положительную корреляцию с RUNX2 в 7858 тканях (Pearson r = 0.4, p = 0) (Рисунок 2B) и, в частности, в 70 тканях костного мозга (Pearson r = 0,51, p = 0) (Рисунок 2C). Аналогичным образом, ASPH имел положительную корреляцию с COL1A1 в 7858 тканях (Pearson r = 0,48, p = 0) (рис. 2F), хотя не продемонстрировал значимой корреляции с RUNX2 в костном мозге. (Рисунок 2G). В 7801 опухолевой ткани ASPH также показал положительную корреляцию с RUNX2 , а также COL1A1 (рисунки 2D, H).
Более того, в 1019 линиях раковых клеток была положительная корреляция между ASPH и RUNX2 (Рисунок 2I) или COL1A1 (Рисунок 2J). Примечательно, что 26 линий клеток, связанных с костями, не показали значительной коэкспрессии между ASPH и RUNX2 (рис. 2K), но показали положительную корреляцию между ASPH и COL1A1 (Pearson r = 0,74, p = 0) (Рисунок 2L). В совокупности эти результаты частично подтверждают, что ASPH положительно коррелировал с этими двумя генами (Рисунки 2A – L).
(I, J) Корреляция ASPH с RUNX2 в экспрессии в линиях раковых клеток (I) и в линиях раковых клеток, связанных с костями (J) , на основе данных из Энциклопедии линий раковых клеток ( CCLE). (K, L) Корреляция ASPH с COL1A1 в экспрессии в линиях раковых клеток (K) и в линиях раковых клеток, связанных с костями (L) , на основе данных CCLE. Коэффициент корреляции (r) и значение P были рассчитаны с помощью корреляционного анализа Пирсона.Обратите внимание, что каждая точка представляет один тип ткани (A – C, E – G) или один тип рака (D, H) или одну клеточную линию (I – L) .
Мы извлекли экспрессию всех зондов « ASPH » и классифицировали их на три типа в соответствии с позициями нацеливания зонда (например, экзон 14-25 с С-концевым каталитическим доменом, экзон 4-13 со связыванием Ca 2+ ). домен, и экзон 1–3 с положительно заряженным доменом) (рис. 3А). Затем BMSC индуцировали средой для остеогенной дифференцировки и тестировали ее экспрессию различных доменов ASPH . Данные qRT-PCR показали повышенную экспрессию мыши Asph во время остеогенеза BMSC (фигура 3B).Затем BMSC трансфицировали siRNA Asph мыши, нацеленной на каталитический домен (фиг. 3C), с последующей индукцией остеогенной средой для дифференцировки. Данные qRT-PCR предполагают, что подавление экспрессии Asph сопровождалось снижением остеогенных маркеров на 7-й день, включая Runx2 и Col1a1 (рис. 3E). Кроме того, запоминание матрикса, измеренное по активности щелочной фосфатазы (ЩФ), окрашиванию ЩФ и окрашиванию ализариновым красным, показало, что снижение экспрессии AAH привело к нарушению остеогенеза в BMSC (Фигуры 3F – I).
Напротив, BMSC трансфицировали конструкцией самой длинной мышиной изоформы Asph , вариант 1 (GenBank: NM_023066.3) (фигура 3D) с последующей индукцией средой для остеогенной дифференцировки. qRT-PCR предположила, что повышающая регуляция экспрессии Asph коррелировала с увеличением остеогенных маркеров, Runx2 и Col1a1 (рис. 3J). Точно так же запоминание матрикса, измеренное по активности ALP, окрашиванию ALP и окрашиванию Alizarin Red, показало, что избыточная экспрессия Asph приводила к усилению остеогенеза в BMSC (Фигуры 3K – N).
