Gh3: Доступ ограничен: проблема с IP

Содержание

Беззеркальный фотоаппарат Panasonic Lumix DMC-Gh4 Body

Panasonic Lumix DMC-Gh4 – беззеркальный фотоаппарат со сменной оптикой. Его предшественник, Panasonic Gh3, пришелся по нраву любителям видеозаписи. Более того, его массово использовали профессиональные операторы. Уровень интереса к Gh3 оказался настолько велик, что компания не успевала реагировать на все пожелания, в сети появилось много неофициальных «прошивок» фотоаппарата, расширяющих его возможности видеозаписи. Такой успех побудил компанию двигаться в выбранном направлении и дальше, таким образом и был создан, наверное, самый видео-ориентированный из всех фотоаппаратов, Lumix Gh4.

И все же, что изменилось в плане создания фотографий? Во-первых, Lumix DMC-Gh4 получил обновленную матрицу Live MOS. Ее разрешение осталось на прежнем уровне: 16 мегапикселей. Для формата 4/3 с площадью сенсора всего 17 х 13 мм это, наверное, является пределом; во всяком случае – для современного уровня развития технологии.

Тем не менее, у матрицы теперь новый низкочастотный оптический фильтр, обеспечивающий большую реальную разрешающую способность.  Предел чувствительности ISO повышен до 25600 единиц, в среднем фотоаппарат справляется с шумом эффективнее как минимум на одну ступень экспозиции.  Новый трехъядерный процессор Venus FHD обладает достаточной мощью для быстрой обработки фотографий (скорость серийной съемки – 6 кадров в секунду), при этом применяются новые алгоритмы шумоподавления: 3D шумоподавление, и MNR – удаление шума в несколько проходов. Для удобства визирования Gh4 получил один из самых лучших электронных видоискателей с разрешением 1.7 млн. точек (873х500 пикселей), выполненный по OLED технологии. ЖК-дисплей также неплох: он тоже OLED, с разрешением приблизительно 614 000 точек (диагональ 3 дюйма). Он чувствителен к прикосновениям, емкостного типа, свободно отклоняется и вращается для съемки с самых разных углов. Panasonic заявляет, что система фокусировки, применяющаяся в Lumix Gh4, превосходит фазовую фокусировку зеркальных камер и по скорости, и по точности работы.
Вряд ли это справедливо для профессиональной зеркальной техники, но если сравнивать с зеркальными камерами начального и среднего уровня, такими как, к примеру Nikon D5200 или Canon 60D, это действительно так, фокусировка Lumix DMC-Gh4 чрезвычайно быстрая и цепкая. Все дело в уникальной матрице Gh4, которая обладает очень высокой скоростью обновления: до 240 Гц, а также в специальных объективах с маркировкой X или HD – скорость может значительно упасть, если поставить другой объектив.

Необходимо также отметить большое количество органов управления, Gh4 насыщен ими очень плотно. Фотоаппарат имеет целых 5 кнопок Fn, функции которых можно назначить из списка. Мультифункциональных дисков управления вместо одного стало сразу три: один располагается на верхней панели, под указательным пальцем, остальные два — на задней. Выбором режима съемки теперь занимаются два колесика, справа и слева от видоискателя: правое отвечает за выбор режима экспозиции, а левое – за режим срабатывания затвора (покадровая / серийная съемка / брекетинг / таймер).

Кроме этого, конечно, можно пользоваться и сенсорным экраном, это позволит переключать параметры быстро и бесшумно. Корпус, который теперь изготавливается из магниевого сплава,  получил защиту от пыли и влаги. Также фотоаппарат получил новый, более емкий аккумулятор (1860 мАч, 14 Вт*ч) и возможность подключать дополнительную батарейную ручку – это поможет использовать камеру при очень длительной съемке. И, что становится уже стандартом для нашего времени, Gh4 оборудован встроенным Wi-Fi передатчиком, который позволяет в реальном времени транслировать картинку с матрицы на дисплей мобильного устройства (iOS или Android), дистанционно управлять фотоаппаратом и получать отснятый материал. Точка доступа при этом не требуется, камера создает свою.

Наконец, самое важное: видеосъемка. Ведь, если вам нужен отличный компактный фотоаппарат со сменной оптикой, то есть и менее затратные альтернативы. Однако в плане видеозаписи равных Panasonic Lumix Gh4, наверное, нет. Он может записывать ролики в FullHD с частотой кадров до 60 Гц (50 Гц для PAL-версии, которая будет продаваться в Европе, в т. ч. и в России) с прогрессивной разверткой, на выбор предлагаются два алгоритма сжатия: ALL-Intra или IPB, средний битрейт для первого – до 72 Мбит/с, для второго – до 50 Мбит/с. В качестве видеокодека используется H.264, контейнеры: MOV, MP4 или AVCHD. Есть возможность записи в ускоренном или замедленном режиме, от 40% до 300% от обычной скорости. Конечно, есть и управление экспозицией: как диафрагмой, так и затвором. В отличии от всех остальных фотоаппаратов, записывающих видео, Gh4 поддерживает запись временного кода (тайм-кода), совместимого со стандартом SMPTE – это существенно облегчает синхронизацию Gh4 с другими устройствами видео- и звукозаписи. HDMI порт фотоаппарата позволяет как транслировать изображение на мониторы (с наложением служебной информации), так и сохранять видео на внешние жесткие диски. Для качественного звука камера обладает, во-первых, двумя встроенными микрофонами, и, во-вторых, позволяет подключать внешний (через гнездо 3.5 мм). Контролировать уровень звука можно через наушники – они подсоединяются через обычный 3.

5 мм разъем. Gh4 умеет обходить ограничение в 4 Гб. на 1 файл, накладываемое файловой системой FAT 32 (переход между файлами проходит без прерывания или задержек), однако не в силах преодолеть бюрократические препоны: у европейской модели длительность непрерывной съемки ограничена 29 мин. 59 с. С другой стороны – крайне редко бывает нужно вести съемку более получаса подряд, без малейших остановок.  Во время записи видео можно делать фотографии – это никак не скажется на самой съемке. И последнее: многие зеркальные фотоаппараты обладают качественной видеозаписью, но автофокусировка в таком режиме у них существует скорее «для галочки», на деле приходится фокусироваться вручную. В случае с Panasonic  Gh4 это совсем не так.

Итак, Panasonic Lumix Gh4 – превосходный фотоаппарат для понимающих пользователей. Новая матрица и современный процессор обеспечивают высокое качество изображение, сравнимое с качеством зеркальных камер среднего уровня. Очень быстрая фокусировка как в фото-, так и в видеорежиме (работающая с ограниченным кругом объективов).

Большое количество внешних органов управления позволяет настраивать ключевые параметры съемки не отрывая глаз от видоискателя. И, конечно, мощнейшие для фотокамеры, возможности по записи видео. Конечно, цена фотоаппарата, поставившая новый «рекорд» в формате Micro 4/3, для многих станет останавливающим фактором, однако популярность в профессиональных кругах, скорее всего, уже обеспечена.

 

Ремонт фотоаппаратов Panasonic Lumix DMC-Gh4 в Москве

Замена ЖК дисплея:
Замена защитного стекла: Ремонт встроенной вспышки:
Ремонт крепления вспышки «башмака»: Ремонт основной платы: Ремонт контактов батарейного отсека: Замена шторок затвора: Замена светофильтра матрицы: Замена шлейфа несъемного объектива: Ремонт Wi-Fi модуля: Ремонт/замена стабилизатора: Ремонт замена /видоискателя: Ремонт/замена разъема hdmi: Ремонт селектора выбора выдержки и диафрагмы: Замена байонета: Замена затвора: Замена привода диафрагмы:
Диагностика: 0
от 1900
Замена сенсора: от 1900
от 2500
Не видит карту памяти: от 2400
от 2500
Ремонт корпусных частей, панелей, резинок: от 1000
от 3000
Замена разъёма USB: от 2500
от 2200
Замена платы питания: от 2500
от 2000
Замена кнопок, переключателей режимов, меню: от 2500
от 2000
Замена матрицы: от 4500
от 3500
Ремонт датчика автофокуса: от 2800
от 2500
Замена привода зеркала: от 4500
от 3000
Юстировка: от 4000
от 3500
Замена фокусировочного экрана: от 1800
от 3500
Ремонт/замена кнопок: от 2500
от 3000
Ремонт селектора выбора режимов: от 2500
от 2500
Ремонт/замена верхней панели: от 3000
от 2900
Замена кнопок управления: от 2500
от 8000
Замена привода затвора: от 5500
от 4500
Замена блока зеркал: от 7500

Полный обзор камеры Panasonic Lumix Gh4 Часть 2/4

http://www. cameralabs.com/reviews/Panasonic_Lumix_DMC_Gh4/index.shtml
Февраль 2013 г.
Автор: Кэн МакМэйон
Перевод: Анна Седова

Да, он дороговат, но, принимая во внимание полностью металлический корпус и прорезиненные кольца фокусировки и зумирования, у вас ни на секунду не возникнет ощущение, что вы переплатили. На объективе имеется 58-миллиметровая резьба для установки фильтров, а выдвигающаяся вперед фронтальная часть не вращается, так что проблем с поворотными поляризационными фильтрами не будет. На верхней части зумирующего кольца отмечены зум-позиции. Кроме того, что объектив защищен от плохой погоды (производитель позиционирует его как пыле- и влагонепроницаемый), в комплекте с ним идет пластиковая бленда.

Обратите внимание, что, в отличие от китового зума 12-50 мм f/3.5-6.3 для Olympus и Sony’ вского нового E PZ 16-50 мм f/3.5-5.6, Lumix G X Vario 12-35 мм — немоторизированный зум; в нем используется более традиционное кольцо мануального зумирования с механической связкой, что обеспечивает более быстрое и непосредственное управление зумом в режимах фото, а вот для съемки видео это не очень хорошо. И, если вы предпочитаете механическое зумирование, помните, что Olympus 12-50 мм — лучшее предложение на рынке компактных системных камер: его зумирующее кольцо превосходно работает и в ручном, и в моторизированном режимах, хотя по тактильным ощущениям несколько уступает Lumix 12-35 мм.

Камеры Olympus для системы Micro 4/3 оснащаются встроенной системой стабилизации изображения, а в случае с Lumix Gh4, как и с NEX-6, система стабилизации становится возможной лишь при выборе объектива со встроенной стабилизацией. Lumix G Vario 12-35 f/2.8 предлагает оптическую стабилизацию, которая активируется переключателем на корпусе объектива. Камера имеет два режима работы, которые можно выбрать в меню REC. Нормальный режим  предполагает двух-осную стабилизацию в горизонтальном и вертикальном направлении, а панорамный режим запрещает вертикальное выравнивание.

Я провел испытания системы стабилизации изображения следующим образом: зумировал объектив до максимума 35 мм (эквивалентно 70 мм на полнокадровой камере) и произвел серию снимков, постепенно увеличивая выдержку сначала при отключенной системе стабилизации, затем то же самое — при включенной. В нормальном режиме съемки (Normal mode), как вы можете видеть на снимках, помещенных ниже, Lumix Gh4 в паре с объективом 12-35 мм f/2.8, способен выдать около трех стопов стабилизации. Обратите внимание, что камера OM-D E-M5 оснащена прекраснейшей пятиосевой встроенной системой стабилизации, которая может работать вне зависимости от того, какой объектив вы устанавливаете на камеру. В моем испытании с объективом M.Zuiko 12-50 мм фотоаппарат продемонстрировал 4 стопа стабилизации.

Panasonic Lumix Gh4 с объективом Lumix G X Vario 12-35 мм f/2.8: слева – при отключенной системе стабилизации Power O.I.S., справа – при включенной.

100% crop, 12-35mm at 35mm 200 ISO 1/8th O.I.S. Off.

100% crop, 12-35mm at 35mm 200 ISO 1/8th O.I.S. On.

Китовый зум от Olympus с диапазоном фокусных расстояний, эквивалентных 24-100 мм на полнокадровой матрице, дает чуть большую амплитуду изменения фокальной длины и чуть меньшее минимальное расстояние, чем Sony 16-50 мм, что дает основания полагать, что он обеспечит и лучшие возможности для съемки портретов с приятным размытием заднего плана. Но не следует забывать, что у объектива Lumix более широкая максимальная апертура f/2.8 по сравнению с f/3.5 у двух других объективов и, что играет решающую роль, апертура f/2.8 постоянна на всем диапазоне фокусных расстояний. Таким образом, при максимальном фокусном расстоянии 70 мм объективом Lumix вы будете снимать с диафрагмой f/2.8, объективом Olympus – с диафрагмой f/5.6, а Sony – с f/5. Итого: мы имеем преимущество в 2 стопа по сравнению с Olympus’ом и почти такое же по сравнению с Sony, хотя бóльший по размеру сенсор последней компенсирует это различие.

Ниже я привожу примеры снимков, сделанных этими тремя объективами, где наглядно демонстрируются их возможности по созданию эффекта Боке. Я выбрал стандартный портрет, вмещающий голову и плечи человека; съемка проводилась при максимально возможной апертуре каждого из объективов и при фокусном расстоянии, эквивалентном 70 мм на ФФ (в случае с Sony было выставлено фокусное расстояние, эквивалентное 75 мм на полном кадре). Четвертый снимок демонстрирует результат, полученный при зумировании объектива Olympus до эквивалента 100 мм и небольшом отступлении назад для сохранения примерно того же поля зрения. Далее я представляю примеры макро-снимков, сделанных этими тремя объективами при минимально возможной дистанции для фокусировки для каждого из них и при полном зумировании.

Глубина резкости при съемке портрета

Lumix G X Vario 12-35mm at 35mm f2.8

Sony E PZ 16-50mm at 50mm f5.6

M.Zuiko 12-50mm at 35mm f5.6

M.Zuiko 12-50mm at 50mm f6.3

Как видно на снимках выше, при таком размере большого различия в глубине резкости у трех объективов нет. Но стоит увеличить их, и вы сразу же заметите преимущества Lumix 12-35 мм: фон размыт сильнее. Однако, если вы хотите получить по-настоящему маленькую ГРИП при портретной съемке, вам лучше взять один из фиксов Olympus 45 мм f/1. 8 или 75 мм f/1.8. Ниже я предлагаю вашему вниманию сравнение макро-фотографий, полученных тремя объективами при съемке с наименьших расстояний, на которых возможна фокусировка.
Глубина резкости при макро-съемке
Lumix 12-35mm at 35mm f2.8 M.Zuiko 12-50mm at 50mm f6.3 Sony E PZ 16-50mm at 50mm f5.6

Но для некоторых значительно более важным фактором, чем потенциальные преимущества получения минимальной ГРИП, является возможность снимать объективом Lumix 12-35 мм в условиях ограниченной освещенности. Опять при фокусном расстоянии 35 мм вы сможете снимать при тех же настройках экспозиции, что и на OM-D E-M5 с объективом 12-50 мм при ISO 200 там, где с объективом Olympus потребовалось бы ISO 800.

Режимы съемки

Вместо того, чтобы детально описывать режимы съемки камеры Gh4, которые по сути не отличаются от режимов съемки, предлагавшихся предшественницей Gh3, я лучше перенаправлю вас в соответствующий раздел моего более раннего отзыва о Gh3, а здесь сконцентрируюсь на двух особенностях, которых ранее не было. Первая – это новый интервальный таймер Gh4, доступ к которому осуществляется в режиме съемки Тайм-лапс (Time Lapse) через меню Rec. Он представляет из себя довольно всеобъемлющий интервальный таймер, позволяющий делать до 9999 снимков с интервалами от одной секунды до 100 минут без одной секунды. Также он дает возможность установить отсрочку съемки до 24 часов. Он не предоставляет ни одну из опций, которые есть у интервального таймера камеры NEX-6, и не сводит снимки в видеоряд, так что он не так хорошо пригоден для новичков в съемке тайм-лапсов, но тем не менее, если вы готовы к кропотливым подсчетам и последующей обработке материала, он гарантирует базовые функции, необходимые для успешной съемки последовательных снимков для тайм-лапсов.

Кроме того, у Gh4 появился новый режим HDR, обеспечивающий возможность быстрой съемки последовательности кадров и компоновки из них одного с расширенным динамическим диапазоном. В режиме HDR есть три установки, Авто, +/-1EV, +/-2EV, и +/-3EV. Для демонстрации возможностей этого режима я сделал снимок HDR в церкви, где я обычно тестирую камеры и объективы на предмет шумов при высоких значениях чувствительности ISO. Слева вы можете видеть снимок, сделанный в режиме A — Приоритета Апертуры при единичной съемке и ISO 200, а справа — снимок HDR, полученный из серии снимков, снятых также в режиме A — Приоритета Апертуры при тех же настройках; при этом режим HDR выбрал чуточку более медленную скорость спуска затвора.

Сразу бросается в глаза, что при съемке в HDR схвачено больше деталей на засвеченных и затененных участках; фрагменты снимков, представленных ниже, дают более детальное представление о том, насколько хорошо в HDR сохраняется детализация витража, которая на единичном снимке «съедается» светом. Ну и гистограмма служит подтверждением того, что и так очевидно.


Ну и наконец, как и в камере G5, в Gh4 имеется Электронный затвор. Это не способствует более высокой скорости в режиме серийной съемки или другим улучшениям показателей работы, просто механический спуск затвора дезактивируется, что делает съемку совершенно бесшумной: при некоторых обстоятельствах, например, при съемке в музеях, на концертах и т. п., звук срабатывания затвора может мешать.

Wi-Fi

Встроенная в корпус Lumix Gh4 антенна Wi-Fi обеспечивает беспроводное соединение с интернетом и другими устройствами, включая смартфоны. Достаточно соединения с устройством с iOS или Android, и вы получаете возможность управления камерой удаленно. Если вы подключитесь к точке доступа Wi-Fi, то сразу сможете загрузить по сети сделанные фотографии на ваш компьютер или выложить на фото-сайте или в социальной сети.

Для начала рассмотрим опцию удаленного управления съемкой. Чтобы контролировать камеру с iPad, iPhone или смартфона или планшета на основе Android, вам сначала понадобится загрузить бесплатное приложение Lumix Link из App Store или Android Marketplace. Затем включаете Wi-Fi путем выбора опции Удаленной съемки (Remote Shooting) в Wi-Fi меню; быстрый доступ к этой функции осуществляется нажатием кнопки Fn1, которая по умолчанию как раз управляет включением/выключением Wi-Fi. Эта возможность поднимает камеру на уровень выше, так как она становится еще и средством соединения с интернетом, через которое вы также соединяетесь с вашим смартфоном, планшетом и другими устройствами.

Далее вы загружаете приложение – и здесь наблюдается интересная вещь. Я тестировал функцию Удаленного управления съемкой на Lumix Gh4, используя свой iPhone 4S. В режиме Live Control дисплей телефона показывает практически абсолютно то же, что можно наблюдать на экране или видоискателе камеры, которые также находятся в режиме Live View. Поверх изображения накладывается детальная информация, сгруппированная в те же иконки: режим съемки, фото-стиль (Photo style), размер и качество изображения, режим фокусировки и пр., включая установки экспозиции.

Но вы можете не только видеть все эти установки, но также и изменить большинство из них. Кнопка ‘Set’ выводит меню, из которого осуществляется доступ к установкам компенсации экспозиции, чувствительности ISO, баланса белого, а также к переключениям режимов съемки – P, A, S, M. Выбрав необходимые настройки экспозиции, вы возвращаетесь в режим Live View на дисплее, где можно управлять настройками при помощи бегунка. При съемке в режимах A и S на дисплее отображаются и сохраняются значения и апертуры, и выдержки, в то время как вы меняете другие настройки. Эта конфигурация меню прекрасно разработана, очень продуманна, с ней легко контролировать все, что происходит.