(F) Анализ активности ЩФ в BMSC с истощением AAH. (G, H) Типичные изображения окрашивания щелочной фосфатазой (ALP) (G) и окрашивания ализарином красным S (H, I) в BMSC с истощением AAH. (J) qRT-PCR анализ относительных уровней Runx2 и Col1a1 в BMSC со сверхэкспрессией AAH. (K) Анализ активности ЩФ в BMSC со сверхэкспрессией AAH. (L, M) Типичные изображения окрашивания ALP (L) и окрашивания Alizarin Red S (M, N) в BMSC со сверхэкспрессией AAH.Эти эксперименты были повторены трижды. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение. * P <0,05, *** P <0,001.
, 2020а). Результат показал, что ASPH был ниже у людей пожилого возраста, чем у людей среднего возраста (Рисунок 4A). Экзон 4-13 и экзон 14-25 ASPH уменьшались с возрастом в двух группах. Однако экспрессия экзона 1–3, локализованная в общей области различных изоформ ASPH , была стабильной (рис. 4В). Затем мы собрали человеческие BMSC (hBMSC) разного возраста и протестировали их экспрессию ASPH в разных регионах. Как и ожидалось, по сравнению с возрастной группой (возраст от 75 до 90), молодая группа (возраст от 24 до 32) показала более высокую экспрессию более длинных изоформ ASPH (Рисунок 4C).Кроме того, мы протестировали экспрессию Asph в BMSC молодых мышей (пассаж 0) и стареющих BMSC мыши (пассаж 5). Соответственно, экспрессия более длинных изоформ Asph была ниже в стареющих BMSC, чем в молодых BMSC (фиг. 4D). Эти наблюдения предполагают, что старение подавляет экспрессию Asph . Чтобы дополнительно проверить эту гипотезу, мы провели серию функционального анализа.
Результаты qRT-PCR продемонстрировали, что экспрессия Asph заметно снижалась вместе с клеточным старением (рис. 4E).Напротив, связанная со старением экспрессия p16 положительно коррелировала со старением клеток (рис. 4E). Кроме того, нарушение репликативной способности наблюдалось в группе, трансфицированной Asph siRNA (фиг. 4F). Колонии КОЕ, полученные при окрашивании по Гимзе, дополнительно продемонстрировали ингибирование пролиферации клеток в BMSC, которым мешала миРНК Asph (фигура 4G). Результаты qRT-PCR показали, что истощение Asph способствует развитию маркеров старения, таких как экспрессия p15, p16 и p21 в BMSC (рисунки 4H – J).Соответственно, окрашивание связанной со старением β-галактозидазой показало, что дефицит Asph способствует клеточному старению (рис. 4К).
(B) Средняя экспрессия различных областей ASPH в BMSC от людей среднего и пожилого возраста (необработанные данные были получены из GSE35955). (C) Экспрессия изоформ ASPH в BMSC от молодых и старых людей. (D) Экспрессия изоформ Asph в молодых или стареющих BMSC. (E) Отрицательная корреляция экспрессии AAH и p16 во время пассирования (P1 – P5) BMSC. (F) Удвоения BMSC интерферируют с миРНК AAH in vitro . (G) Окрашивание по Гимзе колоний CFU-F BMSC из BMSC вмешивалось в siRNA AAH in vitro . (H – J) Экспрессия p15 (H) , p16 (I) и p21 (J) в BMSC с истощением AAH. (K) Типичные изображения окрашивания SA-β-Gal BMSC в Asph siRNA, трансфицированных и контрольной группе. Масштабная полоса = 100 мкм. Эти эксперименты были повторены трижды. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение. * P <0,05, *** P <0,001, ### P <0,001.
В соответствии с этими корреляциями, экспрессия GSK3B и CTNNB1 показала значительное снижение BMSCs с истощением Asph (Фигуры 5G – O).Отношение фос-Ser9 GSK3β к общему количеству Gsk3β увеличилось в BMSC, трансфицированных Asph siRNA (фиг. 5J). Ингибирование Asph ведет к подавлению общего β-катенина, а также активного β-катенина (рисунки 5K – O). Соответственно, клетки, трансфицированные миРНК Asph , показали преимущественно пониженное распределение белка β-катенина как в цитоплазме, так и в ядре (рис. 6А). Иммунофлуоресцентный анализ также показал, что ингибирование Asph улучшает распределение активного β-катенина в цитоплазме (фиг. 6В).Взятые вместе, эти результаты позволяют предположить, что Asph , возможно, регулирует передачу сигналов Gsk3β / β-catenin, внося вклад в формирование костей и предотвращая клеточное старение (Figure 7).
(A – C) Коэкспрессия ASPH с GSK3B при экспрессии в нормальных тканях (A) , образцах рака (B) и клеточных линиях, связанных с костями (C) , на основе по данным из баз GTEx, TCGA и CCLE соответственно. (D – F) Коэкспрессия ASPH с CTNNB1 при экспрессии в нормальных тканях (D) , образцах рака (E) и линиях костных клеток (F) , на основе по данным из баз GTEx, TCGA и CCLE соответственно. Коэффициент корреляции (r) и значение P были рассчитаны с помощью корреляционного анализа Пирсона. Обратите внимание, что каждая точка представляет один тип ткани (A, D) или один тип рака (B, E) . Красные точки обозначают ткань костного мозга. (G) qRT-PCR анализ GSK3B и CTNNB1 в BMSC интерферирует с Asph siRNA in vitro . (H) Вестерн-блоттинг-анализ уровней общего GSK3β и фос-Ser9 GSK3β в BMSC, трансфицированных siRNA Asph .
(I) Отношение общего Gsk3β к α-тублину в BMSC, трансфицированных siРНК Asph . (J) Отношение фос-Ser9 GSK3β (pS9 GSK3β) к общему количеству GSK3β в BMSC, трансфицированных siРНК Asph . (K) Вестерн-блот-анализ уровней общего β-катенина (t-β-Cat) в BMSC, трансфицированных siRNA Asph . (L) Вестерн-блот-анализ уровней активного β-катенина [нефосфо-β-катенин (Ser33 / 37 / Thr41): не-p-β-Cat] в BMSC, трансфицированных siRNA Asph . (M) Отношение общего β-катенина к β-актину в BMSC, трансфицированных siRNA Asph . (N) Отношение активного β-катенина к β-актину в BMSC, трансфицированных siRNA Asph . (O) Отношение активного β-катенина к общему β-катенину в BMSC, трансфицированных siRNA Asph . Эти эксперименты были повторены 3 раза. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение. * P <0,05, *** P <0,001.
С помощью набора критериев фильтрации, описанных в разделе «Результаты», мы, наконец, предположили, что ген ASPH частично участвует в формировании кости. ASPH связан с регуляцией разборки белковых комплексов и регуляцией деполимеризации белков (Lee et al., 2012), что было представлено в 10-ти лучших передачах сигналов посредством анализа Go (Figure 1D).Кроме того, анализ KEGG показал, что дифференциально экспрессируемые гены обогащены клеточным старением, устойчивостью к ингибитору тирозинкиназы EGFR и некоторым развитием рака. Эти наблюдения дали нам некоторые ключи к разгадке того, что ASPH может участвовать в моделировании костей посредством регулирования клеточного старения.
5 (E11.5) и E12.5. Они обнаружили сильную экспрессию Asph в морде, конечностях и глазах (Patel et al., 2014). На сегодняшний день установлено, что мутаций ASPH , выявленных у пациентов, связаны с синдромом Трабулси, который характеризуется диморфизмом лица, дислокацией хрусталика, аномалиями переднего сегмента и спонтанными фильтрующими пузырьками (OMIM: 601552) (Patel et al., 2014; Chandran et al., 2019), но не касается аномальной костной массы. Нокаутные мыши Asph также реплицировали сходные фенотипы с этими пациентами (Dinchuk et al., 2002; Yuan et al., 2007; Patel et al., 2014). Однако Пегги и др. продемонстрировали, что ASPH дифференциально экспрессируется в hBMSC и, как полагают, связан с МПК и риском перелома костей (Benisch et al., 2012). Результаты GWAS предполагают, что мутация, произошедшая в 3’-области ASPH , может быть связана с костной массой (Koller et al., 2010). Кроме того, предыдущее исследование показало, что ASPH играет важную роль в других ключевых сигнальных путях, таких как передача сигналов Wnt, передача сигналов Notch и т.