Приятные моменты на этом не заканчиваются. Коснувшись иконки меню, вы получаете доступ к множеству других настроек, включая режим автофокусировки (AF mode), фото-стиль (Photo Style), режим работы вспышки (Flash mode), соотношение сторон кадра (Aspect Ratio), размер изображения (Picture size), качество изображения (Picture quality), режим замера экспозиции (Metering mode), качество видео и опцию установки ограничения времени при съемке видео. Последняя функция крайне важна, поскольку, несмотря на то, что начать съемку видео можно дистанционно, остановить запись (полагаю, по техническим причинам) можно только нажатем кнопки записи видео на корпусе камеры.

Вернувшись в меню управления в режиме Live View, вы обнаружите кнопочную панель управления функциями камеры: спуск затвора и начало записи видео. Как и на дисплее камеры Gh4, вы сможете удаленно устанавливать зону фокуса касанием пальца желаемой зоны кадра на экране телефона, а также регулировать размер зоны фокуса «сжатием». Меня немного разочаровало то, что, начав записывать видео, вы не только не можете остановить съемку с телефона (удаленно), но и прочие функции управления оказываются невозможными при дистанционном управлении, включая фокусировку.

Тем не менее приложение обеспечивает столько других возможностей, что я легко прощаю это упущение. Имеется информационное табло, позволяющее менять конфигурацию независимо от дисплея камеры, а также кнопка автоспуска, предусматривающая возможности задержки спуска затвора на 10 сек., 3 снимка через 10 сек, 2 сек. безотносительно позиции колеса выбора режима съемки. И наконец, если вы используете на Lumix Gh4 моторизированный зум, вы можете также дистанционно обеспечивать управление им посредством виртуального тумблерного зум-перекючателя. Установив на Gh4 объектив Olympus M.Zuiko 12-50 мм, я смог приближаться и удаляться с обеими из возможных скоростей.

Помимо внушительного пакета для управления, приложение Lumix Link может записывать лог-файлы с данными GPS и переносить информацию о месте съемки кадра на камеру. Вы можете установить интервал обновления от 1 до 60 секунд – выбирайте компромисс между точностью и экономией батареи вашего телефона. Кроме того, время на телефоне и на камере автоматически синхронизируется.

С помощью приложения Lumix Link можно также просматривать снимки и даже пересылать их во время записи напрямую, либо через точку доступа Wi-Fi.

Если вам нужно переписать фотографии с карточки на телефон или выложить на фото-ресурсе или в социальных сетях, вы можете сделать это также через Wi-Fi. В отличие от камеры Sony NEX-6, в Gh4 нет мини-браузера, так что вы не сможете подсоединиться к общественной точке доступа Wi-Fi, где требуется введение логина/пароля или соглашение с условиями пользования. Так что мне пришлось тестировать все эти возможности с моим домашним Wi-Fi, и результаты оказались смешанными. Можно легко переливать снимки на смартфон или компьютер через прямое Wi-Fi-соединение между двумя устройствами или через вашу сеть, также сеть можно использовать для загрузки фотографий в интернет. Только обращаю ваше внимание на такой факт: когда я обнаружил, что присоединение к общественной точке доступа невозможно, я попытался соединиться через iPhone – личную точку доступа; iPhone показывал, что Gh4 получил соединение, но — не понятно, по каким причинам — Gh4 отказывался продолжать работу, выдавая «соединение не установлено».

При соединении с интернетом через домашний Wi-Fi все прошло успешнее. Из Gh4 можно заходить в Facebook, Twitter, YuoTube, Picasa, Flickr и Ustream – выбор несколько шире, чем дает NEX-6. Как и в случае с камерами Sony и Canon, сначала нужно создать аккаунт на сайте производителя для авторизации соединения с этими сайтами и размещения фотографий. В случае с Panasonic это Lumix Club. Принципиальным моментом здесь является то, что Panasonic не используют свой собственный сайт в качестве посреднического: ваши снимки размещаются непосредственно на тех сайтах, которые вы выбираете, не через линки к сайту Lumix Club. Конечно, если вы желаете, сайт Lumix Club может предоставить папку Cloud, на которой вы можете временно хранить до 1000 снимков любого размера.

Продолжая тему размеров файлов, замечу, что при загрузке фотографий вы можете выбирать из нескольких вариантов разрешения, а также размещать полноразмерные фотографии. Разумеется, не приходится рассчитывать, что все снимки с карты памяти в полном разрешении загрузятся быстро. У меня на загрузку одного 16-мегапиксельного снимка в Flickr при широкополостной связи со скоростью 80 Мбит в секунду ушло несколько минут. Так что даже при быстром беспроводном соединении Gh4 работает не особенно стремительно. В действительности, в отличие от функции дистанционного управления, способность камеры Gh4 передавать снимки по беспроводному каналу слишком медленная и пока неуклюжая. Gh4 довольно слабенько принимала Wi-Fi-сигнал, работала стабильно только в пределах пары метров от моей точки доступа, соединение было медленным и затрудненным; кроме того, при каждом новом соединении требовалось вводить пароль через клавиатуру на дисплее, подобную телефонной. А если вы решите приостановить загрузку, допустим в Flickr, и выбрать другой сайт, придется все начинать сначала, включая введение пароля – это очень раздражает.

Однако в целом возможности камеры Lumix Gh4 по беспроводному соединению я нахожу лучшими среди того, что мне доводилось тестировать. Она немного медленна, интерфейс требует доработки, но по сравнению с аналогичной функцией Sony NEX-6 эта камера предлагает намного больше опций, и пользоваться ими удобней, даже при том, что у Gh4, в отличие от камеры Sony, нет возможности загружать дополнительные приложения, расширяющие функции камеры в целом.

Режимы съемки видео

Все с нетерпением ожидали, как в Lumix Gh4 будут усовершенствованы функции записи видео. Камеры серии GH заработали репутацию фотоаппаратов с возможностью записи видео хорошего качества, что привело к тому, что профессионалы приняли их с энтузиазмом, не говоря о том, что теперь Panasonic вынуждены выжимать еще больше возможностей из этих камер. Усовершенствования, на которые производитель делает акцент, — это повышение качества видео с 1080i50/60 до 1080p50/60, а также появление разъема для подключения наушников и замена порта для внешнего микрофона на более распространенный 3. 5 мм. Кроме того, производитель обещает более высокую скорость передачи информации по каналу (битрейт), увеличение продолжительности времени съемки и внутрифреймовое кодирование, которое на Gh3 было возможно лишь с помощью модификаций энтузиастов.

Как и ранее камера Gh3, Gh4 может снимать видео в качестве Full HD с непрерывной автофокусировкой и полностью ручным управлением экспозиции. И, также, как сенсор Gh3, матрица Gh4 выдает прогрессивное видео (вывод строк последовательно друг за другом) 1080p со скоростью 50 фреймов в секунду для регионов PAL и 60 фреймов в секунду для регионов NTSC. Разница заключается в том, что Gh3 делала кодировку в виде черезстрочного видео, или полукадра (кадр в изображении передается в виде двух полукадров, и, если теряются строчки одного полукадра, то их заменяют строчки другого, и искажения практически незаметны) со скоростью 50 или 60 кадров в секунду, а Gh4 уже предлагает при таком же количестве кадров в секунду возможность кодировать видео как прогрессивное: 1080p60 – для регионов NTSC, 1080p50 – для остальных.

Но гораздо более важным моментом является то, что при такой настройке Gh4 кодирует видео в HD-качестве со скоростью 50 Мбит/сек, тогда как на предыдущей модели Gh3 скорость была 24 Мбит/сек, а в режиме записи 1080p30 с компрессией AII-I скорость может достигать 72 Мбита/сек. Также при битрейте 72 Мбита/сек. можно записывать видео с частотой смены кадров 24 фрейма в секунду. Появление возможности снимать прогрессивное видео в качестве Full HD и более высоким битрейтом значительно улучшают качество видео, которое может дать камера Gh4, по сравнению с предыдущей моделью.
Камера Gh4 предоставляет возможность записывать видео в трех форматах: AVCHD, МР4 и МОV; опцию съемки в Motion JPEG производители убрали как устаревшую и менее эффективную. Наилучшее качество 1080p50/60 при битрейте 28 Мбит/сек. дает режим AVCHD. Также можно выставить следующие установки: 1080i50/60 при возможности выбора битрейта, 1080p24 и 720p50/60. Переключение в режим MP4 дает возможности записи видео 1080p25/30 при битрейте 20 Мбит/сек. , 720p25/30 при битрейте 10 Мбит/сек. и VGA с частотой смены кадров 25 или 30 фреймов в секунду при битрейте 10 Мбит/сек. И, наконец, формат MOV. Здесь мы сталкиваемся с интересной особенностью: самый низкокачественный режим — VGA с частотой смены кадров 24 фрейма в секунду при битрейте 10 Мбит/сек; далее следуют три режима 720p50/60, 1080p24 и 1080p25/30, каждый из которых предлагает по два способа кодирования – IBP при битрейте 50 Мбит/сек. и AII-I при битрейте 72 Мбит/сек. Разница между этими двумя вариантами заключается в том, что AII-I подразумевает более высокое качество, поскольку каждый фрейм кодируется сам по себе безотносительно предыдущего или поледующего (отсюда более высокий битрейт). И, наконец, есть режим 1080p50/0, предлагающий кодировку в IBP при битрейте 50 Мбит/сек. и в AII-I при битрейте 72 Мбит/сек.

При установке поворотного диска режимов Gh4 на позицию Creative Movie вы можете выбирать из возможности съемки в режимах P A S M (Автоматическом, Приоритета Апертуры, Приоритета Выдержки и полностью Ручного). Скорость срабатывания затвора можно вырьировать от 1/25 до 1/4000 сек. (или в ручном режиме от ½ сек.), при этом апертура может быть любой, которую позволяет объектив. Чувствительность можно выставить на Авто или мануально задать любое из возможных значений нерасширенного диапазона. В общем можно говорить о полном контроле над экспозицией, чувствительностью и глубиной резкости при съемке видео. Еще одним шагом в сторону рынка профессиональных камер стало добавление на Gh4 в режимах MOV и AVCHD возможности записи временного кода, или тайм-кода (цифровых данных о времени, записываемых совместно с изображением и звуком для их последующей синхронизации).

Камера Gh4 также, как и предшественница, может при записи видео выдавать чистый результат 1080i через порт HDMI. Это функция очень полезна при соединении и выстраивании композиции с использованием внешниего монитора или внешний записывающего устройства. Большинство DSLR- и гибридных камер могут выдавать видео 1080i через HDMI в режиме Live View, но поверх него накладываются многочисленные иконки, и, когда вы начинаете запись, картинка очищается от дополнительной информации. В случае с Gh4 все не так: внешние мониторы могут работать с ней, выдавая хорошую, чистую картинку во процессе записи видео, при этом можно при желании сохранять дублирующее изображение на дисплее самой камеры. Кроме того, на дисплей камеры можно вывести иконки и уровень наклона камеры, сохранив при этом видео через HDMI чистым.

На Gh4 очень хорошо разработана функция сенсорной фокусировки, позволяющая во время записи видео выбирать объект, на котором бы вы хотели, чтобы камера сфокусировалась, путем касанием дисплея touch-screen. Это превосходно работает, когда нужно попеременно менять объекты в зоне фокуса, не меняя композицию (не переводя камеру). Как видно в одном из примеров видео, выложенных ниже, все-таки имеет место небольшое рысканье (и оно заметно на глаз), но тем не менее эта функция невероятно полезна и приятна для тех, кому не хочется мануально переводить фокус с одного объекта на другой и обратно.

Функция камеры Gh4, позволяющая выбирать частоту фреймов в секунду при записи видео, замедляя и убыстряя процесс, выведена по сравнению с предшествующей моделью на более высокий уровень: к режимам 80%, 160%, 200% и 300% добавили две медленные позиции 48% и 40%. В то время как быстрые режимы мало кто использует, возможность записывать на этой камере высококачественный материал на низких скоростях (со скоростью уменьшенной более чем вдвое!) очень нужное нововведение.

Видео 1. Panasonic Lumix Gh4 с объективом Lumix G X Vario 12-35 мм f/2.8: на улице при сплошной облачности, съемка с рук

Для съемки этого тестового ролика, равно как и других, помещенных ниже, на камере Lumix Gh4 выбран режим съемки видео AVCHD с разрешением 1080p50 при битрейте 28 Мбит/сек. Кодирование с более высоким битрейтом также возможно в случае с файлами MOV – пример представлен ниже. Относительно качество данного ролика у меня не возникает никаких нареканий, и система стабилизации сработала достаточно хорошо: заметных колебаний нет. У объектива 12-35 мм мануальный зум, и он приближает и удаляет достаточно плавно, но не так плавно, как моторизированные зумы, например, Olympus M.Zuiko 12-50 мм.

Видео 2. Panasonic Lumix Gh4 с объективом Lumix G Х Vario 12-35 мм f/2. 8: на улице при сплошной облачности, съемка со штативом

При съемке этого видео – панорамирование с использованием трипода – я отключал систему стабилизации. Условия сильной облачности не способствуют полноценному тестированию матрицы, но с экспозицией и балансом белого все в порядке. Автофокусировка немного неровная при движении ручного зума, но сильно она не отклоняется и быстро исправляется. Обратите внимание, что автофокусировка не сопровождается звуком, который мог бы уловить встроенный стерео-микрофон.

Видео 3. Panasonic Lumix с объективом Gh4 Lumix G Х Vario 12-35 мм f/2.8: в помещении при недостаточном освещении, съемка с рук

В середине этого видео, записанного в помещении панорамированием без штатива, постоянная автофокусировка немного сбивается (возможно, виной послужило зеркало), но, после того как только фокус находится вновь, других сбоев не происходит. Качество опять на очень высоком уровне, шумов даже меньше, чем я ожидал. Камера Gh4 прекрасно справляется с перепадами в освещении и условиями смешанной освещенности.

Видео 4. Panasonic Lumix Gh4 с объективом Lumix G Х Vario 12-35 мм f/2.8: непреравная автофокусировка

Здесь можно увидеть в действии систему непрерывной автофокусировки камеры Gh4.

Видео 5. Panasonic Lumix Gh4 Lumix G Х Vario 12-35 мм f/2.8: работа сенсорной автофокусировки touch AF

Для демонстрации функции touch AF на камере Lumix Gh4 при съемке видео я немного зумировался и сфокусировался на чашке кофе, затем стартовал запись видео и в процессе попеременно касался пальцем экрана то в зоне бара, то в зоне чашки кофе, переводя фокус с переднего плана на задний и обратно. Камера Gh4 реагировала достаточно хорошо, но несколько раз мне приходилось осуществлять дополнительное касание, чуть переменив точку для того, чтобы контрастная система автофокусировки обнаружила границу, которую она может распознать. В случае же, когда автофокусировка реагирует, она достаточна быстра и корректна – только минимальнейшее колебание в конце фокуса: система AF проходит мимо точки фокуса и затем возвращается и фиксируется на объекте.

Видео 6. Panasonic Lumix Gh4 с объективом Lumix G Х Vario 12-35 мм f/2.8: применение фильтра Miniature из набора творческих фильтров

На камере Gh4 можно снимать видео с применением творческих фильтров Creative control. При съемке с эффектом Miniature вы можете установить зону, на которой хотите сфокусироваться. Звук здесь я не записывал. Видео проигрывается с восьмикратным увеличением скорости, так что для одноминутного ролика нужно отснимать 8 минут материала.

Видео 7. Panasonic Lumix Gh4 с объективом Lumix G Х Vario 12-35 мм f/2.8: 1080р50 при битрейте 50Мбит/сек.

И напоследок ролик, демонстрирующий возможности Lumix Gh4 снимать видео 1080p50 при битрейте 50 Мбит/сек.

Удобство обращения

Тем, кто пользовался камерой Gh3, система управления Lumix Gh4 покажется очень знакомой, но до определенного момента. Самым большим отличием новой камеры от предшественницы является наличие большего числа кнопок, обеспечивающих непосредственный доступ к фукциям, которые ранее нужно было добираться через контрольную панель, Q-быстрое меню или как-то еще. Выбор режимов Drive mode намного облегчается с появлением нового колеса Drive Mode, для выставления баланса белого, чувствительности ISO и компенсации экспозиции также появились выделенные кнопки, и теперь не стоит ломать голову, как изменить эти настройки.

Эти специализированные кнопки наряду с программируемыми кнопками в количестве не менее пяти штук предполагают, что в Q-быстрое меню заходить потребуется намного реже. Однако это не означает, что оно вообще не понадабится. Кроме того, в модели G5 Panasonic, наконец-то, сделали первые шаги к тому, чтобы сделать его перепрограммируемым – об этом я так давно мечтал. На практике это означает, что вы сможете не только добавлять наиболее востребованные функции в список Q-меню, через которое вы получите быстрый и легкий доступ к ним, но и удалять ненужные, избавляя себя от необходимости каждый раз перелистывать их, желая найти нужные функции.

Наличие под видоискателем датчика глаз означает, что кнопка с двойным назначением LVF/Fn5 может использоваться более рационально, чем для переключением изображения с дисплея на видоискатель и обратно. Кроме того, с помощью кнопки Disp вы можете по своему усмотрению изменять конфигурацию дисплея: например, отображать двухосевой уровень наклона камеры относительно горизонта или выводить информацию на дисплей только в случае, если для компоновки кадра используется видоискатель.


продолжение следует…

границ | Сравнительный геномный и транскриптомный анализ предполагает эволюционную динамику генов Gh4 у злаковых

Введение

Ауксин, один из наиболее важных гормонов растений, играет важную роль в эмбриогенезе, дифференцировке сосудов, фототропизме и морфологии растений (Jain et al. , 2006; Терол и др., 2006). Гликозидгидролаза 3 Семейство генов ( Gh4 ) принадлежит к семействам ауксин-чувствительных генов и напрямую влияет на гомеостаз различных гормонов растений (Vielba, 2018; Kong et al., 2019а). Предыдущие исследования показали, что белки Gh4 могут катализировать различные реакции с использованием индол-3-уксусной кислоты (IAA), жасмоновой кислоты (JA), бензоатов и салициловой кислоты (SA) в качестве субстратов (Staswick et al. , 2002; Okrent and Wildermuth, 2011 ; Kong et al., 2019a). У растений количество членов белка Gh4 сильно варьируется: 19 в Arabidopsis thaliana (Okrent et al., 2009), 13 в Oryza sativa ssp. japonica (Jain et al., 2006; Terol et al., 2006; Fu et al., 2011; Kong et al., 2019a), 13 в Zea mays (Feng et al., 2015), 15 в Solanum lycopersicum (Kumar et al., 2012), два в Physcomitrella patens (Zhang et al., 2018) и 18 — среди Selaginella moellendorffii (Zhang et al., 2018).

В настоящее время белки Gh4 разделены на три группы на основе эволюционного анализа, сходства последовательностей и специфичности субстратов: группа I с JA и / или SA-амидосинтетазой, группа II с активностью IAA-амидосинтетазы и группа III с активностью неизвестная активность синтетазы (Staswick et al., 2002; Окрент и др., 2009). Белки Gh4 растений играют важную роль в сигнальных путях, развитии органов и архитектуре растений (Fu et al., 2011; Singh et al. , 2015; Cano et al., 2018). Среди них OsGh4-1 , OsGh4-2 , OsGh4-8 и OsGh4-13 связаны с модуляцией перекрестных помех между сигнальными путями IAA, JA и SA при биотических и / или абиотических стрессах ( Ding et al., 2008; Domingo et al., 2009; Zhang et al., 2009). OsGh4-2 участвует в устойчивости к засухе и холоду через , регулируя уровни ауксина и абсцизовой кислоты (ABA) (Ding et al., 2008; Du et al., 2012). OsGh4-8 был связан с фертильностью цветков риса и устойчивостью к болезням (Ding et al., 2008; Jian et al., 2010; Yadav et al., 2011). В другом исследовании сообщается, что сигнальный путь «auxin- miR167-ARF8-OsGh4-2 » отвечает на экзогенный ауксин (Yang et al., 2006). Кроме того, сигнальный путь « miR156f-OsSPL7-OsGh4-8 » модулирует архитектуру растения (Dai et al., 2018).

Как мы все знаем, злаковые — это большое и почти повсеместное семейство однодольных цветковых растений, известных как травы, и оно содержит много важных зерновых культур, имеющих высокую экономическую ценность, хорошо изученную филогению и многочисленные генетические ресурсы для генной инженерии. Gramineae, таким образом, представляет собой исключительную модельную систему для изучения краткосрочной эволюционной динамики семейств генов у растений. В этом исследовании были отобраны шесть важных культур злаковых ( Brachypodium distachyon , Hordeum vulgare , Setaria italica , Sorghum bicolor , Z. mays и O. sativa ssp. japonica). изучать распространение и эволюционные паттерны Gh4 генов в масштабе всего генома и систематически анализировать филогенетические отношения Gh4 генов, хромосомное положение, события дупликации, ортогруппы (Ors), силу отбора, структуру гена, белковые мотивы, цис -элементы в промоторах и профили экспрессии.Наши результаты могут обеспечить ценную основу для дальнейшего исследования расширения генов, эволюционных паттернов и функциональной дифференциации в семействе генов Gramineae Gh4 .

Материалы и методы

Идентификация и филогенетический анализ

Gh4 генов

Наборы данных генома B. distachyon (v3.0), H. vulgare (IBSC_v2), S. italica (v2.0) ), S. bicolor (NCBIv3), Z. mays (B73_RefGen_v4) и O.sativa ssp. japonica (MSU 7.0) были загружены с Ensembl Plants (http://plants.ensembl.org/index.html) и базы данных TIGR (http://rice.plantbiology.msu.edu) соответственно. Профиль HMM (Hidden Markox Model) ауксин-зависимого промотора Gh4 (PF03321) был получен от Pfam (http://pfam.xfam.org/). Все белки Gh4 были отдельно исследованы методами HMMER 3.2.1 (с параметрами по умолчанию) и BLASTP (E-значение e -5 ) (Kong et al., 2019a). Впоследствии все последовательности-кандидаты были подвергнуты SMART (http: // smart.embl-heidelberg.de/) и Pfam (http://pfam.xfam.org/search/sequence) для проверки ключевых консервативных доменов (Singh et al., 2015; Deng et al., 2019), а также белок-кандидат Gh4. последовательности без ауксин-чувствительного промотора Gh4 (PF03321) были отфильтрованы (Kong et al., 2018).

Все идентифицированные белки Gh4 были выровнены с помощью ClustalW, и дерево филогении было создано в MEGA 6. 0 с использованием метода объединения соседей с 1000 повторениями начальной загрузки (Zhang et al., 2018). Названия предполагаемых генов Gh4 были присвоены в основном на основе хромосомного порядка в каждом геноме в соответствии с предыдущим исследованием генов риса Gh4 (Jain et al., 2006; Терол и др., 2006; Kong et al., 2019a).

Хромосомные местоположения, структура генов и консервативные мотивы

Данные о хромосомных положениях и структурах генов Gh4 у всех тестируемых видов были получены из файлов GFF3 и показаны TBtools v0.665 (Chen et al., 2018) . Консервативные мотивы всех белков Gh4 были исследованы с помощью MEME Suite 5.0.2 (http://meme-suite.org/tools/meme) с максимальным количеством наборов мотивов в 20, необязательной шириной мотивов от 6 до 100 аминокислот. и другие параметры по умолчанию (Zhang et al., 2018; Kong et al., 2019b). Затем все идентифицированные мотивы были аннотированы базами данных Pfam и InterProScan (http://www.ebi. ac.uk/interpro/search/sequence-search) (Mitchell et al., 2018).

События дупликации генов, идентификация ортогрупп и селективные силы

События дупликации генов семейства Gh4 были проанализированы и классифицированы с помощью сценария duplicate_gene_classifier в MCScanX с E-значением 1e −5 в поиске BlastP (Kong et al., 2019b).В общем, пары генов с дупликацией всего генома (WGD) или сегментарной дупликации определялись, когда пары генов в двух сегментарных областях имеют коллинеарность. Когда два повторяющихся гена были последовательными, мы рассматривали пары генов как тандемные дупликации. Когда два повторяющихся гена были разделены максимум 20 генными локусами, мы рассматривали пары генов как проксимальные дупликации. В двух повторяющихся генах от одного события дупликации скорость синонимичной (Ks) / несинонимичной (Ka) замены (Ka / Ks) анализировалась с помощью DnaSP 5.0 (http://www.ub.edu/dnasp/) (Librado and Rozas, 2009), а время расхождения было оценено как T = Ks / (2 × 9,1 × 10 −9 ) × 10 — 6 Программа Mya (Deng et al. , 2019; Kong et al., 2019a).

В этом исследовании программа OrthoFinder использовалась для идентификации Gh4 Ors (Emms and Kelly, 2015). Поиск BlastP по принципу «все против всех» был проведен алмазным программным обеспечением (Buchfink et al. 2015) (https://ab.inf.uni-tuebingen.de/software/) со следующими параметрами: E-value 1e — 3 в качестве входного файла для программного обеспечения OrthoFinder, а затем Ors были идентифицированы в соответствии с опубликованными методами (Emms and Kelly, 2015).Затем с помощью DnaSP 5.0 были рассчитаны значения D всех Ор для Tajima для выборочного анализа сил среди Ор (Librado and Rozas, 2009).

цис -элементов и анализы экспрессии Gh4 генов

Последовательности промотора длиной 2 т.п.н. от стартового кодона (ATG) всех Gh4 генов этих шести тестируемых видов были представлены на веб-сайте PLANTCARE (http: //bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html) для анализа регуляторных элементов, действующих на цис ( цис -элементов) (Lescot et al. , 2002; Лю и др., 2016).

Необработанные наборы данных семи основных тканей риса (DRX000661, DRX000663, DRX000665, DRX000667, DRX000669, DRX000671 и DRX000673) были загружены из NCBI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/) и проанализированы согласно ранее опубликованная статья (Kong et al., 2019a). Метод «фрагмент на килобазу экзона на миллион картированных фрагментов» (FPKM) был принят для расчета уровней экспрессии генов (Kong et al., 2018). Кроме того, дата экспрессии тканей кукурузы 79 на разных стадиях развития была получена из браузера кукурузы eFP (Hoopes et al., 2018) (источник данных: Hoopes et al. Atlas, http://bar.utoronto.ca/efp_maize/cgi-bin/efpWeb.cgi). Для выявления реакции генов Gh4 на биотические и абиотические стрессы данные экспрессии генов кукурузы Gh4 в условиях соли, холода, тепла и Colletotrichum graminicola были загружены из браузера кукурузы eFP (Hoopes et al., 2018) (Источник данных: Hoopes et al. Stress).

Результаты

Идентификация и классификация

Gh4 генов в злаковых культурах

Мы исследовали в общей сложности 69 неизбыточных Gh4 генов от шести изученных видов, из них 17 из S. italica , 13 в Z. mays , 11 в S. bicolor , 9 в H. vulgare , 8 в B. distachyon и 11 в O. sativa ssp. japonica (Таблица S1). S. italica имел больше генов Gh4 , чем другие протестированные виды, а именно H. vulgare и B. distachyon (рисунок 1, таблица S1). Для выявления разницы в количестве генов Gh4 у этих видов была проведена групповая классификация и идентификация Or.Результаты показали, что все генов Gh4 , сгруппированные в две группы (I и II), состояли из семи Ors (рисунки 1 и 2, таблица S2). Дальнейшие исследования показали, что количество Ор сильно варьируется среди этих шести видов. Or1 и Or2 присутствовали у всех протестированных видов, в то время как Or5, Or3, Or4, Or6 и Or7 были клон-специфичными, тогда как Or5 был только у O. sativa ssp. japonica , а Or6 и Or7 присутствовали только в S. italica (рис. 1). Or1 и Or2 имеют больше генов, чем другие ОР, и эти две Ор присутствовали во всех протестированных культурах. Таким образом, мы определили эти две Ор как консервативные Ор, а другие как неконсервированные Ор. Более того, мы также заметили, что количество генов этих двух Ор было разным для разных культур. Например, Or1 показал от четырех до шести генов у S. italica , Z. mays и S. bicolor , тогда как только два-три гена у H. vulgare , B. distachyon и . O. sativa ssp. japonica . Эти результаты показали, что семейство генов Gh4 имеет клоноспецифические экспансии и гомологичную потерю / усиление генов у зерновых злаковых в процессе эволюции.

Рисунок 1 Сравнение количества генов Gh4 в шести культурах злаковых. Группы I и II отображаются в прямоугольниках разного цвета. Количество ортогрупп показано на тепловой карте: синий — низкий, красный — высокий.

Фиг. 2 Дерево филогении последовательностей белка Gh4 из H. vulgare , B. distachyon , O. sativa ssp. japonica , S. italica , S. bicolor и Z.май . Круги разного цвета представляют разные группы. Цифры в синих кружках представляют разные ортогруппы, например, 1 означает ортогруппу1. Различные виды обозначены маркерами разной формы. SiGh4-11 * и SiGh4-16 принадлежали к Orthogroup6 и Orthogroup7 соответственно.

Хромосомные местоположения и события дупликации генов

Чтобы понять механизм распространения паралогов, мы исследовали местоположения генов и способы дупликации внутри каждого вида.Из всех протестированных видов генов Gh4 были неравномерно распределены по всем хромосомам (Chrs) (рис. 3). Например, было три, четыре и один ген Gh4 в Chr1, Chr2 и Chr4, соответственно, в то время как ген Gh4 отсутствовал в Chr3 и Chr5 (рис. 3A). Интересно, что гены ячменя Gh4 локализованы в проксимальных областях хромосом, которые являются динамическими частями хромосом и очень склонны к сегментарным или тандемным дупликациям (Ablazov, Tombuloglu, 2016; Bostancioglu et al. , 2018; Томбулоглу, 2018; Tombuloglu et al., 2019). Кроме того, события WGD или сегментарной дупликации были обнаружены у B. distachyon , S. bicolor , S. italica , Z. mays и O. sativa ssp. japonica , в то время как тандемное дублирование, проксимальное и дисперсное дублирование не было обнаружено среди этих культур (Рисунки 3A – F). Этот результат предполагает, что WGD или события сегментарной дупликации были основным способом экспансии гена семейства Gh4 в зерновых культурах.Интересно, что события WGD или сегментарной дупликации существовали только в Or1 (семь пар) и Or2 (две пары) (Рисунок 3), указывая на то, что расширения генов имели Or-специфичность.

Рисунок 3 Расположение хромосом и события дупликации генов Gh4 у шести видов, а именно, B. distachyon (A) , H. vulgare (B) , S. bicolor (C) , S. italica (D) , Z. mays (E) и O.sativa ssp. japonica (Ф) . Желтые и черные линии представляют события WGD или сегментарного дублирования в Orthogroup2 (Or2) и Orthogroup1 (Or1), соответственно.

Анализ скоростей Ka / Ks пар дублированных генов (Таблица S3) показал, что отношения Ka / Ks всех пар дублированных генов были меньше 1, что позволяет предположить, что они прошли очищающий отбор в соответствии с нейтральной теорией. Время дивергенции всех пар повторяющихся генов варьировало от 5,43 до 27,70 млн лет назад, за исключением SiGh4-3 и SiGh4-8 (61.43 млн лет назад) (Таблица S3). Эти результаты показали, что события дупликации происходят на разных стадиях и играют важную роль в расширении семейства генов Gh4 .

Характеристики последовательностей и анализ числа интронов

В этом исследовании с использованием набора MEME было обнаружено 20 консервативных мотивов (фиг. 4, таблица S4). Мы наблюдали, что все белки Gh4 показали сходное расположение мотивов, и большинство идентифицированных консервативных мотивов были частями ауксин-зависимого промоторного домена Gh4 (Таблица S4), что означает, что последовательности белков членов семейства генов Gh4 очень консервативны среди разных групп / или в этих испытанных культурах злаковых. По сравнению с расположением мотивов, структуры интронов / экзонов всех генов Gh4 явно различались в разных группах, даже в Ors. Филогенетическое дерево, номера экзонов / интронов в CDS и идентифицированные Ors могут разделить все гены Gh4 на очевидную классификацию. Гены Or2, Or3 и Or4 содержат больше экзонов в CDS, чем Or1 и Or5. Эти результаты показали, что было дифференцировано генов Gh4 и из разных Ors.

Рисунок 4 Филогенетическое дерево, структура экзонов / интронов и консервативные мотивы генов Gh4 у этих шести видов.Дерево филогении последовательностей белка Gh4 из H. vulgare , B. distachyon , O. sativa ssp. japonica , S. italica , S. bicolor и Z. mays . Ветви разного цвета представляют разные группы. Разные виды обозначены маркерами разной формы, а «Ор» означает ортогруппу. Относительные длины генов и белков показаны шириной серых полос. Экзоны и интроны показаны желтыми прямоугольниками и серыми линиями соответственно.

Анализ селективных сил, экспрессия и функциональные расхождения

Для выяснения эволюционных сил и расхождений в паттернах различных Gh4 Ors среди злаковых были рассчитаны D Таджимы и средние значения экспрессии Ors. Мы обнаружили, что все Ors были подвергнуты строгой очистке и варьировались от -0,3 до -0,9049 (таблица S5). Эти результаты показали, что гены в разных Ors сталкиваются с разной скоростью эволюции и давлением очищающего отбора в процессе эволюции.

Паттерны экспрессии семи основных тканей показали, что консервативные Ors (Or1 и Or2) имели более высокие средние значения экспрессии, чем неконсервативные Ors (Or3, Or4 и Or5) (Таблица S5) в рисе и кукурузе. Дальнейшие исследования показали, что OsGh4-2 , OsGh4-4 и OsGh4-8 (все в Or1) имели сходную экспрессию с высокими уровнями экспрессии в каллусе, метелке и зрелых семенах, тогда как OsGh4-3 и OsGh4-5 (оба в Or2) показали совершенно разные профили экспрессии (рис. 5).Этот результат показал, что гены в Or1 могут быть избыточными, тогда как гены в Or2 обладают функциональной дифференцировкой. Интересно, что мы обнаружили паттерны экспрессии одного события WGD или сегментарной дупликации ( OsGh4-1 и OsGh4-4 ). OsGh4-1 не экспрессировался ни в одной ткани (фиг. 5), что указывает на то, что этот ген подвергся псевдогенизации после события дупликации. По-разному, у кукурузы ZmGh4-2 и ZmGh4-8 (одно событие WGD или сегментарной дупликации) показали аналогичные паттерны экспрессии (рисунок S1 и таблица S6), что означает, что эти два гена функционально избыточны.Кроме того, мы обнаружили, что оставшиеся гены кукурузы Gh4 демонстрировали явно разные паттерны экспрессии. Например, ZmGh4-10 показал высокий уровень экспрессии в листе; ZmGh4-12 высоко экспрессируется на мейотической кисточке V18; ZmGh4-7 сильно экспрессируется в пыльниках R1.

Рисунок 5 Профили экспрессии OsGh4 генов в различных тканях. Значения на цветовой шкале представляют собой log 2 FPKM : красный / зеленый означает высокий / низкий уровень распространенности транскриптов.

Предыдущие исследования показали, что генов Gh4 играют важную роль в биотических и абиотических стрессах (Fu et al., 2011; Zhang et al., 2018; Kong et al., 2019a). Таким образом, мы исследовали изменения экспрессии гена кукурузы Gh4 при солевом стрессе, холодовом стрессе, тепловом стрессе и после заражения C. graminicola (рисунок 6 и таблица S7). В условиях солевого, холодного и теплового стресса большинство генов кукурузы Gh4 демонстрировали очевидное подавление регуляции. Однако ZmGh4-1 показал высокую повышающую регуляцию при холодовом стрессе; ZmGh4-9 сильно активировался при тепловом стрессе; ZmGh4-2 показал четкую активацию при солевом стрессе; ZmGh4-8 показал небольшое повышающее регулирование при холодных и тепловых нагрузках.Точно так же подавление экспрессии большинства генов кукурузы Gh4 произошло после заражения C. graminicola . Только два гена кукурузы Gh4 ( ZmGh4-2 и ZmGh4-8 ) имеют довольно высокую повышающую регуляцию (> 30).

Рисунок 6 Складки изменения экспрессии Gh4 генов в условиях соли, холода и тепла (A) , а также после заражения C. graminicola (B) . Кратность изменения экспрессии = значение выражения обработанного образца / значение выражения контрольного образца.Значения в цветовой шкале представляют собой изменения от более низкого (синий цвет) к более высокому (красный цвет).

цис- -элементы в промоторных областях гена могут регулировать экспрессию гена, что дает важную информацию о предсказании функции генов. Всего 21 цис- -элементов было идентифицировано через веб-сайт PLANTCARE (Lescot et al., 2002) и сгруппировано в четыре категории, а именно: светочувствительность, рост и развитие, стресс-реакция и фитогормоновый ответ (рис. 7).Результат позиционирования цис- -элементов показал, что цис- -элементов были неравномерно распределены на промоторах всех генов Gh4 (рис. 7А). Мы обнаружили, что 46% элементов принадлежали к категории ответа фитогормона и участвовали в реакции на ауксин (элемент TGA и элемент AuxRR), отзывчивость ABA (ABRE), отзывчивость MeJA (мотив CGTCA и мотив TGACG), отзывчивость SA (элемент TCA), и мотивы реакции на гиббереллин (P-box, TATC box и GARE) (фиг. 7B).Двадцать процентов элементов относились к категории стрессовой реакции, связанной с множественными стрессами, такими как засуха (MBS) и низкие температуры (LTR) (Рисунок 7B). Кроме того, мотивы G-box, Sp1 и GT1 относились к категории светочувствительности и покрывали 30% всех элементов (рис. 7B). Более того, четыре элемента (RY-элемент, мотив GCN4, MAS-подобный и HD-Zip1) в категории роста и развития связаны с несколькими процессами (Рисунок 7B). Принимая во внимание эти результаты, мы предположили, что Gh4 генов участвуют в светочувствительной реакции, ответе на фитогормоны, реакции на стресс, а также в росте и развитии растений.

Рисунок 7 цис — Действующие элементы во всех генах Gh4 у злаковых культур. (A) cis — Действующие элементы всех генов Gh4 показаны в соответствии с филогенетическим деревом. Разноцветные прямоугольники указывают на разные промоторные элементы в каждом гене Gh4 . (B) Круговые диаграммы разных размеров представляют соотношение каждого промоутерского элемента в каждой категории.