Д., Которые все тесно вовлечены в формирование кости (Tomimaru et al., 2013; Hou et al. , 2018). Как и ожидалось, наше исследование показало, что ASPH был важным модулятором во время остеогенеза. Корреляционный анализ показал, что ASPH имеет положительную корреляцию с остеогенными маркерами. Экспрессия Asph также возрастала во время остеогенной дифференцировки.Более того, истощение Asph ингибировало остеогенную дифференцировку, тогда как сверхэкспрессия Asph способствовала остеогенной дифференцировке. Тем не менее, Mantila Roosa et al. (2011) предположили, что Asph подавлялась во время формирования матрицы, что не согласуется с нашими результатами. В этом исследовании стабильная экспрессия в общей области ASPH (экзон 1-3) и сниженная экспрессия в экзоне 4-25 были показаны на рисунке 3B, что указывает на то, что юнктин увеличивается во время старения и старения.Таким образом, мы подозревали, что различных изоформ ASPH могут быть вовлечены в один и тот же процесс с противоположной ролью.
Кроме того, мы подтвердили эти положительные корреляции in vitro . Дефицит Asph ингибировал накопление Gsk3β. Тем не менее, нефосфорилирование β-катенина по Thr41 / Ser37 / Ser33 уменьшилось, что объясняет подавление общего β-катенина. Иммунофлуоресцентный анализ также подтвердил подавление передачи сигналов Wnt.
, Frey, S.P., Seefried, L., Raaijmakers, N., et al. (2012). Профиль транскрипции популяций мезенхимальных стволовых клеток при первичном остеопорозе отличается и демонстрирует сверхэкспрессию остеогенных ингибиторов. PLoS One 7: e45142. DOI: 10.1371 / journal.pone.0045142
2019.1605390
J. Biol. Chem. 275, 39543–39554. DOI: 10.1074 / jbc.M006753200
Эндокринология 154, 3702–3718. DOI: 10.1210 / en.2013-1155
J. Clin. Эндокринол. Метаб. 95, 1802–1809. DOI: 10.1210 / jc.2009-1903
Нац. Commun. 8: 1312. DOI: 10.1038 / s41467-017-01509-0
128, 5251–5266.DOI: 10.1172 / JCI99044
J. Bone Miner. Res. 25, 1216–1233. DOI: 10.1002 / jbmr.34
DOI: 10.6084 / m9.figshare.12436757.v1
Э., Фипсон, Б., Ву, Д., Ху, Ю., Лоу, К. В., Ши, В. и др. (2015). limma обеспечивает анализ дифференциальной экспрессии для секвенирования РНК и исследований на микрочипах. Nucleic Acids Res. 43: e47. DOI: 10.1093 / nar / gkv007
-M., Tong, M., Hebda, N., Gao, J., Thomas, J.-M., Olsen, M., et al. (2016). Аспартат-β-гидроксилаза (ASPH): потенциальная терапевтическая мишень при злокачественных глиомах человека. Heliyon 2: e00203. DOI: 10.1016 / j.heliyon.2016.e00203
DOI: 10.1074 / jbc.M005473200
Med. 216, 1944–1964. DOI: 10.1084 / jem.20181554
Стволовые клетки клеток 23, 193–209.e5. DOI: 10.1016 / j.stem.2018.06.009
3389 / fcell.2020.00364
Самые длинные изоформы (a и f) включают C-концевой домен аспартил / аспарагинил бета-гидроксилазы, который гидроксилирует остатки аспарагиновой кислоты или аспарагина в домене EGF, включая протеин C, факторы свертывания крови VII, IX и X, а также факторы комплемента C1R. и C1S.Другие изоформы расходятся в основном в С-концевой последовательности и лишены гидроксилазного домена, а некоторые были локализованы в эндоплазматической и
саркоплазматический ретикулум.