Обсуждение

Эволюция

генов Gh4 в посевах злаковых

В текущем исследовании было идентифицировано 69 генов Gh4 из шести культур злаковых.Мы не обнаружили прямой связи между размером генома и количеством генов Gh4 . Например, в S. italica было 17 генов Gh4 (размер генома: 490 Мбит / с), а в H. vulgare было девять генов (размер генома: 4,79 Гбит / с). Кроме того, не было прямой связи между WGD и количеством генов Gh4 . Предыдущие исследования показали, что Z. mays подверглись одной конкретной WGD больше, чем другие растения злаковых (Swigoňová et al. , 2004). Однако в этом исследовании Z. mays содержало меньше генов Gh4 , чем S. italica . Кроме того, количество и размеры Ors сильно различаются между этими протестированными культурами злаковых, что указывает на то, что семейство генов Gh4 претерпело различные эволюционные подходы у разных видов, и этот вывод также подтверждается нашими результатами идентификации Or и селективной силой. Наши результаты подтвердили теоретические модели эволюции семейств генов, согласно которым семейства генов постоянно подвергаются событиям стохастического роста и потери (Zimmer et al., 1980; Рид и Хьюз, 2004; Hahn et al., 2005). Хорошо известно, что тандемная дупликация генов, сегментная дупликация, транспозиции и WGDs играют важную роль в биологической эволюции (Xu et al., 2012). В нашем исследовании мы наблюдали, что повторяющиеся пары генов развивались в результате WGD или сегментарной дупликации, в то время как пары генов не наблюдались в результате дупликации другого типа, указывая, что WGD или сегментарная дупликация сыграли важную роль в расширении семейства генов Gh4 в некоторых странах. Виды злаковых.Наше более раннее исследование эволюции семейства генов Gh4 в роде Oryza также подтвердило этот вывод (Kong et al., 2019a). Более того, мы заметили, что время расхождения всех пар повторяющихся генов варьировало от 5,43 до 61,43 млн лет назад, включая OsGh4-1 и OsGh4-4 (23,48 млн лет назад). Наше предыдущее исследование в роде Oryza также показало время дивергенции гомологичных пар генов Gh4-1 и OsGh4-4 , которое варьировалось от 23.07 до 31.01 Mya (Kong et al., 2019a). Эти результаты показали, что события WGD или сегментарной дупликации играют более важную роль в B. distachyon , S. italica , Z. mays и S. bicolor , чем H. vulgare и O. sativa. ssp. japonica .

Функциональное разнообразие в генах

Gh4

Гены Gh4 регулируют различные биологические процессы (Cano et al., 2018) и управляют многими фундаментальными аспектами роста и развития растений (Liu et al. , 2016; Вильба, 2018; Zhang et al., 2018; Kong et al., 2019a). В этом исследовании были идентифицированы многие элементы светочувствительности, роста и развития, стресс-реакции и ответа на фитогормоны, и было подтверждено, что гены Gh4 могут регулировать различные процессы роста и развития растений. Селективные силы (Tajima’s D ) и анализ экспрессии генов из общедоступных данных могут помочь нам узнать о функциональном разнообразии генов Gh4 . Мы обнаружили, что разные ОР находились под разными значениями селективных сил, что может привести к функциональной дифференциации между этими ОР.Как и ожидалось, разные Ors показали разные паттерны экспрессии: консервативные Ors показали более высокие уровни экспрессии и более широкую экспрессию в тканях, чем неконсервативные Ors. Эти паттерны экспрессии подтвердили функциональную дифференциацию различных Ors. Кроме того, консервативные Ors показали очевидное количественное увеличение, чем несохраняемые Ors, такие как Or2 по сравнению с Or5 и Or1 по сравнению с Or3. Таким образом, мы предполагаем, что расширение Ors связано с адаптацией растений к окружающей среде. Текущие гипотезы предполагают, что повторяющиеся пары генов сталкиваются с четырьмя судьбами, сопровождаемыми функциональным изменением после событий дупликации генов (Lynch and Force, 2000; He and Zhang, 2005; Conant and Wolfe, 2008): функции потери (псевдогенизация), новые функции (неофункционализация), разделение исходных функций (субфункционализация) и субфункционализация с последующей неофункционализацией (субнеофункционализация).Мы обнаружили избыточность генов (гены в Or1), субфункционализацию (гены в Or2) и псевдогенизацию ( OsGh4-1 и OsGh4-4 ) в семействе генов Gh4 и поддержали функциональное разнообразие в генах Gh4 .

Gh4 Гены играют важную роль в ответах на рост растений, биотические и абиотические стрессы

Соль, холод и тепло являются основными абиотическими стрессами, которые часто влияют на рост и развитие растений в различных природных условиях (Feng et al. , 2015; Kong et al., 2019a; Kong et al., 2019b). Связанная с ауксином регуляция транскрипции важна для растений, чтобы выжить и адаптироваться к неблагоприятным экологическим проблемам (Feng et al., 2015; Kong et al., 2019a). Например, OsGh4-2 может повысить устойчивость к засухе и холоду через , регулируя уровни АБК (Ding et al., 2008; Du et al., 2012). Наше более раннее исследование также показало, что OsGh4-2 и OsGh4-8 показали очевидную активацию при солевом стрессе и играют важную роль в толерантности риса к соли (Kong et al., 2019а). В этом исследовании наш результат показал, что ZmGh4-1 , ZmGh4-9 , ZmGh4-2 и ZmGh4-8 реагировали на холод, тепло, соль, а также холодный и солевой стрессы. Эти результаты свидетельствуют о том, что генов Gh4 тесно связаны с различными абиотическими стрессами. Кроме того, наш результат экспрессии также показал, что ZmGh4-2 и ZmGh4-8 показали высокую регуляцию после заражения C. graminicola (> 30 раз), что указывает на то, что эти два гена играют важную роль в C.graminicola реакция и толерантность. В целом, ZmGh4-2 и ZmGh4-8 могут быть хорошими генами-кандидатами для генно-инженерной селекции против различных биотических и абиотических стрессов.

Выводы

Таким образом, расходящиеся паттерны генов Gh4 в шести культурах злаковых наблюдались по многим аспектам, включая филогенетические отношения, хромосомное положение, события дупликации, ОР, селективную силу, структуру гена, белковые мотивы, цис — элементы и шаблоны выражения.Эти результаты показали, что специфичные для клонов экспансии и потеря / усиление гомологичных генов происходили в процессе эволюции. Gh4 Семейство генов злаковых культур ограничивалось строгой очистительной селекцией. Различные селективные значения Ors могут быть связаны с функциональным разнообразием. Взятые вместе, наши результаты будут интерпретировать всестороннее понимание эволюции семейства генов Gh4 в зерновых культурах.

Заявление о доступности данных

Все наборы данных для этого исследования включены в рукопись / дополнительные файлы.

Вклад авторов

WK разработал и провел эксперименты. YZ, XD, SL и CZ проанализировали части данных или подготовили части рисунков и таблиц. YL предоставил руководство по всей рукописи. Все авторы рассмотрели и одобрили окончательную заявку.

Финансирование

Это исследование финансировалось Национальной программой ключевых исследований и разработок Китая (грант 2016YFD0100400) и Национальным специальным ключевым проектом по трансгенному разведению (грант 2016ZX08001001).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Мы благодарим рецензентов и редактора за их внимательное чтение и полезные комментарии к этой рукописи.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: //www.frontiersin.org / article / 10.3389 / fpls.2019.01297 / full # additional-material

Таблица S1 | Сводная информация о генах Gh4 у шести зерновых культур.

Стол S2 | Ортогруппы среди шести злаковых культур.

Стол S3 | Отношения Ka / Ks и время расхождения пар повторяющихся генов.

Стол S4 | Аннотация консервативных мотивов во всех белках Gh4.

Стол S5 | D Таджимы и средние значения экспрессии Ors. (A) D Tajima для каждого Or был рассчитан с помощью DnaSP 5.0 (Librado and Rozas, 2009). (B) Средние значения экспрессии (среднее значение FPKM = общее значение FPKM всех генов в Or / число гена в Or) всех Ors риса. (C) Средние значения экспрессии (тот же метод расчета, что и на рисунке B) для всех кукурузы Ors.

Стол S6 | Значения экспрессии генов кукурузы Gh4 в 79 тканях на разных стадиях.

Стол S7 | Значения экспрессии генов кукурузы Gh4 в условиях соли, холода и тепла, а также после C.graminicola инфекция.

Рисунок S1 | Профили экспрессии генов ZmGh4 в различных тканях на разных стадиях. Значения на цветовой шкале представляют собой значения выражений: красный / зеленый указывает на высокий / низкий уровень распространенности транскриптов.

Список литературы

Аблазов А., Томбулоглу Х. (2016). Полногеномная идентификация семейства генов локуса устойчивости к милдью O ( MLO ) у новых модельных видов злаков Brachypodium distachyon . евро. J. Plant Pathol. 145 (2), 239–253. doi: 10.1007 / s10658-015-0833-2

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Bostancioglu, S. M., Tombuloglu, G., Tombuloglu, H. (2018). Полногеномная идентификация MC (метакаспаз) ячменя и их возможная роль в индуцированной бором запрограммированной гибели клеток. Мол. Биол. Отчет 45 (9), 1–15. doi: 10.1007 / s11033-018-4154-3

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Cano, A., Sanchez-Garcia, A.Б., Альбасете А., Гонсалес-Байон Р., Жустаманте М. С., Ибанез С. и др. (2018). Усиленная конъюгация ауксина ферментами Gh4 приводит к плохому укоренению придаточных корней в черенках стеблей гвоздики. Фронт. Plant Sci. 9, 566. doi: 10.3389 / Fpls.2018.00566

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Chen, C., Xia, R., Chen, H., He, Y. (2018). TBtools, набор инструментов для биологов, объединяющий различные инструменты обработки биологических данных с удобным интерфейсом. BioRxiv [Препринт]. doi: 10.1101 / 289660

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Dai, Z., Wang, J., Yang, X., Lu, H., Miao, X., Shi, Z. (2018). Модуляция архитектуры растения с помощью пути miR156f – OsSPL7 – OsGh4.8 в рисе. J. Exp. Бот. 69 (21), 5117–5130. doi: 10. 1093 / jxb / ery273

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Deng, X., An, B., Zhong, H., Yang, J., Kong, W., Li, Y. (2019). Новое понимание функциональной дивергенции семейства генов MST в рисе, основанное на комплексных паттернах экспрессии. Genes 10 (3), 239. doi: 10.3390 / genes10030239

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ding, X., Cao, Y., Huang, L., Zhao, J., Xu, C., Li, X., et al. (2008). Активация индол-3-уксусной кислоты и амидосинтетазы Gh4-8 подавляет экспрессию экспансина и способствует развитию не зависящего от салицилата и жасмоната базального иммунитета риса. Растительная клетка 20 (1), 228–240. doi: 10.1105 / tpc.107.055657

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Доминго, К.Ф., Тарро, Д., Иглесиас, Д. Дж., Талон, М. (2009). Конститутивная экспрессия OsGh4.1 снижает содержание ауксина и усиливает защитную реакцию и устойчивость к грибковому патогену в рисе. Мол. Взаимодействие растений и микробов. 22 (2), 201–210. doi: 10.1094 / MPMI-22-2-0201

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ду, Х., Ву, Н., Фу, Дж., Ван, С. П., Ли, Х. Х., Сяо, Дж. Х. и др. (2012). Член семейства Gh4 , OsGh4-2 , модулирует уровни ауксина и абсцизовой кислоты и по-разному влияет на устойчивость риса к засухе и холоду. J. Exp. Бот. 63 (18), 6467–6480. doi: 10.1093 / jxb / ers300

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эммс, Д. М., Келли, С. (2015). OrthoFinder: устранение фундаментальных ошибок при сравнении всего генома значительно повышает точность вывода ортогруппы. Genome Biol. 16 (1), 157. doi: 10.1186 / s13059-015-0721-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Feng, S., Yue, R., Tao, S., Yang, Y., Zhang, L., Xu, M., et al. (2015). Полногеномная идентификация, анализ экспрессии генов семейства Gh4 , чувствительных к ауксину, у кукурузы ( Zea mays L. ) в условиях абиотических стрессов. J. Integr. Plant Biol. 57 (9), 783–795. doi: 10.1111 / jipb.12327

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Fu, J., Yu, H., Li, X., Xiao, J., Wang, S. (2011). Семейство генов Rice Gh4 : регуляторы роста и развития. Завод Сигнал. Behav. 6 (4), 570–574.doi: 10.4161 / psb.6.4.14947

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Hahn, M. W., De Bie, T., Stajich, J. E., Nguyen, C., Cristianini, N. (2005). Оценка темпа и способа эволюции семейства генов на основе сравнительных геномных данных. Genome Res. 15 (8), 1153–1160. doi: 10.1101 / gr.3567505

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

He, X. L., Zhang, J. Z. (2005). Быстрая субфункционализация, сопровождающаяся длительной и значительной неофункционализацией в эволюции дублирующих генов. Генетика 169 (2), 1157–1164. doi: 10.1534 / genetics.104.037051

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хупес, Г. М., Гамильтон, Дж. П., Вуд, Дж. К., Эстебан, Э., Буэлл, К. Р. (2018). Обновленный атлас генов кукурузы раскрывает органоспецифические и вызванные стрессом гены. Plant J. 97 (6): 1154–1167. doi: 10.1111 / tpj.14184

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джайн, М., Каур, Н., Тьяги, А. К., Хурана, Дж. П. (2006).Ауксин-чувствительное семейство генов Gh4 в рисе ( Oryza sativa ). Функц. Интегр. Геномика 6 (1), 36–46. doi: 10.1007 / s10142-005-0142-5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Jian, Z., Nallamilli, B.R., Hana, M., Zhaohua, P. (2010). OsMADS6 играет важную роль в накоплении питательных веществ в эндосперме и подвергается эпигенетической регуляции у риса ( Oryza sativa ). Plant J. 64 (4), 604–617.doi: 10.1111 / j.1365-313X.2010.04354.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Kong, W., Bendahmane, M., Fu, X. (2018). Полногеномная идентификация и характеристика аквапоринов и их роль в процессах раскрытия цветков у гвоздики ( Dianthus caryophyllus ). Molecules 23 (8), 1895. doi: 10.3390 / Molecules23081895

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Kong, W., Gong, Z., Zhong, H., Zhang, Y., Zhao, G., Гаутам М. и др. (2019b). Распространение и паттерны эволюции гликозилтрансфераз семейства 8 в геномах злаковых культур и их экспрессия в условиях солевого и холодового стресса в Oryza sativa ssp. japonica . Биомолекулы 9 (5), 188. doi: 10.3390 / biom88

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Kong, W., Zhong, H., Deng, X., Gautam, M., Gong, Z., Zhang, Y., et al. (2019a). Эволюционный анализ генов Gh4 у шести видов / подвидов Oryza и их экспрессия в условиях солевого стресса у Oryza sativa ssp. japonica . Растения 8 (2), 30. doi: 10.3390 / Растения8020030

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кумар, Р., Агарвал, П., Тьяги, А. К., Шарма, А. К. (2012). Полногеномное исследование и анализ экспрессии предполагают различные роли ауксин-зависимых генов Gh4 во время развития и реакции на различные стимулы в томате ( Solanum lycopersicum ). Мол. Genet. Геномика 287 (3), 221–235. doi: 10.1007 / s00438-011-0672-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Леско, М., Dehais, P., Thijs, G., Marchal, K., Moreau, Y., de Peer, Y., et al. (2002). PlantCARE, база данных регуляторных элементов, действующих на цис растений , и портал к инструментам для анализа промоторных последовательностей in silico. Nucleic Acids Res. 30 (1), 325–327. doi: 10.1093 / Nar / 30.1.325

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Liu, K. D., Wang, J. X., Li, H. L., Zhong, J. D., Feng, S. X., Pan, Y. L., et al. (2016). Идентификация, экспрессия и анализ активности ИУК-амидсинтетазы Gretchen Hagen 3 в плодах папайи ( Carica papaya L.) во время послеуборочного процесса. Фронт. Plant Sci. 7, 1555. doi: 10.3389 / Fpls.2016.01555

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Mitchell, A. L., Attwood, T. K., Babbitt, P. C., Blum, M., Bork, P., Bridge, A., et al. (2018). InterPro в 2019 году: улучшение охвата, классификации и доступа к аннотациям последовательностей белков. Nucleic Acids Res. 47 (D1), D351 – D360. doi: 10.1093 / nar / gky1100

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Окрент, Р.А., Брукс, М. Д., Вильдермут, М. С. (2009). Arabidopsis Gh4. 12 (PBS3) конъюгирует аминокислоты с 4-замещенными бензоатами и ингибируется салицилатом. J. Biol. Chem. 284 (15), 9742–9754. doi: 10.1074 / jbc.M806662200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сингх В. К., Джайн М., Гарг Р. (2015). Полногеномный анализ и профили экспрессии предполагают различную роль генов Gh4 во время развития и реакции на абиотический стресс у бобовых. Фронт. Plant Sci. 5, 789. doi: 10.3389 / fpls.2014.00789

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Staswick, P. E., Tiryaki, I., Rowe, M. L. (2002). Локус жасмонатного ответа JAR1 и несколько родственных генов Arabidopsis кодируют ферменты надсемейства люцифераз светлячков, которые проявляют активность в отношении жасмоновой, салициловой и индол-3-уксусной кислот в анализе на аденилирование. Растительная клетка 14 (6), 1405–1415. doi: 10.1105 / tpc.000885

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Swigoňová, Z., Lai, J., Ma, J., Ramakrishna, W., Llaca, V., Bennetzen, J. L., et al. (2004). Тесное разделение геномов-предшественников сорго и кукурузы. Genome Res. 14 (10a), 1916–1923. doi: 10.1101 / gr.2332504

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Терол, Дж., Доминго, К., Талон, М. (2006). Семейство Gh4 в растениях: полногеномный анализ риса и история эволюции на основе анализа EST. Ген 371 (2), 279–290. DOI: 10.1016 / j.gene.2005.12.014

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Tombuloglu, G., Tombuloglu, H., Cevik, E., Sabit, H. (2019). Полногеномная идентификация семейства генов киназы, подобной рецептору лизина ( LysM-RLK ), в Brachypodium distachyon и стыковочный анализ связывания хитина / LYK. Physiol. Мол. Завод Патол. 106, 217–225. doi: 10.1016 / j.pmpp.2019.03.002

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Tombuloglu, H.(2018). Полногеномный анализ семейства генов факторов ответа на ауксин ( ARF ) ячменя ( Hordeum vulgare L.). J. Plant Biochem. Biotechnol. (1), 1–11. doi: 10.1007 / s13562-018-0458-6

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вильба, Дж. М. (2018). Идентификация и первоначальная характеристика новой подгруппы в семействе генов Gh4 у древесных растений. J. Plant Biochem. Biotechnol. 1–11. doi: 10.1007 / s13562-018-0477-3

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сюй, Г., Го, К., Шан, Х., Конг, Х. (2012). Расхождение генов-дубликатов в экзон-интронной структуре. Proc. Natl. Акад. Sci. 109 (4), 1187–1192. doi: 10.1073 / pnas.11009

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Yadav, S. R., Khanday, I., Majhi, B. B., Veluthambi, K., Vijayraghavan, U. (2011). Ауксин-чувствительный OsMGh4 , распространенная нижестоящая цель для OsMADS1 и OsMADS6 , контролирует фертильность рисовых цветков. Physiol растительных клеток. 52 (52), 2123–2135. doi: 10.1093 / pcp / pcr142

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ян, Дж. Х., Хан, С. Дж., Юн, Э. К., Ли, В. С. (2006). Доказательства сигнального пути ауксина, microRNA167-ARF8-Gh4 , и его ответа на экзогенный ауксин в культивируемых клетках риса. Nucleic Acids Res. 34 (6), 1892–1899. doi: 10.1093 / nar / gkl118

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhang, C., Zhang, L., Wang, D., Ма, Х., Лю, Б., Ши, З. и др. (2018). История эволюции семейства гликозидгидролазы 3 ( Gh4 ) основана на секвенировании геномов 48 растений и идентификации белков Gh4, связанных с жасмоновой кислотой, в Solanum tuberosum . Внутр. J. Mol. Sci. 19 (7), 1850. doi: 10.3390 / ijms1

50

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhang, S. , Li, C., Cao, J., Zhang, Y., Zhang, S., Xia, Y., et al. (2009). Измененная архитектура и повышенная засухоустойчивость риса за счет подавления индол-3-уксусной кислоты с помощью TLD1 / OsGh4.13 активация. Plant Physiol. 151 (4), 1889–1901. doi: 10.1104 / pp.109.146803

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Циммер, Э., Мартин, С., Беверли, С., Кан, Ю., Уилсон, А. С. (1980). Быстрая дупликация и потеря генов, кодирующих альфа-цепи гемоглобина. Proc. Natl. Акад. Sci. 77 (4), 2158–2162. doi: 10.1073 / pnas.77.4.2158

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Обзор Panasonic Gh4 — Обзор CameraStuff

Panasonic Gh4 — это новейшая цифровая беззеркальная камера Panasonic DSLM из серии GH, верхней серии камер Panasonic G.Термин DSLM может сбивать с толку, потому что беззеркальные камеры обычно называют CSC (Compact System Cameras). С другой стороны, мы знакомы с концепцией DSLR. И DSLM показывает, в чем именно заключается основная разница: мы имеем дело с беззеркальной камерой Panasonic Gh4, которая выглядит как SLR. Panasonic Gh4 предлагает такое же удобство для пользователя и такое же качество изображения, как и цифровая зеркальная фотокамера, но с меньшим весом и более компактными объективами. Поскольку мотор автофокуса Panasonic Gh4 управляется сигналом датчика, а не отдельным блоком вне датчика, нет заднего или переднего фокуса.Более того, фокусировка с помощью видео, в отличие от зеркальных фотоаппаратов, такая же быстрая, как и при фотосъемке. Пользователи видео знают, что Panasonic Gh3 отличается удобством использования и качеством изображения. От пользователей Panasonic Gh3, которые взломали прошивку Panasonic с помощью программного обеспечения на Personalview.com, вы можете найти видеозаписи профессионального качества. Комментарии к Panasonic Gh3 заключаются в том, что камера не предназначена для использования в экстремальных условиях, камера мала по сравнению с SLR, а электронный видоискатель менее красив, чем оптический видоискатель, особенно в темноте.Чтобы перейти к сути: все эти моменты значительно улучшены в Gh4.

Дизайн

Компания Panasonic нацелена на профессиональных фотографов с этой камерой, о чем свидетельствует ее алюминиевый корпус, защищенный от пыли и водяных брызг. Два из трех наиболее очевидных объективов Panasonic для этой камеры (Panasonic 12-35 мм и Panasonic 35-100 мм) также защищены от пыли и водяных брызг. К сожалению, Panasonic Lumix 7-14 мм пока нет.

Panasonic Gh4 выполнен в стиле традиционной SLR, а с точки зрения эргономики камера покажется знакомой любому, кто привык к SLR.Размер камеры во многом зависит от вкуса: Panasonic Gh4 немного больше, чем Panasonic G5, но Panasonic Gh4 по-прежнему маленький и легкий по сравнению с профессиональными зеркальными фотоаппаратами Canon и Nikon.

Кнопки на Panasonic Gh4 являются большим преимуществом по сравнению с другими камерами Micro-43 (читай: Olympus OM-D E-M5 или Panasonic G5). Поскольку компактные системные камеры настолько малы, производители камер вынуждены делать кнопки на камере меньше или делать некоторые функции настраиваемыми только с помощью меню. На Panasonic Gh4 все кнопки достаточно большие для удобного использования. Для всех основных функций есть кнопка, как в профессиональных зеркальных фотокамерах от Nikon и Canon. Например, Panasonic Gh4 имеет колесо справа спереди и справа сзади корпуса, с помощью которого вы регулируете выдержку и диафрагму большим и указательным пальцами при ручной экспозиции. Это очень хорошо и, к сожалению, невозможно с любительскими моделями зеркальных фотоаппаратов Canon и Nikon. На камере есть несколько настраиваемых функциональных кнопок, которым вы можете назначить задание самостоятельно.С дополнительной батарейной ручкой DMW-BGGh4 срок службы Panasonic Gh4 увеличен до более чем 1000 фотографий. В дополнение к кнопке спуска затвора наверху, батарейная рукоятка имеет три кнопки для регулировки экспозиции, ISO, баланса белого и диски на передней и задней панели, которыми можно управлять так же, как кнопки на самом DMC-Gh4. Рукоятка также является водонепроницаемой от пыли и брызг. Это важные особенности для профессиональных фотографов.

Panasonic Gh4 по сравнению с Panasonic Gh3

  • Panasonic Gh4 дополнительно защищен от пыли и водяных брызг и имеет встроенный Wi-Fi
  • Panasonic Gh4 имеет больший и яркий видоискатель OLED (по сравнению с ЖК-дисплеем для Gh3) и дисплей с более высокое разрешение
  • Lumix Gh4 имеет более широкий диапазон ISO (125-25 600), чем Gh3 (160-12 800)
  • Качество видео еще лучше (битрейт до 72 МБ / с и 180p при 60 кадрах в секунду)
  • Panasonic Gh3 меньше и легче, чем Gh4
  • Lumix Gh4 имеет электронный затвор, с помощью которого вы можете делать снимки бесшумно (в том числе во время видеозаписи!)

Panasonic Gh4 по сравнению с Olympus OM-D EM-5 и Panasonic G5

Наиболее очевидные камеры формата Micro-43 для сравнения с Panasonic Gh4 — это Olympus OM-D EM-5 и Panasonic G5.И OM-D, и G5 предлагают очень хорошее качество изображения, но они более компактны, чем Panasonic Gh4. Размер фотоаппарата во многом зависит от вкуса. Многие профессиональные фотографы предпочитают камеру большего размера, в которой достаточно места для больших, легко управляемых кнопок на камере. С точки зрения эргономики и удобства использования Panasonic Gh4 — это камера формата micro-43, наиболее близкая к профессиональной SLR. Если вы немного меняете настройки своей камеры и предпочитаете более компактную камеру с высоким качеством изображения, вы можете выбрать OM-D или G5.Что касается видео, и G5, и OM-D не являются альтернативой Panasonic Gh4. Многие опытные видеооператоры даже предпочитают серию Panasonic GH профессиональным SLR, потому что серия Panasonic GH эквивалентна или лучше с точки зрения качества видео, но при этом более компактна.

Panasonic Gh4 против Nikon D3200, Canon 650D

  • Эти три камеры примерно одинакового размера
  • Nikon D3200 имеет больше мегапикселей с 24 МП, чем Canon 650D (18 МП) и Gh4 (16 МП)
  • Nikon D3200 и Canon 650D не имеет алюминиевого корпуса и не имеет дополнительной защиты от пыли и брызг воды
  • Panasonic Gh4 предлагает видео с гораздо более быстрой автофокусировкой, лучшими характеристиками (60p Full HD) и выходом HDMI с изображением в реальном времени
  • Gh4 — единственный с встроенный Wi-Fi, поэтому вы можете обмениваться файлами по беспроводной сети или управлять камерой через смартфон.
  • Как и профессиональные камеры Canon и Nikon, Panasonic Gh4 имеет два колеса, с помощью которых вы можете отдельно устанавливать выдержку и диафрагму.В D3200 и 650D этого нет.
  • Panasonic Gh4 — самая дорогая из этих трех камер и единственная, имеющая полностью бесшумный электронный затвор (для ISO 1600)

Видоискатель, экран и меню

И видоискатель, и свободно вращающийся экран на фотоаппарате На задней панели LUMIX Gh4 есть очень красивые OLED-экраны. Цвет видоискателя не совсем такой, как у окончательного результата. Наши изображения, снятые в вольфрамовом свете, выглядели в видоискателе лучше, чем окончательное изображение, которое показало хорошо известный оранжевый цветовой оттенок.Под видоискателем находится датчик, обеспечивающий переключение камеры в видоискатель, когда вы подносите камеру к лицу. Вы также можете отключить датчик, чтобы вы могли самостоятельно выбирать между ЖК-дисплеем или видоискателем. Точность видоискателя составляет 100%, увеличение составляет 1,34, а кроп-фактор 2 составляет общее увеличение 0,67. Это больше, чем видоискатель камеры с датчиком APS-C, и равен видоискателю полнокадровой камеры Nikon D700. Видоискатель яркий, а информация в видоискателе обширна.Видоискатель может давать мерцающее изображение, когда вы находитесь в комнате с непостоянным источником света (например, люминесцентными лампами). Не совсем резкий видоискатель под некоторыми углами иногда беспокоил меня, как владельца очков. По сравнению с электронным ЖК-видоискателем Panasonic Gh3, OLED-видоискатель Panasonic Gh4 имеет более яркие цвета, более высокую контрастность и гораздо меньше подвержен влиянию шума. Электронный видоискатель можно настроить таким образом, чтобы яркость увеличивалась в темноте, что является неожиданным преимуществом при фокусировке и кадрировании по сравнению с традиционным оптическим видоискателем.Вы намного лучше видите то, на чем фокусируетесь, в темноте, чем в оптический видоискатель, а также то, резкая ли эта точка. При желании растр, уровень или гистограмму можно увидеть в любом месте по вашему выбору. Уровень не только указывает, удерживается ли камера под наклоном относительно горизонта, но также указывает, наклонена ли камера вперед или назад. Экран на задней панели камеры можно поворачивать и наклонять. Тем не менее, компания Panasonic сделала все возможное, чтобы сделать камеру водонепроницаемой от пыли и брызг.

Автофокус

В беззеркальных камерах используется определение контраста, а не определение фазы, например в зеркальных фотокамерах. Контрастная автофокусировка также обеспечивает, по сравнению с SLR, более быструю автофокусировку при просмотре в реальном времени / видео. Поскольку мотор автофокуса Panasonic Gh4 управляется сигналом датчика, а не отдельным блоком вне датчика, передний и задний фокус запрещены. Еще одно преимущество Panasonic Gh4 заключается в том, что точки фокусировки можно свободно выбирать по всему изображению в видоискателе, а не в ограниченной зоне в центре изображения, как в зеркальных камерах.Автофокус Panasonic Gh4 очень быстр: эквивалентно скорости автофокусировки профессиональных SLR при съемке неподвижного объекта. Только при слежении за быстро движущимся объектом слежение за автофокусом профессиональных SLR работает намного точнее, чем у Panasonic Gh4. При обнаружении фазы также можно определить, движется ли объект к камере или от камеры. Это невозможно при обнаружении контраста.

Резкость: разрешение Panasonic Gh4

Panasonic Gh4 производит красивые, резкие изображения, которые по резкости эквивалентны изображениям, снятым на Olympus OM-D E-M5 или Canon 5D MK3.На сайте Panasonic также есть несколько хороших образцов изображений Panasonic Gh4, с помощью которых вы можете оценить качество этой камеры. Измерения для нашего обзора Panasonic Gh4 проводились с помощью Imatest. Результаты измерений приведены в отчете об обзоре Panasonic Gh4.

Panasonic Gh4 @ 400 ISO, стандартный jpg

Динамический диапазон Panasonic Gh4

До недавнего времени динамический диапазон был ахиллесовой пятой камеры micro-43, но с момента появления Olympus OM-D E-M5, особенно при более низких настройках ISO. Panasonic Gh4 имеет такой же высокий балл по динамическому диапазону, как Olympus OM-D E-M5. По нашим измерениям, Panasonic Gh4 показал немного лучшие результаты при ISO 125, чем Olympus OM-D E-M5 при ISO 200. При ISO 6400 роли поменялись местами. Обе камеры должны признать, что с точки зрения динамического диапазона выше 400 ISO, камеры с полнокадровым сенсором лучше, но они также не уступают камере с (более крупным) сенсором APS-C. Самым удивительным, возможно, является динамический диапазон. при низких настройках ISO: метка DxO сообщает о динамическом диапазоне 12.35 ступеней при 125 ISO для Panasonic Gh4, что выше максимального динамического диапазона современной камеры с полнокадровым сенсором. Например, Canon 6D имеет максимальный динамический диапазон 12,11 ступени при 100 ISO. При ISO выше 200 Canon 6D выигрывает у Panasonic Gh4. Однако тех, кто несколько лет назад предсказывал, что камера с датчиком micro-43 будет иметь больший динамический диапазон, чем камера с датчиком micro-43, вероятно, были бы названы сумасшедшими. солнце, в результате чего тени засоряются (выделены синим), а также светлые участки (отмечены красным).Из-за большого динамического диапазона датчика вы не встретите много подобных ситуаций в повседневной практике. Поскольку чрезмерная экспозиция из-за облаков уже происходит, вы не можете выбрать более длинную выдержку, чтобы превратить силуэт цапли в детализированную цаплю, как вы можете видеть невооруженным глазом. Раньше нельзя было безнаказанно осветить тени от такого изображения в Photoshop, потому что появлялось много шума и цветных полос. Тем не менее, полезный динамический диапазон Panasonic Gh4 настолько велик, что вы можете обойтись без освещения теней в Photoshop или Lightroom

DMC-Gh4 также имеет HDR (High Dynamic Range) для обработки экстремального контраста между светом и темнотой. это, например, происходит в ситуациях с подсветкой.HDR означает, что делается несколько последовательных снимков с разной экспозицией. Затем они накладываются друг на друга. Обработка выполняется в фоновом режиме, так что вы можете просто продолжить съемку. В нашем обзоре Panasonic G5 мы представляем пример встроенного в камеру HDR Panasonic.

Некоторые камеры имеют широкий динамический диапазон, но при плохом соотношении сигнал / шум остается гораздо меньший полезный динамический диапазон. При низких настройках ISO полезный динамический диапазон настолько велик, что вам действительно не нужна функция HDR Panasonic Gh4.Общий динамический диапазон очень высок — 11 ступеней при 125 ISO. На снимке дерева между квартирами, несмотря на очень высокий контраст, нет передержанных засветок или недоэкспонированных теней. На картинке выше забавный скворечник на дереве практически не виден из-за ярко освещенного неба. Вы можете уверенно выполнять решительные действия с такого рода снимками благодаря большому используемому динамическому диапазону Panasonic Gh4 без видимого цветового шума.

Шум Panasonic Gh4

В этом разделе Panasonic Gh4 показывает хорошие результаты, как для файлов RAW, так и для файлов jpg.Что касается шума, результаты Panasonic Gh4 примерно соответствуют результатам Imatest для Olympus OMD EM5 и Nikon D3200. Наши результаты измерений для Gh4 были немного лучше, чем для OMD EM5. И все они были хороши.

Начиная с ISO 400, вы иногда можете распознать шум в некоторых частях изображения. Вы не заметите этого легко, а шум даже немного напоминает зернистость изображений, снятых в аналоговую эпоху. От ISO 800 и выше вы можете встретить небольшие артефакты jpg, как в желтых перьях этой птицы.

Если применить меньшее шумоподавление к файлу RAW, вы увидите на экране, что в желтых перьях все еще есть некоторый шум, но вы получите отпечаток формата A3 без видимого шума.

Цветопередача Panasonic Gh4

Цветопередача современных фотоаппаратов настолько хороша, что при дневном свете ничего не стоит заметить. Panasonic Gh4 предоставляет стандартные файлы jpg с естественными цветами, которые удовлетворяют требованиям самых требовательных пользователей. Цветопередача настраивается для различных стилей изображения по вкусу.При искусственном освещении Panasonic Gh4 показал оранжевый оттенок, как и 90% других камер, которые мы тестировали до сих пор. Если вы снимаете в формате RAW, впоследствии можно будет правильно настроить баланс белого. В изображениях Jpg это работает хуже.

Встроенный Wi-Fi

Panasonic Gh4 имеет встроенный передатчик / приемник Wi-Fi, с помощью которого вы можете передавать файлы по беспроводной сети на мобильный телефон или компьютер. Благодаря этому Wi-Fi-соединению вы также можете добавлять к снимкам местоположения по GPS или управлять камерой удаленно с помощью смартфона.Компания Panasonic сделала программное обеспечение Lumix Link, которое вы устанавливаете на свой смартфон, бесплатно. Я ожидаю, что через несколько лет все камеры будут оснащены встроенным Wi-Fi, но теперь Panasonic выходит на передний план.

Вышеупомянутая панорама сделана с помощью фотомачты телескопа MegaView, при этом Panasonic Gh4 находился на высоте около 6 метров. Встроенный Wi-Fi позволял управлять камерой с земли через простое меню (см. Справа). Если вы используете объектив Panasonic с приводным зумом, вы также можете увеличивать или уменьшать масштаб дистанционно. В протестированной версии программного обеспечения для телефона Android нельзя было изменить выдержку и диафрагму удаленно. Между тем, Panasonic выпустила новую версию Lumix Link, сделав это возможным.

Встроенная вспышка и вспышка GN 36

Panasonic Gh4 имеет встроенную вспышку с ведущим числом 12. Кроме того, Panasonic предлагает новую вспышку GN36, которой также можно управлять по беспроводной сети. Это дает возможность несколько раз мигать во время кадра (световая картина).Светодиодная лампа особенно подходит для видеозаписи. Вспышка GN36 имеет короткое время зарядки около 2 секунд, что повышает удобство съемки со вспышкой.

Видео

Видео возможности Panasonic Gh3 получили высокую оценку. Panasonic Gh4 был разработан с учетом потребностей профессиональных видеооператоров и предлагает больше форматов файлов, больший размер и битрейт. Panasonic Gh4 поддерживает видео в формате AVCHD с битрейтом 28 Мбит / с или видео MOV с битрейтом 72 Мбит / с и даже формат H. 264 кодек. Panasonic также предлагает теперь внешний микрофон с подключаемым питанием (Panasonic DMW-MS2) с функцией windjammer для высококачественной записи. Через меню можно установить направление стереомикрофона / ружья. Держатель микрофона оснащен механизмом, поглощающим вибрации. Звук мотора камеры и звуки управления подавляются, поэтому записывается только нужный звук. Совершенно бесшумный электронный затвор дает уникальное преимущество, когда вы делаете снимок во время видеосъемки: в SLR камерах складывание и опускание зеркала и звук затвора записываются через микрофон, когда вы делаете снимок во время записи видео.С Panasonic Gh4 вы делаете снимок, используя электронный затвор во время записи видео, ничего не слыша.

Заключение

Обзор Panasonic Gh4
Плюсы
  • Хорошее качество изображения, не только разрешение и цветопередача, но и динамический диапазон при самых низких настройках ISO
  • Прочная конструкция, защита от пыли и водяных брызг
  • Ясно и быстрый OLED-дисплей и видоискатель
  • Встроенный Wi-Fi
  • Бесшумный при использовании электронного затвора
  • Быстрый: 6 кадров в секунду при непрерывном и 20 кадров в секунду при более низком разрешении
  • Очень высокое качество видео
    Минусы
  • Контрастный автофокус меньше подходит для съемки с быстрым движением, чем автофокусировка с определением фазы
  • Видоискатель менее резкий по краям под некоторыми углами
  • Динамический диапазон и шум при высоких настройках

Размер камеры сильно зависит от вкуса: Panasonic Gh4 большой по сравнению с камерами micro-43, такими как Panasonic G5 или Olympus OM-D E-M5. Gh4 — маленький и легкий по сравнению с профессиональными зеркальными фотоаппаратами, такими как Canon 1DX и Nikon D4. Для каждого амбициозного фотографа, очарованного хорошими и компактными объективами micro-43 или отличным качеством видео, но находящего камеры micro-43 слишком маленькими, Panasonic Gh4 — лучший кандидат для перехода на micro-43.

Panasonic Gh4 — первая профессиональная камера формата Micro-43 как для видео, так и для фотографии, с полным набором аксессуаров (батарейный блок, внешняя вспышка и микрофон).Камера сконструирована как компактная SLR, и обслуживание знакомо каждому, кто знаком с SLR. И с точки зрения качества изображения, и с точки зрения удобства использования Panasonic Gh4 значительно лучше, чем Panasonic Gh3. Электронный видоискатель Gh4 больше и ярче, чем видоискатель Gh3, а корпус более прочен и защищен от пыли и водяных брызг. Качество изображения просто очень хорошее. И разрешение, и цвет оправдают ожидания критически настроенных фотографов.Динамический диапазон при самых низких настройках ISO даже не уступает некоторым камерам с полнокадровыми сенсорами. Встроенный Wi-Fi и бесплатно загружаемое приложение Lumix Link позволяют получать данные GPS со смартфона, передавать файлы по беспроводной сети или дистанционно управлять Panasonic Gh4. Чего еще можно хотеть?

Полногеномная идентификация генов Gh4 у Brassica oleracea и идентификация промоторной области для специфической для пыльника экспрессии гена Gh4 | BMC Genomics

  • 1.

    Hagen G, Kleinschmidt A, Guilfoyle T. Экспрессия гена, регулируемая ауксином, в интактном гипокотиле сои и вырезанном гипокотиле. Planta. 1984. 162: 147–53.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 2.

    Се Х.Л., Окамото Х., Ван М., Анг Л.Х., Мацуи М., Гудман Х., Дэн Х.В. FIN219 , ген, регулируемый ауксином, определяет связь между фитохромом а и нижележащим регулятором COP1 в световом контроле развития Arabidopsis .Genes Dev. 2000; 14: 1958–70.

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 3.

    Ludwig-Müller J, Jülke S, Bierfreund NM, Decker EL, Reski R. Moss ( Physcomitrella patens ) Белки Gh4 действуют в гомеостазе ауксина. Новый Фитол. 2009. 181: 323–38.

    PubMed Статья Google Scholar

  • 4.

    Okrent RA, Wildermuth MC. История эволюции ациладенилаз семейства Gh4 в розидах.Завод Мол Биол. 2011; 76: 489–505.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 5.

    Roux C., Perrot-Rechenmann C. Выделение путем дифференциального отображения и характеристики чувствительной к ауксину табака кДНК Nt-gh4, родственной Gh4.FEBS Lett. 1997; 419: 131-36.

  • 6.

    Yuan H, Zhao K, Lei H, Shen X, Liu Y, Liao X, Li T. Полногеномный анализ семейства Gh4 в яблоке ( Malus × domestica ).BMC Genomics. 2013; 14: 297.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 7.

    Zhang C, Zhang L, Wang D, Ma H, Liu B, Shi Z, Ma X, Chen Y, Chen Q. История эволюции семейства гликозид гидролазы 3 (Gh4) на основе секвенированных геномов 48 растений и идентификация белков Gh4, связанных с жасмоновой кислотой, в Solanum tuberosum . Int J Mol Sci. 2018; 19: 1850.

    PubMed Central Статья CAS PubMed Google Scholar

  • 8.

    Chen Q, Westfall CS, Hicks LM, Wang S, Jez JM. Кинетическая основа конъюгации ауксина индол-уксусной кислотой-амидосинтетазой семейства Gh4. J Biol Chem. 2010. 285: 29780–6.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 9.

    Гулик AM. Конформационная динамика ацил-КоА-синтетаз, доменов аденилирования нерибосомных пептидных синтетаз и люциферазы светлячков. ACS Chem Biol. 2009; 4: 811–27.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 10.

    Staswick PE, Tiryaki I, Rowe ML. Локус жасмонатного ответа JAR1 и несколько родственных генов Arabidopsis кодируют ферменты надсемейства люцифераз светлячков, которые проявляют активность в отношении жасмоновой, салициловой и индол-3-уксусной кислот в анализе на аденилирование. Растительная клетка. 2002; 14: 1405–15.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 11.

    Zheng Z, Guo Y, Novák O, Chen W., Ljung K, Noel JP, Chory J. Локальный метаболизм ауксина регулирует вызванное окружающей средой удлинение гипокотиля. Nat Plants. 2016; 2: 16025.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 12.

    Westfall CS, Zubieta C, Herrmann J, Kapp U, Nanao MH, Jez JM. Структурная основа пререцепторной модуляции растительных гормонов белками Gh4. Наука. 2012; 336: 1708–11.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 13.

    Staswick PE, Tiryaki I. Сигнальная жасмоновая кислота оксилипина активируется ферментом, который конъюгирует ее с изолейцином у Arabidopsis. Растительная клетка. 2004; 16: 2117–27.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 14.

    Торренс-Спенс М.П., ​​Бобокалонова А., Карбалло В., Глинкерман С.М., Плюскал Т., Шен А., Вен Дж. К.. PBS3 и EPS1 завершают биосинтез салициловой кислоты из изохоризматов Arabidopsis. Завод Мол.2019; 12: 1577–86.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 15.

    Nakazawa M, Yabe N, Ichikawa T., Yamamoto YY, Yoshizumi T., Hasunuma K, Matsui M. DFL1 , гомолог гена Gh4 , реагирующий на ауксин, отрицательно регулирует удлинение побегов клеток и образование боковых корней. , и положительно регулирует световой ответ длины гипокотиля. Плант Дж. 2001; 25: 213–21.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 16.

    Takase T, Nakazawa M, Ishikawa A, Kawashima M, Ichikawa T., Takahashi N, Shimada H, Manabe K, Matsui M. ydk1-D , ауксин-чувствительный мутант Gh4, который участвует в удлинении гипокотиля и корня. Плант Дж. 2004; 37 (4): 471–83.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 17.

    Пак Дж. Э., Пак Дж. Й., Ким Ю. С., Стасвик П. Е., Чон Дж., Юн Дж., Ким Си, Ким Дж., Ли Й. Х., Пак СМ. Gh4-опосредованный гомеостаз ауксина связывает регуляцию роста с ответом адаптации к стрессу у Arabidopsis.J Biol Chem. 2007. 282: 10036–46.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 18.

    Damodaran S, Westfall CS, Kisely BA, Jez JM, Subramanian S. Обогащенные клубеньками ферменты GRETCHEN HAGEN 3 обладают особой субстратной специфичностью и важны для правильного развития клубеньков сои. Int J Mol Sci. 2017; 18: E2547.

    PubMed Статья CAS Google Scholar

  • 19.

    Zou X, Long J, Zhao K, Peng A, Chen M, Long Q, He Y, Chen S. Избыточная экспрессия Gh4.1 и Gh4.1L снижает восприимчивость к Xanthomonas citri subsp. citri путем репрессии передачи сигналов ауксина в цитрусовых ( Citrus sinensis Osbeck ). PLoS One. 2019; 14: e0220017.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 20.

    Кирунгу Дж. Н., Магванга РО, Лу П, Цай Х, Чжоу З., Ван Х, Пэн Р., Ван К., Лю Ф.Функциональная характеристика гена Gh_A08G1120 ( Gh4.5 ) показывает их важную роль в повышении устойчивости хлопка к засухе и солевому стрессу. BMC Genet. 2019; 20:62.

    PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

  • 21.

    Gan Z, Fei L, Shan N, Fu Y, Chen J. Идентификация и анализ экспрессии Gretchen Hagen 3 (Gh4) в киви ( Actinidia chinensis ) во время послеуборочного процесса. Растения (Базель). 2019; 8: 473.

    CAS Статья Google Scholar

  • 22.

    Окрент Р.А., Брукс, Мэриленд, Вильдермут, М.С. Arabidopsis Gh4.12 (PBS3) конъюгирует аминокислоты с 4-замещенными бензоатами и ингибируется салицилатом. J Biol Chem. 2009. 284: 9742–54.

  • 23.

    Feng S, Yue R, Tao S, Yang Y, Zhang L, Xu M, Wang H, Shen C. Идентификация по всему геному, анализ экспрессии ауксин-чувствительных генов семейства Gh4 в кукурузе ( Зеа мэйс Л.) при абиотических стрессах. J Integr Plant Biol. 2015; 57: 783–95.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 24.

    Джайн М., Каур Н., Тьяги А.К., Хурана Дж. П.. Ауксин-чувствительное семейство генов Gh4 в рисе ( Oryza sativa ). Funct Integr Genomics. 2006; 6: 36–46.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 25.

    Kong W, Zhang Y, Deng X, Li S, Zhang C, Li Y.Сравнительный геномный и транскриптомный анализ позволяет предположить эволюционную динамику генов Gh4 у злаковых. Фронтальный завод им. 2019; 10: 1297.

  • 26.

    Holland CK, Westfall CS, Schaffer JE, De Santiago A, Zubieta C, Alvarez S, Jez JM. Brassicaceae -специфические амидосинтетазы 3-ациловой кислоты Gretchen Hagen конъюгируют аминокислоты с хоризматом, предшественником ароматических аминокислот и салициловой кислотой. J Biol Chem. 2019; 294: 16855–64.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 27.

    Peat TS, Böttcher C, Newman J, Lucent D, Cowieson N, Davies C. Кристаллическая структура амидосинтетазы индол-3-уксусной кислоты из виноградной лозы, участвующей в гомеостазе ауксина. Растительная клетка. 2012; 24: 4525–38.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 28.

    Шерп AM, Westfall CS, Alvarez S, Jez JM. Arabidopsis thaliana Амидосинтетаза ациловой кислоты Gh4.15 имеет высокоспецифичные субстратные предпочтения для предшественника ауксина индол-3-масляной кислоты.J Biol Chem. 2018; 293: 4277–88.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 29.

    Staswick PE, Serban B, Rowe M, Tiryaki I, Maldonado MT, Maldonado MC, Suza W. Характеристика семейства ферментов Arabidopsis, которые конъюгируют аминокислоты с индол-3-уксусной кислотой. Растительная клетка. 2005; 17: 616–27.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 30.

    Westfall CS, Sherp AM, Zubieta C, Alvarez S, Schraft E, Marcellin R, Ramirez L, Jez JM. Arabidopsis thaliana Амидосинтетаза ациловой кислоты Gh4,5 опосредует метаболические перекрестные помехи в гомеостазе ауксина и салициловой кислоты. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2016; 113 (48): 13917–22.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 31.

    Chiu LW, Heckert MJ, You Y, Albanese N, Fenwick T., Siehl DL, Castle LA, Tao Y.Члены семейства белков Gh4 конъюгируют 2,4-D и дикамбу с аспартатом и глутаматом. Physiol растительной клетки. 2018; 59: 2366–80.

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 32.

    Wang R, Li M, Wu X, Wang J. Изменения структуры и уровня экспрессии гена семейства Gh4 в Brassica napus по сравнению с его диплоидными предками. Гены (Базель). 2019; 10: 58.

    Артикул CAS Google Scholar

  • 33.

    Wei L, Yang B, Jian H, Zhang A, Liu R, Zhu Y, Ma J, Shi X, Wang R, Li J, Xu X. Полногеномная идентификация и характеристика генов семейства Gretchen Hagen3 (Gh4) в Brassica napus . Геном. 2019; 62: 597–608.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 34.

    Parkin IA, Koh C, Tang H, Robinson SJ, Kagale S, Clarke WE, et al. Профилирование транскриптома и метилома выявляет реликты доминирования генома в мезополиплоиде Brassica oleracea .Genome Biol. 2014; 15: R77.

    PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

  • 35.

    Голдберг РБ, Билс Т.П., Сандерс П.М. Другая разработка: основные принципы и практическое применение. Растительная клетка. 1993; 5: 1217–29.

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 36.

    Marciniak K, Przedniczek K. Комплексное понимание развития тычинок, опосредованного гиббереллином и жасмонатом.Гены (Базель). 2019; 10: 811.

    CAS Статья Google Scholar

  • 37.

    Борг М. , Браунфилд Л., Твелл Д. Развитие мужских гаметофитов: молекулярная перспектива. J Exp Bot. 2009; 60: 1465–78.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 38.

    Скотт Р.Дж., Спилман М., Дикинсон Х.Г. Строение и функция тычинок. Растительная клетка. 2004; 16: S46–60.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 39.

    Ямамото Ю., Нишимура М., Хара-Нишимура И., Ногучи Т. Поведение вакуолей во время развития микроспор и пыльцы у Arabidopsis thaliana . Physiol растительной клетки. 2003; 44: 1192–201.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 40.

    Уильямс Дж. Х., Тейлор М.Л., О’Мира, Британская Колумбия.Повторяющаяся эволюция трехклеточной (и двухклеточной) пыльцы. Am J Bot. 2014; 101: 559–71.

    PubMed Статья Google Scholar

  • 41.

    Acosta IF, передача сигналов Przybyl M. Jasmonate во время созревания тычинок Arabidopsis. Physiol растительной клетки. 2019; 60: 2648–59.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 42.

    Schubert R, Grunewald S, von Sivers L, Hause B.Влияние жасмоната на функцию этилена при развитии тычинок томатов. Растения (Базель). 2019; 8: E277.

    Артикул CAS Google Scholar

  • 43.

    Яо X, Тянь Л., Ян Дж., Чжао Ю.Н., Чжу YX, Дай Х, Чжао Ю., Ян З.Н. Производство ауксина в диплоидных микроспороцитах необходимо и достаточно для ранних стадий развития пыльцы. PLoS Genet. 2018; 14: e1007397.

    PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

  • 44.

    Колтунов AM, Truettner J, Cox KH, Wallroth M, Goldberg RB. Во время развития пыльников возникают разные временные и пространственные паттерны экспрессии генов. Растительная клетка. 1990; 2: 1201–24.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 45.

    млн лет H. Молекулярно-генетический анализ микроспорогенеза и микрогаметогенеза у цветковых растений. Annu Rev Plant Biol. 2005; 56: 393–434.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 46.

    Твелл Д. Мужской гаметогенез и спецификация зародышевой линии у цветковых растений. Половое растение Reprod. 2011; 24: 149–60.

    PubMed Статья Google Scholar

  • 47.

    Лю С., Лю Й., Ян Х, Тонг С., Эдвардс Д., Паркин И.А. и др. Геном Brassica oleracea показывает асимметричную эволюцию полиплоидных геномов. Nat Commun. 2014; 5: 3930.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 48.

    Panchy N, Lehti-Shiu M, Shiu SH. Эволюция дупликации генов у растений. Plant Physiol. 2016; 171: 2294–316.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 49.

    Пирс С., Фергюсон А., Кинг Дж., Уилсон З.А. FlowerNet: сеть корреляции экспрессии генов для развития пыльников и пыльцы. Plant Physiol. 2015; 167: 1717–30.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 50.

    Сандерс PM, Bui AQ, Weterings K, McIntire KN, Hsu Y, Lee PY, Truong MT, Beals TP, Goldberg RB. Дефекты развития пыльников у Arabidopsis thaliana мутантов с мужской стерильностью. Половое растение Reprod. 1999; 11: 297–322.

    CAS Статья Google Scholar

  • 51.

    Yang Y, Yue R, Sun T, Zhang L, Chen W, Zeng H, Wang H, Shen C. Идентификация по всему геному, анализ экспрессии генов семейства Gh4 в Medicago truncatula в условиях стресса гормоны и инфекция Sinorhizobium meliloti . Appl Microbiol Biotechnol. 2015; 99: 841–54.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 52.

    Yu D, Qanmber G, Lu L, Wang L, Li J, Yang Z, Liu Z, Li Y, Chen Q, Mendu V, Li F, Yang Z. Полногеномный анализ хлопка Gh4 Подсемейство II обнаруживает функциональные различия в развитии волокон, гормональной реакции и архитектуре растений. BMC Plant Biol. 2018; 18: 350.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 53.

    Basu MM, González-Carranza ZH, Azam-Ali S, Tang S, Shahid AA, Roberts JA. Манипуляции с ауксином в клетках зоны опадения цветков Arabidopsis показывают, что передача сигналов индолуксусной кислоты является предпосылкой для отторжения органа. Plant Physiol. 2013; 162: 96–106.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 54.

    Cecchetti V, Altamura MM, Falasca G, Costantino P, Cardarelli M. Ауксин регулирует расхождение пыльников Arabidopsis, созревание пыльцы и удлинение волокон.Растительная клетка. 2008; 20: 1760–74.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 55.

    Cecchetti V, Celebrin D, Napoli N, Ghelli R, Brunetti P, Costantino P, Cardarelli M. Максимум ауксина в среднем слое контролирует развитие тычинок и созревание пыльцы у Arabidopsis. Новый Фитол. 2017; 213: 1194–207.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 56.

    Ян Дж., Юань З., Мэн К., Хуанг Дж., Перин С., Бюро С, Менье А.С., Ингуфф М., Беннетт М.Дж., Лян В., Чжан Д. Динамическое регулирование реакции ауксина во время развития риса, выявленное с помощью недавно установленных маркеров гормонального биосенсора. Фронтальный завод им. 2017; 8: 256.

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 57.

    Gómez JF, Talle B, Wilson ZA. Развитие пыльников и пыльцы: консервативный путь развития. J Integr Plant Biol.2015; 57: 876–91.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 58.

    Chow C, Zheng H, Wu N, Chien C, Huang H, Lee T, Chiang-Hsieh Y, Hou P, Yang T, Chang W. PlantPAN 2.0: обновление навигатора анализа промоторов растений для реконструкции транскрипционные регуляторные сети у растений. Nucleic Acids Res. 2015; 44: D1154–60.

    PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

  • 59.

    Yu J, Zhao M, Wang X, Tong C, Huang S, Tehrim S, Liu Y, Hua W., Liu S. Bolbase: обширная база данных геномики для Brassica oleracea . BMC Genomics. 2013; 14: 664.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 60.

    Сиверс Ф., Вильм А., Динин Д., Гибсон Т.Дж., Карплюс К., Ли В., Лопес Р., МакВильям Х. , Реммерт М., Сёдинг Дж., Томпсон Д.Д., Хиггинс Д.Г. Быстрая масштабируемая генерация высококачественного выравнивания множественных последовательностей белков с использованием Clustal omega.Mol Syst Biol. 2011; 7: 539.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 61.

    Waterhouse AM, Procter JB, Martin DM, Clamp M, Barton GJ. Jalview версии 2 — редактор множественного выравнивания последовательностей и инструментальные средства анализа. Биоинформатика. 2009; 25: 1189–91.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 62.

    Кумар С., Стечер Г., Ли М., Князь С., Тамура К.MEGA X. Анализ молекулярной эволюционной генетики на вычислительных платформах. Mol Biol Evol. 2018; 35: 1547–49.

  • 63.

    Джонс Д. Т., Тейлор В. Р., Торнтон Дж. М.. Быстрое создание матриц данных о мутациях из белковых последовательностей. Биоинформатика. 1992; 8: 275–82.

    CAS Статья Google Scholar

  • 64.

    Clough SJ, Bent AF. Цветочный дип: упрощенный метод опосредованной агробактериями трансформации Arabidopsis thaliana .Плант Дж. 1998; 16: 735–43.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 65.

    Хонг Дж., Ли Дж., Чон Ч. В., Брукс Дж. С., Чой Й., Ли Дж. С.. Характеристики и регулирующая роль в термотолерантности фактора транскрипции теплового шока ZmHsf12 из Zea mays L.J. Plant Biol. 209; 62: 329-41.

  • 66.

    Dong X, Nou IS, Yi H, Hur Y. Подавление ASKβ (AtSK32) , клады III Arabidopsis GSK3 , приводит к дефекту пыльцы во время позднего развития пыльцы.Mol Cells. 2015; 38: 506–17.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • ливневых вод / gh4 * | ArchDaily

    Stormwater Facility / gh4 *

    © Адриан Озимек

    + 16

    Поделиться Поделиться
    • Facebook

    • Twitter

    • Pinterest

    • Pinterest

    • 9

      или

      https: // www. archdaily.com/972835/stormwater-facility-gh4 © Адриан Озимек

      Текстовое описание предоставлено архитекторами. Система ливневых вод (SWF) обрабатывает городские стоки из новых застроек West Don Lands и Quayside. Функционально SWF стоит на стыке технологического и архитектурного прогресса. Имея современные системы очистки, он выражает гражданскую ответственность за обеспечение безопасной и чистой воды с экологической точки зрения. В архитектурном плане он дополняет список исторических инфраструктурных сооружений Торонто, таких как улица Р.Очистные сооружения К. Харриса, виадук Блур и электростанция Хирн, архитектурный характер которых помог как выразить, так и определить идентичность Торонто в данный момент времени.

      © Адриан Озимек

      Клиенты, Waterfront Toronto и Toronto Water, хотели построить знаковое здание, которое поможет обозначить новый и самобытный городской район. Достижение этого потребовало концептуальной ясности и строгости дизайна, чтобы соответствовать сильному характеру окружающей местности; железнодорожные станции на севере, пандусы и проезжие части бульвара Лейк-Шор и скоростной автомагистрали Гардинер на юге, а также промышленные портовые земли через пролив Китинг. Монолитная монолитная бетонная форма является одновременно дополнением и ярким противовесом инфраструктурным и эстетическим сложностям вокруг. Даже на скорости от автомагистралей Гардинер и Лейк-Шор, здание воспринимается как поэтический эллипс на фоне яркого окружения.

      План участка План крыши

      Стратегически расположенный проем в фасаде открывает вид на внутренние работы здания, а небесное окно на южной стороне крыши служит люминесцентным маяком для ночного города.Эти открытия намеренно вызывают любопытство по поводу расширяющегося города и его вспомогательной инфраструктуры, в частности, работы, проводимой для поддержания чистоты и безопасности городской воды, и являются важным катализатором повышения гражданской активности и гордости.

      © Адриан Озимек

      Проект сочетает в себе три основных элемента в единое городское, ландшафтное и архитектурное решение. Первый — это резервуар для ливневой воды, шахта диаметром 20 метров, покрытая радиальной стальной решеткой, которая действует как перевернутый сифон для приема неочищенной ливневой воды из окружающей застройки. Непосредственно над ним находится рабочий горизонтальный слой из асфальта и бетона с каналами и желобами, которые соединяют шахту резервуара с очистными сооружениями. Наконец, самым заметным элементом сооружения является само водоочистное сооружение площадью 600 квадратных метров. Дизайн SWF включает эти составные части и объединяет их в единое целое, что делает инфраструктурную функцию понятной, дидактической и эстетически привлекательной.

      © Адриан Озимек

      Программно SWF рассказывает историю воды.Дизайн основного корпуса отсылает к архитектуре каменного колодца, перевернутого в виде скульптурной формы над землей. Эта современная интерпретация древнего народного языка дополнительно выражена гравировкой на бетонной поверхности, преобразованной в систему дождевых каналов, идущих от крыши к стене, к плоскости земли и в шахту — повествование о более крупной системе городской гидрологии, в которой здание встроено.

      Diagram

      Фундаментальная цель SWF — внести свой вклад в более устойчивую модель городского строительства. Очищая городские ливневые стоки, установка говорит о будущем, в котором плотная городская застройка и здоровые природные экосистемы интегрированы и взаимовыгодны. В сущности, как здание, так и ландшафт построены из открытого бетона, что приводит к абстрагированию земли и стен, снижению воздействия солнечного тепла на окружающую среду и продлению срока службы объекта. Низкие энергозатраты достигаются за счет хорошо изолированной оболочки, дневного света, пассивного охлаждения и вентиляции.В результате получилось здание, характеристики которого будут соответствовать его вкладу в более широкий проект устойчивого развития земель Западного Дона.

      © Адриан Озимек © Адриан Озимек

      SWF — это часть формирующегося нового лица Торонто, в котором сочетаются ведущие экологические показатели, отмеченное наградами городское развитие и дизайн мирового уровня.

      © Адриан Озимек

      Gh4 + Потолочный подъемник для профессионального подъема и перемещения

      Профессиональный потолочный подъемник — для эффективного подъема и перемещения

      Gh4 + — это более быстрая, прочная и мощная версия стандартного подъемного двигателя Gh4. Он разработан для использования практически во всех учреждениях профессионального ухода, и с грузоподъемностью до 400 кг / 880 фунтов на одном ремне он идеально подходит для использования при лечении ожогов. Потолочный подъемник Gh4 + может быть оснащен одним или несколькими модулями из системы Guldmann Care Lift Management (CLM), которая упрощает повседневное использование потолочной подъемной системы и помогает сделать ее более эффективной. Эти модули CLM можно использовать для мониторинга и улучшения процедур безопасного обращения с пациентами, а также для оптимизации планирования ресурсов.

      В системе Gh4 + Care Lift Management можно выбрать следующие модули:

      • CLM (версия с кабельным подключением): для сбора и регистрации данных, касающихся количества и времени активаций. Часть этой информации можно просмотреть непосредственно на панели дисплея на ручном блоке управления, а более подробные данные можно загрузить в компьютер.
      • Система
      • CLM — онлайн (WiFi + CLM Viewer): для сбора данных при использовании потолочных подъемников, установленных на месте, с автоматической передачей данных через Wi-Fi. Обработка и отображение данных в CLM Viewer с ежедневным обновлением всех данных. Некоторая информация также отображается на панели дисплея ручного блока управления.
      • Модуль весов: Встроенный модуль весов, вес которого отображается на ручном блоке управления. Использование модуля весов в сочетании с CLM Online позволяет регистрировать и сохранять измеренный вес.
      • Сервисный модуль: Показывает, когда и где должна быть проведена следующая сервисная проверка данного подъемного модуля. Когда сервисный модуль используется в сочетании с CLM Online, CLM Viewer отображает период, оставшийся до следующей сервисной проверки, и указывает, превысили ли уже какие-либо модули крайний срок.

      Подъемный двигатель Gh4 + доступен в моделях с грузоподъемностью 440, 550, 600, 660, 770, 825, 880 фунтов (200, 250, 275, 300, 350, 375 и 400 кг) соответственно. Gh4 + может иметь встроенный двигатель для горизонтального перемещения по поперечине, при этом подъемный модуль управляется либо с помощью ручного управления, либо с помощью инфракрасного (ИК) пульта дистанционного управления. Все эти возможности делают подъемник Gh4 + наиболее экономичным потолочным подъемником, доступным для профессионального ухода.

      Gh4 Комплект уплотнений Для сред, где требуются очень высокие стандарты гигиены
      В средах, в которых требуются высокие стандарты гигиены вокруг потолочного подъемника, например в операционной для Gh4 предлагается уплотнительный комплект, который защищает от внешних загрязнений и частиц.

      Комплект уплотнений Gh4 состоит из трех силиконовых заглушек для герметизации отверстий в верхней части потолочного подъемника, где крепится тележка, а также двух больших уплотнительных колец для уплотнения канавки вместе с боковой крышкой подъемника Gh4.

      Дизайн, удостоенный награды Reddot
      Приз был присужден на основании следующих замечаний судейской коллегии:

      «С помощью Gh4 разработчикам удалось создать потолочную подъемную систему, которая гармонично вписалась бы в окружающую архитектуру и не выглядела бы как техническое устройство. Таким образом, Gh4 характеризуется простым, элегантным дизайном, который демонстрирует высокую ценность и надежность. Разработанный для универсального применения и различных рабочих процессов, он может использоваться во всех ситуациях подъема и перемещения и включает такие функции, как автоматическая подзарядка аккумуляторов, низкое сопротивление качению и интуитивно понятное ручное управление.»

      Panasonic Lumix Gh4 | New Zealand Geographic

      Инструменты

      Панасоник Lumix Gh4

      Компактная высокопроизводительная камера

      Panasonic Lumix Gh4 — это флагманский беззеркальный фотоаппарат Panasonic с разрешением микро-четыре трети. Gh4 собирает сильную группу поклонников, которых привлекает компактная, легкая, но защищенная от погодных условий камера, которая вдвое меньше и весит обычную зеркалку, но при этом может снимать серьезные фото и видео.Он подходит для искателей приключений и путешествующих фотографов, для которых вес и размер важны, но которые не хотят идти на компромисс в отношении качества.

      Хэмиш Хупер, фотограф на борту Emirates Team New Zealand, использует Gh4 в сложных морских условиях для создания ежедневных загрузок видео в Интернет, которые позволяют фанатам оставаться в курсе того, что происходит в лагере.

      Видео

      Gh4 оснащен недавно разработанным 16,05-мегапиксельным датчиком Live MOS с широким динамическим диапазоном и высокой чувствительностью записи изображений для получения высококачественных фотографий.Тем не менее, Gh4 действительно имеет свои преимущества с точки зрения возможностей видео, с возможностью снимать в нескольких форматах с различной частотой кадров для удовлетворения самых разнообразных требований.

      Разнообразные соединительные клеммы обеспечивают гибкие возможности съемки, в том числе разъем для микрофона 3,5 мм, который позволяет добавить внешний микрофон, установленный на горячий башмак, для добавления высококачественного звука (включая новый стереомикрофон Panasonic DMW-MS2). Разъем для наушников позволяет пользователю контролировать звук во время записи, что необходимо любому профессионалу в области обработки изображений.

      Экран позволяет использовать сенсорную автофокусировку во время записи видео, так что просто наведя указатель на объект, можно элегантно подтянуть или сдвинуть фокус.

      Встроенный тайм-код упрощает синхронизацию нескольких видеоматериалов или звука при пост-продакшене.

      Приложение Lumix link для смартфонов Android и iOS предоставляет гибкие возможности съемки, позволяя пользователю передавать изображения (даже файлы RAW) на смартфон или планшет напрямую, загружать в облако через беспроводную привязку и использовать мобильное устройство в качестве пульта дистанционного управления или удаленный монитор.

      Сменные линзы

      Для Gh4 существует полная линейка сменных объективов с защитой от брызг и пыли, включая Lumix GX Vario 12-35 мм (эквивалент 35 мм: 24-70 мм) и Lumix GX Vario 35-100 мм (эквивалент 35 мм: 70-200 мм). ) с максимальной диафрагмой f / 2,8 во всем диапазоне зумирования.

      Прочная сборка

      Корпус из магниевого сплава защищен от атмосферных воздействий и брызг и пыли. Несмотря на то, что внешний вид камеры напоминает (компактную) зеркальную, эргономика камеры в сочетании с ее легким весом (855 г при установке с объективом 12-35 мм) позволяет легко держать ее одной рукой без напряжения.

      Вуди Аллен сказал, что 80 процентов успеха — это явка.Многие фотографы осознают, что было слишком много усилий, чтобы тащить за собой тяжелую зеркальную камеру — Lumix Gh4 предлагает решение этой проблемы, уменьшив размер и вес благодаря своей беззеркальной системе на четыре трети.

      См. Дополнительную информацию на сайте: www.panasonic.co.nz

      Тиогликолигаза, полученная из грибковой β-ксилозидазы Gh4, является мультигликолигазой с широкой акцепторной толерантностью.

      Информация об активном сайте семейства Gh4

      Семейство Gh4 содержит, среди прочего, некоторые гликозидазы, которые активны при заметно низких значениях pH.Трехмерные структуры ферментов Gh4 указывали на присутствие дополнительного кислотного остатка в активном центре (рис. 1б). Этот остаток сохраняется по крайней мере у 200 членов семейства, и исследования направленного мутагенеза выявили измеримый эффект на активность фермента 30,31 , что привело к предположению, что он может участвовать в каталитическом механизме 31 . Мы предположили, что тиогликолигаза с этими свойствами может функционировать в кислой среде вместо обычного нейтрального / основного pH.В этих условиях многие потенциальные акцепторы, такие как карбоновые кислоты и фосфорилированные производные, будут нейтральными и, следовательно, способны проникать в активный сайт фермента, что позволяет избежать любого потенциального электростатического отталкивания, которое может ограничить диапазон возможных акцепторов. Оказавшись там, акцептор может переносить протон на вторичный кислотный остаток, становясь усиленным нуклеофилом, способным атаковать промежуточный гликозил-фермент.

      Превращение rBxTW1 в тиогликолигазу

      Фермент, выбранный в качестве модели в настоящем исследовании, представлял собой rBxTW1, β-ксилозидазу из аскомицета T. amestolkiae выражается в Pichia pastoris 32 . Это разделение было основано на профиле pH фермента и его высокой акцепторной неразборчивости в реакциях транксилозилирования. С одной стороны, оптимальный pH rBxTW1 был определен как pH 3, при этом фермент оставался активным и стабильным при pH от 2,2 до 6,0. В связи с этим были идентифицированы три основных остатка, близких к каталитической кислоте / основанию и каталитическому нуклеофилу rBxTW1 (рис. 1c). Эти основные аминокислоты могут снижать p K a каталитических остатков за счет стабилизации их анионных состояний за счет образования солевых мостиков 33 .Такие взаимодействия могут объяснить низкий оптимальный pH rBxTW1. С другой стороны, диапазон акцепторов, протестированных с rBxTW1 дикого типа, включал широкий спектр соединений, от простых алканолов до объемных гидроксинафталинов 32,34 . Перенесенный моносахарид, ксилоза, также имел отношение к выбору rBxTW1. Ксилоза представляет собой пентозу, наиболее распространенную в природе, и центральный сахар в царстве растений. Существует много производных ксилозилфенола, участвующих в метаболизме растений, но их роль плохо изучена, поскольку как их химический синтез, так и их очистка из тканей растений являются трудными и низкоурожайными. 35,36 .Таким образом, ферментативно полученные β-ксилозиды могут облегчить исследования метаболитов растений и, с более широкой точки зрения, дополнить доступную коллекцию биокаталитически синтезированных гликонъюгатов, подавляющее большинство которых генерируется присоединением гексоз 37,38 . Кроме того, ксилоза также обладает техническим преимуществом, так как из-за отсутствия разветвлений в пентопиранозах p NPX по своей природе более реакционноспособен, чем его аналоги, производные от гексозы, что позволяет избежать использования производных динитрофенилсахара, которые являются гораздо более нестабильными и трудными для обработки. ручка 39 .

      Первичный кислотно-основной каталитический остаток этой β-ксилозидазы (E495) был заменен на Ala, Gly и Gln для получения мутантов тиогликолигазы. Была проведена типичная характеристика биокатализаторов. На основании кинетики (дополнительная таблица 2) и влияния малых анионов на активность (дополнительный рисунок 1) мутант rBxTW1-E495A был выбран как наиболее многообещающий биокатализатор. Как отмечалось в дополнительном обсуждении, наблюдались большие различия в кинетических характеристиках в зависимости от выбранных буферов при одном и том же pH.Эти открытия были первым признаком того, что буферный агент сам может участвовать в реакции, феномен, тесно связанный с предполагаемым способом действия мутанта, который будет дополнительно обсужден ниже. Кроме того, способность этого мутанта синтезировать тиогликозиды как обычную тиогликолигазу была подтверждена с использованием тиофенола (дополнительный рис. 2). После установления функциональности тиогликолигазы работа была структурирована так, чтобы сначала определить ее акцепторную толерантность, затем объяснить результаты в свете предложенной гипотезы для тиогликолигаз Gh4 и, наконец, выполнить количественную оценку выходов гликозилирования.

      Диапазон акцепторов rBxTW1-E495A

      Следуя этой схеме, очищенный белок анализировали против библиотеки потенциальных акцепторов, выбранных на основе широкого диапазона значений p K a , включающих различные функциональные группы, и легко доступны в лаборатории. В таблицах 1 и 2 представлены результаты оценки образования гликозидов с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) и масс-спектрометрии (ESI-MS), а также максимальный выход конверсии для тех акцепторов, которые позже были изучены количественно.Некоторые репрезентативные примеры всего разнообразия проанализированных функциональных групп были отобраны для очистки и идентификации с помощью ЯМР и подтверждены по их молекулярным массам (рис. 2, дополнительные рисунки 3–7 и дополнительные методы).

      Таблица 1 Скрининг акцепторов rBxTW1-E495A: целевые функциональные группы карбоновых кислот и спиртов. Таблица 2 Скрининг акцепторов rBxTW1-E495A: N-, P-, S- и Se-содержащие целевые функциональные группы. Рис. 2: Акцепторы и производные от них гликозиды, идентифицированные с помощью ЯМР.

      Жирным шрифтом выделены акцепторы (таблицы 1 и 2) и соответствующие им гликозиды.

      Общий анализ таблицы показывает высокую степень неразборчивости мутантного фермента. В список полученных соединений входят O-, N-, S- и Se-гликозиды, а также сложные эфиры сахаров и фосфоэфиры. O-гликозиды содержат не только гликозидные связи C – O-C, но также и гликозидные связи C-O-N.

      Это разнообразие выходит далеко за рамки диапазона ферментов дикого типа. Это может быть связано с тем фактом, что мутация каталитического кислотно-основного остатка расширяет субсайт +1, что может ослабить ограничения для аккомодации акцептора 24 .Кроме того, модель rBxTW1 также указывает на то, что субсайт +1 значительно неглубокий, ограниченный несколькими остатками: Q14, S15, Q16, P17, L24 и R98 (дополнительный рисунок 8), что может облегчить подход акцептор активного сайта. Согласно нашей гипотезе, потенциальная легкость входа акцептора, вызванная мутацией, сочетается с эффектом третьего кислотного остатка, который может имитировать функцию отсутствующей каталитической кислоты / основания, позволяя разрушать промежуточный гликозил-фермент, не требуя акцептор с сильной нуклеофильностью.

      Роль p

      K a в пригодности акцептора

      Удивительно, но широкий анализ результатов из таблиц 1 и 2 показывает, что влияние p K a акцептора гораздо более решающее, чем его особая природа или структура. Фермент, по-видимому, способен катализировать гликозилирование любой функциональной группы со значением p K от 2 до 9. Как видно из таблицы, диапазон относится к функциональным группам, нейтральным в их протонированном состоянии.Принимая во внимание предложенную гипотезу, константы ионизации выше p K a 10 могут предотвратить депротонирование акцептора в активном центре в диапазоне pH от 2,2 до 5,5, в котором rBxTW1 является стабильным и высокоактивным 32 . Для этих акцепторов потребуется по крайней мере pH реакции ~ 7-8, чтобы позволить их депротонирование, но rBxTW1 нестабилен при этих значениях pH, а остаточная активность очень мала даже при коротком времени реакции 32 . Следовательно, как из-за нестабильности фермента, так и из-за вероятного каталитического нарушения первой стадии механизма двойного замещения промежуточный гликозил-фермент не будет образовываться при таких значениях pH.Потенциальные акцепторы со значениями p K a ниже 1 не вызывают гликозилирования либо потому, что их анионная природа вызывает электростатическое отталкивание в активном центре 40 , либо потому, что они по своей природе бедны нуклеофилами, либо потому, что любой образующийся продукт, вероятно, гидролизуется самопроизвольно в используемых условиях реакции. Для акцепторов со значениями p K a в диапазоне 9–10 или 1–2 с помощью ТСХ было обнаружено мало или совсем не было видимых пятен, хотя ожидаемые ксилозиды были обнаружены с помощью ESI-MS, что позволяет предположить, что они синтезируются в небольших количествах. суммы.Тщательный анализ этих данных выявил несколько исключений: муравьиная кислота, бензолселениновая кислота, N -гидроксисукцинимид, 2- ( N -морфолино) этансульфоновая кислота (MES) и l-глицин отображают значения p K a . внутри диапазона, подходящего для мутанта, но гликозилированные продукты не были обнаружены с помощью анализов ТСХ или ESI-MS. В случае l-глицина и MES необходимо учитывать их цвиттерионную природу. Для этих соединений, а не нестабильности продукта, близость формального заряда к потенциальной принимающей группе в условиях анализа может просто препятствовать их связыванию с активным сайтом в продуктивной позе, чтобы действовать как акцепторы.Последнее обоснование коррелирует с тем фактом, что увеличение концентрации MES не способно повысить активность мутантного фермента (дополнительный рис. 9). Аналогичным образом, l-глутаминовая кислота дала единственный ксилозид, тогда как N -ацетил-1-глутаминовая кислота без ионизируемой аминогруппы давала два ксилозида, соединение 2 (рис. 2) и еще один продукт, слишком нестабильный, чтобы его можно было охарактеризовать с помощью ЯМР. , но, скорее всего, соответствует сложному эфиру сахара по α-карбоксильной группе. Эти результаты были использованы при использовании глицин-HCl и MES для буферизации образцов и для контроля pH реакции без нарушения активности мутантного фермента.

      И наоборот, отсутствие новых ксилозидов в муравьиной кислоте, бензолселениновой кислоте и N -гидроксисукцинимиде, соединениях также в диапазоне p K a от 2 до 9, можно объяснить просто нестабильностью продукта. Таким образом, гликозид может образовываться, но, вероятно, быстро разлагается, что предотвратит его накопление и обнаружение. 17 . Чтобы проверить эту гипотезу, была проведена серия анализов реакции на активность лигазы как для мутанта, так и для фермента дикого типа с использованием возрастающих концентраций 12 выбранных акцепторов (рис.3). Этот анализ основан на том факте, что разрушение промежуточного гликозил-фермента является лимитирующей стадией для rBxTW1-E495A с использованием p NPX в качестве донора 14 . Акцептор, способный ускорить это разрушение, регенерирует способность фермента катализировать расщепление новой молекулы p NPX, вызывая повышение активности, которое можно измерить по высвобождению p NP в стационарных условиях ( Дополнительный рис.10). Анализы включали rBxTW1 дикого типа в качестве контроля для обнаружения любого другого эффекта потенциальных акцепторов на ферментативную активность, поскольку при наличии функционального кислотно-основного остатка не ожидается значительного ускорения катализа.Соединения вне диапазона p K и от 2 до 9 не должны влиять на удельную активность мутантного биокатализатора, тогда как ожидалось, что акцепторы с соответствующими константами ионизации увеличат его активность, независимо от того, обнаружен соответствующий продукт или нет. Действительно, профили активности, показанные на рис. 3, полностью соответствуют этим ожиданиям. Повышения активности не наблюдалось для этансульфоновой кислоты (p K a = -1,68), оксима ацетофенона (p K a = 11.48) и d-глюкозы (p K a = 12,46), а небольшое повышение активности было отмечено для фенилфосфоновой кислоты (p K a = 1,42) и 1 H -1,2,3 -триазол (p K a = 9,26). Однако зависимость активности от концентрации наблюдалась для бензолсульфиновой кислоты (p K a = 2,76), азотной кислоты (p K a = 4,72), ванилина (p K a = 7,40 ), 1 H -1,2,3-триазоло [4,5-b] пиридин (p K a = 8.70), муравьиная кислота (p K a = 3,75), бензолселениновая кислота (p K a = 4,70) и N -гидроксисукцинимид (p K a = 6,09), даже хотя ксилозиды трех последних соединений не были обнаружены. Эти результаты показывают, что три потенциальных акцептора ведут себя так, как ожидалось для соединений в диапазоне p K и от 2 до 9, и что наиболее вероятной причиной отсутствия соответствующих ксилозильных производных действительно является их нестабильность.Единственным лигандом, который увеличивал активность фермента дикого типа, была глюкоза, предположительно посредством стандартных реакций транксилозилирования 34 .

      Фиг. 3. Анализы реакции на активность лигазы.

      Удельную ферментативную активность оценивали в присутствии возрастающих концентраций некоторых потенциальных акцепторов. Выбранными соединениями были этансульфоновая кислота ( a ), фенилфосфоновая кислота ( b ), бензолсульфиновая кислота ( c ), муравьиная кислота ( d ), бензолселениновая кислота ( e ), гидразойная кислота ( f ). , N-гидроксисукцинимид ( г ), ванилин ( ч ), 1 H -1,2,3-триазоло [4,5-b] пиридин ( i ), 1 H -1, 2,3-триазол ( j ), оксим ацетофенона ( k ) и d-глюкоза (-1 ).p K a каждого соединения и значения pH забуференной реакции указаны. Активности рассчитывали спектрофотометрически по отношению к p NPX и выражали как мкмоль высвобожденных p NP в минуту и ​​мг фермента. Значения для фермента дикого типа (WT) относятся к y -axis-1, тогда как y -axis-2 соответствуют rBxTW1-E495A. Профили активности представлены пунктирной линией и черными кружками для фермента дикого типа и сплошной линией и белыми кружками для rBxTW1-E495A.Средние значения показаны вместе с соответствующей стандартной ошибкой ( n = 2 независимых эксперимента). Исходные данные представлены в виде файла исходных данных.

      Связь между акцептором p

      K a , pH реакции и гликозилированием

      После определения акцепторной области этого биокатализатора были найдены оптимальные условия реакции для гликозилирования, чтобы лучше понять механизм действия мутанта. . Анализ проводился путем варьирования исходных концентраций субстрата, значений pH и времени реакции, как показано на рис.4. Интересно, что влияние pH в значительной степени соответствовало нашей гипотезе: значения выше p K a акцепторного субстрата были субоптимальными, даже если фермент находился в пределах своего диапазона активности 32 и конъюгированные основания являются более сильными нуклеофилами, чем их родительские нейтральные кислоты. Таким образом, самый высокий выход конверсии для бензолсульфиновой кислоты и 5- (5-бром-2-тиенил) -1 H -тетразола был достигнут при значении pH ниже акцептора p K a , несмотря на то, что тетразол был только частично растворим при pH 3 и полностью растворим при pH 5.5. Аналогичные результаты были получены с 5-трифторметил-2 H -тетразолом, соединением, полностью растворимым во всех исследуемых условиях, для которых реакция активности лигазы была более быстрой и при более низких концентрациях акцептора при pH 2,2 и 3,0, чем при pH 5,5. Результат был совершенно другим для акцепторов с более высокими значениями p K a , ванилина и 1 H -1,2,3-триазоло [4,5- b ] пиридина, для которых были более низкие значения pH. не благоприятный. Это может показаться парадоксальным и будет обсуждаться ниже, поскольку чем ниже значение pH, тем больше анализируемые акцепторы смещены в их нейтральные формы.

      Рис. 4. Связь между p K a и pH с активностью rBxTW1-E495A.

      a Выход преобразования акцептора (%) в ксилозильное производное в присутствии избытка донора. Начальное соотношение донор / акцептор составляло 2/1 (моль / моль), и конверсию акцептора определяли с помощью ВЭЖХ в различные интервалы времени в течение 4 часов. b Анализ ответа на активность лигазы для каждого акцептора. Эффект каждого акцептора на активность rBxTW1-E495A анализировали в диапазоне концентраций акцептора.Активность β-ксилозидазы определяли спектрофотометрически с использованием p NPX в качестве субстрата. Определенные профили представлены пунктирной линией и черными кружками для pH 2,2, сплошной линией и белыми кружками для pH 3,0 и сплошной линией и черными кружками для pH 5,5. Средние значения показаны вместе с соответствующей стандартной ошибкой ( n = 3 независимых эксперимента). Исходные данные представлены в виде файла исходных данных.

      Следует учитывать, что зависимость ферментативных реакций от pH, когда и фермент, и лиганд могут быть ионизированы, как известно, трудно проанализировать.Однако результаты последовательно подтверждают обоснование того, что предпочтение отдается нейтральной форме акцептора для проникновения в активный сайт. Более того, данные, полученные для ванилина и 1 H -1,2,3-триазоло [4,5- b ] пиридина, показали, что, помимо поддержки нейтральной формы акцептора, значение pH должно быть совместимо с депротонирование выбранного соединения в активном центре. Такое депротонирование, вероятно, неблагоприятно для ванилина и 1 H -1,2,3-триазоло [4,5- b ] пиридина при pH 2.2–3 из-за большой разницы между его константой диссоциации и pH реакции, что объясняет, почему более высокие характеристики достигаются при pH 5,5, значении, которое по-прежнему сохраняет равновесие, смещенное к нейтральной форме. Таким образом, связь между p K a и pH оказалась ключевым фактором активности rBxTW1-E495A. Таким образом, значение pH успешной реакции гликозилирования должно удовлетворять следующим требованиям: (i) находиться в диапазоне активности и стабильности фермента; (ii) поддерживать акцептор в равновесии, смещенном до его нейтральной формы; (iii) разрешить депротонирование акцептора во время нуклеофильной атаки.

      Выходы гликозилирования и потенциальные области применения

      Последний вопрос, который необходимо было решить, заключался в том, можно ли использовать синтетические возможности rBxTW1-E495A в качестве действительно полезного биохимического инструмента. Чтобы раскрыть биотехнологический потенциал фермента, по крайней мере, один репрезентативный акцептор от каждой функциональной группы был выбран среди тех, что включены в таблицы 1 и 2, определяя выход транскилозилирования как функцию времени реакции (фиг. 5). Анализы сравнивали условия реакции в подходящем буфере с отсутствием контроля pH путем простого регулирования начального pH до значения ниже p K a акцептора, чтобы оценить выход гликозилирования в небуферной среде. .

      Рис. 5: Производство различных ксилозидов с контролем pH и без него.

      Графики представляют конверсию акцептора (%) с течением времени, определенную с помощью ВЭЖХ, с использованием баланса донор / акцептор 2/1 (моль / моль) для каждого акцептора, за исключением фосфорной кислоты. Последний анализировали с помощью ЯМР и рассчитывали выход в терминах конверсии доноров (%) с использованием баланса донор / акцептор 1/2 (моль / моль). Профили выхода представлены пунктирной линией и черными кружками для неконтролируемого pH и сплошной линией и белыми кружками для контролируемого pH.Средние значения показаны вместе с соответствующей стандартной ошибкой ( n = 3 независимых эксперимента) для каждого акцептора, кроме фосфорной кислоты. Образование ксилозилфосфоэфира анализировали в однократной повторности путем непрерывного измерения соответствующего образца с течением времени. Однако из-за тестирования нескольких временных точек и двух разных условий результаты по-прежнему важны для проверки образования и последующего потребления продукта. Исходные данные представлены в виде файла исходных данных.

      Результаты выявили неоспоримый биотехнологический потенциал, при этом большинство значений продукции находится в диапазоне от умеренных до высоких, включая три примера достижения полной конверсии. С синтетической точки зрения, способность мутанта избирательно присоединять фрагмент ксилозы к флавоноиду, такому как EGCG, вероятно, является наиболее интересной характеристикой. Флавоноиды — это полифенолы, действующие как вторичные метаболиты в метаболизме растений 41 и связанные с множеством преимуществ для здоровья человека 42 .Несмотря на то, что влияние присоединения ксилозного фрагмента (или любого другого углевода) на биоактивность агликона трудно предсказать, стоит упомянуть, что ферментативное гликозилирование EGCG было достигнуто с высокой селективностью (соединение 13), и его производное Сообщалось, что гликоконъюгаты обладают интересными биологическими активностями 43 . Другими проверенными акцепторами rBxTW1-E495A, силибинина и кверцетина также являются флавоноиды с известными производными биоактивных гликозидов 9,44 .Что еще более интересно, существует множество других полифенолов с признанной биологической активностью, удовлетворяющих требованиям фермента p K a , поэтому ожидается, что они будут гликозилированы rBxTW1-E495A 45,46,47,48,49 .

      В дополнение к ксилозидам флавоноидов, потенциальные результаты оставшихся ксилоконъюгатов можно суммировать на основе аналогичных гликозидов, описанных в других исследованиях. Таким образом, ферментативно синтезированные сложные эфиры сахаров и жирных кислот считаются зеленой альтернативой поверхностно-активным веществам, полученным из нефти.Сообщается, что, помимо других свойств, они являются биоразлагаемыми, нетоксичными и антимикробными соединениями 4 . Было описано несколько примеров этих гликоконъюгатов, в том числе некоторые, полученные из карбоновых кислот с короткой или средней длиной цепи 4,50,51 , аналогичные тем, которые были успешно протестированы в качестве акцепторов для rBxTW1-E495A (Таблица 1), и даже ксилозил сложный эфир гексаноата 52 эквивалент соединения 6, полученного в настоящей работе.

      Мало что известно о применении гликозильных производных триазолов и тетразолов, хотя почти бесчисленное количество различных гликоконъюгатов может образовываться ферментативно из-за огромного разнообразия этих агликонов.Интересно, что было опубликовано несколько исследований по синтезу ряда этих производных, в которых часто анализировались различные представляющие интерес биоактивности 53,54,55,56,57 . Среди этих активностей особенно интересен антимикробный эффект при использовании триазольных производных арабинозы 57 , поскольку этот углевод представляет собой пентозу, подобную ксилозе.

      Тиогликозиды, селеногликозиды и гликозилсульфоны действуют как ингибиторы гликозидазы, и это свойство придает им различную биологическую активность, имеющую фармакологическое значение. 58,59,60,61 .Это также применимо к гликозидам, полученным из ароматических акцепторов 62,63 , таким как соединения 29 и 31, синтезированные в этой работе. Следует отметить, что существует описанный пример сульфонгликозида, углеводный фрагмент которого снова представляет собой арабинозу 59 .

      Возможные применения O-ксилозилфосфатов или O-ксилозилфосфонатов менее ясны. Несмотря на то, что сахар-1-фосфаты являются продуктами с превосходным биотехнологическим потенциалом, большинство изучаемых соединений являются α-сахарами, а когда дело доходит до β-аномеров, доступная информация о биологических функциях в основном ограничивается β-глюкозо-1-фосфатом 64 .Однако недавно сообщалось, что две сохраняющие β-гликозидазы дикого типа действуют как истинные гликозидфосфорилазы. Оба фермента успешно катализируют синтез не только β-глюкозо-1-фосфата, но также β-N-ацетилглюкозамин-1-фосфата 65 или β-N-ацетилглюкозаминид-1-фосфата 66 , что позволяет предположить, что другие 1-фосфорилированные β- сахара также могут иметь биологическую функцию, которую еще предстоит определить 65,66 .

      Анализ выходов гликозилирования показал, что самые высокие конверсии были достигнуты для тех акцепторов, чьи соответствующие ксилозиды не были подвержены гидролизу мутантом (связи C – N, C – O – N и C – S).Более того, результаты подтвердили ожидаемые различия между буферизацией реакции или нет. Как и предполагалось, из-за огромного влияния pH на механизм гликозилирования выходы, как правило, были выше для буферных реакций, чем для их небуферизованных аналогов. В последнем случае ожидалось, что непрерывное высвобождение p NP с более высоким p K a вызовет прогрессирующую алканизацию, которая превращает акцептор в его анион, препятствуя гликозилированию. Это подтверждается тем фактом, что безенсульфиновая кислота, соединение как с низким значением p K a , так и с низкой способностью к самобуферизации, показала незначительный выход гликозилирования в отсутствие буфера.Однако, что интересно, небуферные реакции с транс, -коричной и фосфорной кислотами дали самый высокий выход ксилозилирования. Ожидается, что оба акцептора будут образовывать гликоконъюгаты с хорошими уходящими группами, и, как следствие, баланс гликозилирования / гидролиза затрудняет оценку наиболее подходящего pH.

      Анализ выхода гликозилирования был расширен до p -кумаровой кислоты и феруловой кислоты. Эти многочисленные гидроксикоричные кислоты имеют карбоксильную и гидроксильную группы, что делает их сложными акцепторами, поэтому их выходы гликозилирования были изучены с использованием центрального составного дизайна 67 .Помимо структурного интереса, как агликоны, так и их производные обладают множеством фармакологических свойств 68,69 и, следовательно, считаются акцепторами, имеющими биотехнологическое значение. Оптимальные выходы для обоих соединений составляли ~ 100%, суммируя количества трех продуктов, наблюдаемых для каждого акцептора, как показано на рис. 2 (35, 36 и 37 для кумариновой кислоты; 39, 40 и 41 для феруловой кислоты). Короткое время реакции и низкий начальный pH благоприятствовали образованию сложного эфира сахара, тогда как увеличенное время реакции и более высокие начальные значения pH поддерживали гликозилирование в ароматическом гидроксильном положении (дополнительная таблица 3 и дополнительное обсуждение).Эти результаты непреднамеренно усилили взаимосвязь между pH реакции и желаемой принимающей функциональной группой p K a , предложенной выше, хотя потенциальное разложение сложных эфиров при щелочном pH также было возможным объяснением. Для анализа этой альтернативы стабильность ксилозного эфира транс -коричной кислоты (из которой получают феруловую и p -кумаровую кислоту) изучали при pH 7,0 и 8,0 (дополнительный рисунок 11), демонстрируя эту физико-химическую нестабильность. , хотя и существуют, не могут объяснить большие различия в выходе, наблюдаемые между реакциями, проводимыми при кислом и основном pH.В этом отношении следует отметить, что, помимо его широкой акцепторной неразборчивости, предпочтительный кислотный диапазон pH для rBxTW1-E495A от 2,2 до 5,5 имеет дополнительное преимущество, заключающееся в повышении стабильности как донора, так и некоторых продуктов. А именно, ксилозиловые эфиры и ксилозилфосфоэфиры чувствительны к нейтральному pH, поэтому даже в том случае, когда один из немногих известных примеров тиогликолигаз, образующих связи C – O – C 23,70 , мог использовать акцептор фосфорной или карбоновой кислоты. , производство соответствующего сложного эфира сахара будет скомпрометировано их нейтральным или щелочным pH реакции (дополнительная таблица 1).

      Альтернативные доноры сахара

      Кроме того, также оценивалась способность rBxTW1 использовать доноров, отличных от p NPX. 4-Нитрофенил-α-1-арабинофуранозид и 4-нитрофенил-α-1-арабинопиранозид были выбраны для замены p NPX, поскольку они вели себя как вторичные субстраты фермента дикого типа 32 . Ванилин был выбран в качестве потенциального акцептора на основании заявленных биоактивностей его гликонъюгатов 71 , а также его структурной простоты, которая, как ожидалось, позволит напрямую определить как арабинозилирование, так и разрушение арабинозильных производных.Результаты продемонстрировали синтез ваниллиларабинопиранозида и арабинофуранозида, хотя выходы были ниже, чем полученные для ванилилксилопиранозида. Производное арабинофуранозида практически не обнаруживалось с помощью ТСХ через 4 часа; вместо этого через 16 ч продукт стал лучше визуализироваться, и ожидаемая молярная масса была подтверждена с помощью ESI-MS. Качественно наблюдаемый низкий выход, вероятно, связан с небольшим потреблением p NPAf (дополнительный рисунок 12).

      Синтез арабинопиранозида ванилина был подтвержден с помощью ТСХ как через 4, так и через 16 часов реакции и дополнительно подтвержден с помощью ESI-MS.Поскольку его получали с более высокими выходами, чем арабинофуранозид, продукт очищали и идентифицировали с помощью ЯМР (соединение 11), а профиль реакции анализировали с помощью ВЭЖХ (фиг. 6).

      Рис. 6: Производство арабинопиранозида ванилина с контролем pH и без него.

      Начальный баланс донор / акцептор составлял 2/1 (моль / моль), и конверсия акцептора (%) с течением времени определялась с помощью ВЭЖХ через различные интервалы времени в течение 16 часов. Профили выхода представлены пунктирной линией и черными кружками для неконтролируемого pH и сплошной линией и белыми кружками для контролируемого pH.Средние значения показаны вместе с соответствующей стандартной ошибкой ( n = 3 независимых эксперимента). Исходные данные представлены в виде файла исходных данных.

      Профиль продукции доказал, что даже после увеличения времени инкубации максимальный выход конверсии (47%) был ниже, чем достигнутый для ксилопиранозида (66%), вероятно, из-за того, что производное арабинопиранозида является плохим субстратом по сравнению с его ксилозидный аналог.

    alexxlab

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *