Ноутбук Predator Helios 300 Ph415-53-760A (NH.Q7YER.001)

Характеристики

Предустановленное ПО

Операционная система

Процессор

Производитель процессора

Серия процессора

Процессор

10750H

Базовая частота

2. 60 ГГц

Максимальная частота

5.00 ГГц

Количество ядер

6

Кэш-память

12 Мб

Дисплей

Поверхность

матовая

Частота матрицы

144 Гц

Оперативная память

Оперативная память

Тип оперативной памяти

DDR4

Максимальный объем памяти

32 Гб

Количество слотов

2

Видеокарта

Производитель видеокарты

Модель видеокарты

Тип видеокарты

Дискретная

Объем видеопамяти

6 Гб

Тип видеопамяти

GDDR6

Накопитель

Тип накопителя

SSD

Оптический привод

Тип привода

Отсутствует

Встроенное оборудование

Стандарт Wi-Fi

802. 11ax

Версия Bluetooth

5.0

Web камера

Есть

Кардридер

Нет

Микрофон

Есть

Безопасность

Сканер отпечатков пальцев

Нет

Порты и разъемы

Разъем для наушников/микрофона

1

Клавиатура

Цифровая панель

Есть

Подсветка

Есть

Питание

Блок питания

230 Вт

Корпус

Материал

Металл/Пластик

Габариты и вес

Стоматология: цены детской стоматологии в г.

Саратов

Код услуги	код	Наименование услуги	Цена, руб
		ПРИЕМ ВРАЧА — СТОМАТОЛОГА , КОНСУЛЬТАЦИЯ
В01.065.001	011	Прием (осмотр, консультация) врача стоматолога-терапевта, составление плана-лечения	400
В01.066.001	012	Прием (осмотр, консультация) врача стоматолога-ортопеда, составление плана-лечения	400
В01.067.001	013	Прием (осмотр,консультация) врача стоматолога-хирурга, составление плана-лечения	400
В01.067.001.001	014	Прием (осмотр, консультация) врача стоматолога-хирурга-имплантолога, составление плана-лечения	700
В01.063.001	015	Прием (осмотр, консультация) врача стоматолога-ортодонта, составление плана-лечения	450
В. 01.065.001.001	016	Прием (осмотр, консультация) врача стоматолога-терапевта, парадонтолога, составление плана-лечения	700
В.01.065.008	017	Прием, осмотр профилактический	0
В.01.066.002	018	Прием, врача стоматолога-терапевта (повторный)	150
		ОБЩИЕ ПРОЦЕДУРЫ
А16.07.002.001	020	Наложение коффердама Rubber Dam (Раббер Дам)	500
А16.07.002.002	021	Наложение коффердама Optragate (Оптрагейт)	300
А16.07.002.003	022	Наложение жидкого коффердама	350
А16.07.002.004	023	Постановка декоративных страз(скайс)	1500
		ЭСТЕТИЧЕСКАЯ СТОМАТОЛОГИЯ
А16. 07.050.001	030	Профессиональное отбеливание по системе Opalesence Xtra Boost (одна челюсть в линии улыбки)	6000
А16.07.050.002	031	Профессиональное эндодонтическое отбеливание по системе Opalesence Xtra Boost (1 зуб)	750
А16.07.050.003	032	Профессиональное отбеливание зубов аппаратом ZOOM-4 (две челюсти в линии улыбки)	22000
А16.07.050.004	033	Набор для домашнего отбеливания (после клинического отбеливания)	4800
А16.07.050.005	034	Изготовление индивидуальной каппы на одну челюсть для реминирализирующей терапии	1500
		или отбеливания с учетом слепков
А16.07.050.006	035	Профессиональное отбеливание по системе Amazing White Professional Premium (1 зуб)	1000
		АНЕСТЕЗИЯ, ИНЪЕКЦИИ
В01. 003.004.001	040	Интралигаментарная местная анестезия	400
В01.003.004.002	041	Проводниковая анестезия	400
В01.003.004.004	042	Аппликационная анестезия	90
В01.003.004.005	043	Инфильтрационная анестезия	400
А11.07.011.001	044	Инъекционное введение лекарственных препаратов в челюстно-лицевую область	400
А11.07.011.002	045	Инъекционное введение плазмы (плазмолифтинг)	6100
		ОСНОВНЫЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПРОЦЕДУРЫ
А06.07.003.06	048	контрольный RVG снимок	0
А06. 07.003.05	049	RVG снимок диагностический	200
А06.07.003.01	050	RVG снимок	200
А06.07.003.02	051	Запись RVG снимков на съемный носитель	350
А06.07.003.02	052	RVG снимок пленка	260
А05.07.003.04	053	Электроодонтодиагностика	200
		Профилактика заболеваний полости рта
А14.07.008	060	Обучение гигиене полости рта и зубов, индивидуальное, подбор средств и предметов гигиены	250
А16.07.057	061	Запечатывание фиссуры зуба герметиком	350
А22. 07.002	062	Ультразвуковое удаление наддесневых и поддесневых зубных отложений в области зуба	200
А11.07.012.001	063	Глубокое фторирование эмали зуба	80
А11.07.024.001	064	Покрытие зубов реминирализирующим препаратом Clinpro White Varnish	1000
А11.07.022	066	Аппликация лекарственного препарата на слизистую оболочку полости рта	350
А17.07.001	067	Электрофорез лекарственных препаратов при патологии полости рта	250
А17.07.005	068	Магнитотерапия при патологии полости рта и зубов	250
А21.07.001	069	Вакуум-терапия в стоматологии	250
А22. 07.003	070	Лазерная физиотерапия челюстно-лицевой области	250
А16.07.019	071	Временное шинирование при заболеваниях пародонта	1400
А16.07.025	072	Избирательное пришлифование твердых тканей зуба	150
А16.07.051.001	085	Профессиональная гигиена полости рта и зубов «Профилактика»	3600
		1.Снятие зубных отложений с использованием ультразвуковой установки и аппарата Air-Flow
		2. Полировка
		3.Нанесение фтористого геля
А16.07.051.002	086	Профессиональная гигиена полости рта и зубов «Гигиена»	2850
		1. Снятие зубных отложений с использованием ультразвуковой установки
		2. Полировка
		ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ПРИЕМ
А16.07.002.001	090	Восстановление зуба пломбой. Лечение начальной стадии кариеса ( препаратом «ICON»)	1400
А16.07.002.002	091	Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
		Лечение поверхностного кариеса : Пломба нанокомпозитная «Estelite»/ «Filtek Ultimate»	2700
А16.07.002.003	092	Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
		Лечение поверхностного кариеса : Пломба-микрогибридный композитный материал «Filtek-250»	2500
А16. 07.002.004	093	Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
		Лечение поверхностного кариеса : Пломба-светоотверждаемый композит «Meridian»	1700
А16.07.002.005	094	Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
		Лечение среднего кариеса : Пломба нанокомпозитная «Estelite»/ «Filtek Ultimate»	3500
А16.07.002.006	095	Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
		Лечение среднего кариеса : Пломба-микрогибридный композитный материал «Filtek-250»	2900
А16.07.002.007	096	Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
		Лечение среднего кариеса : Пломба-светоотверждаемый композит «Meridian»	2000
А16. 07.002.008	097	Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
		Лечение глубокого кариеса : Пломба нанокомпозитная «Estelite»/ «Filtek Ultimate»	4300
А16.07.002.009	098	Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
		Лечение глубокого кариеса : Пломба-микрогибридный композитный материал «Filtek-250»	3500
А16.07.002.0010	099	Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
		Лечение глубокого кариеса : Пломба-светоотверждаемый композит «Meridian»	2500
А16.007.002.001	100	Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
		Эстетическая реставрация : Пломба нанокомпозитная «Estelite»/ «Filtek Ultimate»	6200
		Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения)
А11. 07.027	101	Наложение девитализирующей пасты	1000
	102	Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 1 канала :	3600
А16.07.010.01		Экстирпация пульпы 1 канала	600
А16.07.030.01		Инструментальная и медикаментозная обработка 1 канала	900
А16.07.008.01		Пломбирование 1 корневого канала зуба система «Beefill»	1600
А16.07.002.009		Наложение временной пломбы	350
А16.07.091		Снятие временной пломбы	150
	103	Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 2 канала :	4450
А16. 07.010.02		Экстирпация пульпы 2 канала	800
А16.07.030.02		Инструментальная и медикаментозная обработка 2 канала	1350
А16.07.008.02		Пломбирование 2 корневого канала зуба система «Beefill»	1800
А16.07.002.009		Наложение временной пломбы	350
А16.07.091		Снятие временной пломбы	150
	104	Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 3 канала :	5500
А16.07.010.03		Экстирпация пульпы 3 канала	1000
А16.07.030.03		Инструментальная и медикаментозная обработка 3 канала	1700
А16. 07.008.03		Пломбирование корневого канала зуба система «Beefill»	2300
А16.07.002.009		Наложение временной пломбы	350
А16.07.091		Снятие временной пломбы	150
	105	Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 4 канала :	7000
А16.07.010.04		Экстирпация пульпы 4 канала	1200
А16.07.030.04		Инструментальная и медикаментозная обработка канала	2100
А16.07.008.04		Пломбирование корневого канала зуба система «Beefill»	3200
А16.07.002.009		Наложение временной пломбы	350
А16. 07.091		Снятие временной пломбы	150
	106	Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 1 канала :	2600
А16.07.010.01		Экстирпация пульпы 1 канала	600
А16.07.030.01		Инструментальная и медикаментозная обработка 1 канала	900
А16.07.008.002.01		Пломбирование 1 корневого канала зуба методом латеральной конденсации	600
А16.07.002.009		Наложение временной пломбы	350
А16.07.091		Снятие временной пломбы	150
	107	Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 2 канала :	3800
А16. 07.010.02		Экстирпация пульпы 2 канала	800
А16.07.030.02		Инструментальная и медикаментозная обработка 2 канала	1350
А16.07.008.002.02		Пломбирование 2 корневого канала зуба методом латеральной конденсации	1150
А16.07.002.009		Наложение временной пломбы	350
А16.07.091		Снятие временной пломбы	150
	108	Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 3 канала :	5300
А16.07.010.03		Экстирпация пульпы 3 канала	1000
А16.07.030.03		Инструментальная и медикаментозная обработка 3 канала	1700
А16. 07.008.002.03		Пломбирование 3 корневого канала зуба методом латеральной конденсации	2100
А16.07.002.009		Наложение временной пломбы	350
А16.07.091		Снятие временной пломбы	150
	109	Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 4 канала :	6800
А16.07.010.04		Экстирпация пульпы 4 канала	1200
А16.07.030.04		Инструментальная и медикаментозная обработка 4 канала	2100
А16.07.008.002.04		Пломбирование 4 корневого канала зуба методом латеральной конденсации	3000
А16.07.002.009		Наложение временной пломбы	350
А16. 07.091		Снятие временной пломбы	150
	110	Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 1 канала :	2300
А16.07.010.01		Экстирпация пульпы 1 канала	600
А16.07.030.01		Инструментальная и медикаментозная обработка 1 канала	900
А16.07.008.001.01		Пломбирование 1 корневого канала зуба пастой	300
А16.07.002.009		Наложение временной пломбы	350
А16.07.091		Снятие временной пломбы	150
	111	Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 2 канала :	2950
А16. 07.010.02		Экстирпация пульпы 2 канала	800
А16.07.030.02		Инструментальная и медикаментозная обработка 2 канала	1350
А16.07.008.001.02		Пломбирование 2 корневого канала зуба пастой	300
А16.07.002.009		Наложение временной пломбы	350
А16.07.091		Снятие временной пломбы	150
	112	Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 3 канала :	3800
А16.07.010.03		Экстирпация пульпы 3 канала	1000
А16.07.030.03		Инструментальная и медикаментозная обработка 3 канала	1700
А16. 07.008.001.03		Пломбирование корневого 3 канала зуба пастой	600
А16.07.002.009		Наложение временной пломбы	350
А16.07.091		Снятие временной пломбы	150
	113	Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 4 канала :	4900
А16.07.010.04		Экстирпация пульпы 4 канала	1200
А16.07.030.04		Инструментальная и медикаментозная обработка 4 канала	2100
А16.07.008.001.04		Пломбирование 4 корневого канала зуба пастой	1100
А16.07.002.009		Наложение временной пломбы	350
А16. 07.091		Снятие временной пломбы	150
	114	Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров после лечения пульпита, периодонтита : Пломба нанокомпозитная «Estelite»/ «Filtek Ultimate»
А16.07.002.002			2700
	115	Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров после лечения пульпита,периодонтита : Пломба-микрогибридный композитный материал «Filtek-250″»Charisma»
А16.07.002.003			2300
А16.07.082.001	116	Распломбирование 1 корневого канала ранее леченного пастой	500
А16.07.082.002	117	Распломбирование корневого канала леченного фосфат-цементом/резорцин-формальдегидным методом	900
А16. 07.082.002.01	118	Распломбирование 1 корневого канала с применением ультразвукового скалера	1200
А16.07.030.002	119	Инструментальная и медикаментозная обработка плохо проходимого корневого канала	1200
А16.07.008.001.01	120	Пломбирование 1 корневого канала зуба пастой	300
А16.07.093.01	121	Фиксация внутриканального анкерного, титанового штифта	920
А16.07.093.02	122	Фиксация внутриканального стекловолоконного штифта	1190
А16.07.094	123	Удаление внутриканального штифта /вкладки	950
А16.07.002.009	124	Наложение временной пломбы	350
А16. 07.008	125	Временное пломбирование 1 корневого канала	500
А16.07.002.005	126	Восстановление зуба пломбой с использованием стеклоиномерных цементов	1500
А16.07.002.011	127	Восстановление (лечение) зуба с применением препарата Biodentine	4800
А16.07.002.011	128	Восстановление (лечение) зуба с применением препарата ProRoot MTA	4500
А16.07.002.011	129	Лечение перфорации зуба, прокладка с применением препарата ProRoot MTA	2600
А16.07.002.011	130	Лечение перфорации зуба с применением препарата Триоксидент	500
		Парадонтологический прием
А02. 07.009	150	Одонтопародонтограмма	1200
А02.07.003.001	151	Исследование зубодесневых карманов с помощью пародонтологического зонда, забор	350
		материала на лабораторное исследование (ссылка ***)
А16.07.038	152	Открытый кюретаж при заболевание пародонта в области одного зуба	1500
А16.07.039	153	Закрытый кюретаж при заболевании пародонта в области одного зуба	1000
А22.07.002.002	154	Ультразвуковое удаление наддесневых и поддесневых зубных отложений,1сегмент	2000
А22.07.002.003	155	Ультразвуковое удаление наддесневых и поддесневых зубных отложений в области всех зубов	3800
		(поддерживающая терапия заболеваний пародонта при хорошем уровне гигиены)
А15. 07.003	156	Наложение лечебной повязки при заболевании слизистой оболочки полости рта и пародонта	300
		в области одного зуба
А16.07.040.001	157	Лоскутная операция в области одного зуба	1800
А16.07.040.002	158	Лоскутная операция с остеопластикой в области одного зуба (ссылка ***)	2700
А11.07.010.001	159	Введение лекарственных препаратов в пародонтальный карман в области одного зуба	220
А11.07.010.002	160	Введение лекарственных препаратов в пародонтальный карман	4000
		(применение тромбоцитарной аутоплазмы (ТАП)),1ед.
		ХИРУРГИЧЕСКИЙ ПРИЕМ
В01. 067.002	210	Прием врача стоматолога-хирурга, повторный	150
А16.07.001.001	211	Удаление подвижного зуба	700
А16.07.001.002	212	Удаление подвижной стенки зуба	500
А16.07.001.003	213	Удаление постоянного зуба простое	1000
А16.07.024.001	214	Операция удаление ретенированного,дистопированного или сверхкомплектного зуба	2750
А.16.07.024.002	215	Операция удаление постоянного зуба сложное с рассечением корней и откидыванием лоскута	1800
А16.07.014	216	Вскрытие и дренирование абсцесса полости рта (периостеотомия)	1000
А16. 07.017.002	217	Коррекция объема и формы альвеолярного отростка	1300
А15.07.003.001	218	Наложение лечебной повязки «Reso Pak»	470
А15.07.003.002	219	Наложение лечебной повязки «Колапол»	480
А15.07.003.003	220	Наложение лечебной повязки «Alvogyl»	250
А15.07.003.004	221	Наложение лечебной повязки «Альвостаз»	160
А15.07.003.005	222	Наложение лечебной повязки с использованием йодоформенного бинта	200
А16.07.058	223	Лечение перикоронита(промывание,рассечение и /или иссечение капюшона)	1100
А16. 07.007	224	Резекция верхушки корня	2900
А16.07.097.001	225	Наложение швов кетгутом	250
А16.07.097.002	226	Наложение швов викрилом	400
А16.07.097.003	226/1	Наложение швов моноволоконной нитью «Гликолон»	800
А16.07.095	227	Остановка луночного кровотечения без наложения швов	320
А16.07.095.001	228	Остановка луночного кровотечения без наложения швов методом тампонады	460
А16.07.095.002	229	Остановка луночного кровотечения без наложения швов с использованием гемостатических материалов	770
А16. 07.042	230	Пластика уздечки верхней губы	1500
А16.07.043	231	Пластика уздечки нижней губы	1500
А16.07.044	232	Пластика уздечки языка	1260
А16.07.013	233	Отсроченный кюретаж лунки удаленного зуба	500
А16.07.038	234	Открытый кюретаж при заболеваниях пародонта в области зуба	1500
А16.07.039	235	Закрытый кюретаж при заболеваниях пародонта в области зуба	1000
А16.07.040	236	Удлинение клинической коронки зуба	2000
А16.07.026	237	Гингивэктомия	1910
А16. 07.016	238	Цистотомия или цистэктомия	2050
А16.07.059	239	Гемисекция зуба	1600
А16.07.060	240	Коронарно-радикулярная сепарация (премоляризация)	2100
А15.03.007	241	Наложение шины при переломах челюстей	4050
А15.03.011	242	Снятие шины с одной челюсти	560
А17.07.003	243	Диатермокоагуляция при патологии полости рта и зубов	600
А16.07.055.004	244	Использование плазмы, обогащенной тромбоцитами (PRF)	1500
А16.07.054		Имплантация зубов и костнопластические операции
А06. 30.002.001	250	Описание и интерпретация компьютерных томограмм	500
А16.07.054.001	251	Операция установки имплантата (ссылка***)	14100
А16.07.054.002	252	Операция установки формирователя десны	1800
А16.07.054.001	253	Установка хириргического шаблона (ссылка***)	3000
А16.07.055		Синус-лифтинг (костная пластика, остеопластика)
А16.07.055.001	260	Синус-лифтинг (костная пластика, остеопластика) открытый, с применением остеотропного материала и мембраны (ссылка ***)	33500
А16.07.055.002	261	Синус-лифтинг (костная пластика, остеопластика)открытый, с применением остеотропного материала, мембраны,костная смесь (ссылка ***)	40500
А16. 07.055.003	262	Синус-лифтинг (костная пластика, остеопластика) закрытый (ссылка***)	7500
А16.07.041		Костная пластика челюстно-лицевой области с применением биодеградируемых материалов
А16.07.041.001	270	Костная пластика в области 1 зуба (ссылка***)	15000
А16.07.041.002	271	Костная пластика в области 1 сегмента (ссылка***)	25000
А16.07.041.003	272	Восстановление объема костной ткани (ссылка***)	7000
		Гарантийная операция установки имплантатов
А16.07.054.003	280	Гарантийная операция установки имплантата	8820
		ОРТОПЕДИЧЕСКИЙ ПРИЕМ
В. 01.066.002	300	Прием врача стоматолога-ортопеда, повторный	150
А02.07.010	301	Исследование на диагностических моделях челюстей	600
А02.07.006	302	Определение прикуса	450
А16.07.005	303	Моделирование зубов WAX-UP, 1ед.	900
А02.07.010.001		Снятие оттисков с одной челюсти
А02.07.010.001/01	310	Снятие оттиска альгинатным материалом с одной челюсти	500
А02.07.010.001/02	311	Снятие оттиска С-силиконовым материалом с одной челюсти	550
А02.07.010.001/03	312	Снятие оттиска А-силиконовым материалом с одной челюсти	800
А02. 07.010.001/04	313	Снятие оттиска полиэфирным материалом	5000
А02.07.010.001/05	314	Снятие оттиска функциональной массой	1200
А23.07.002.039.001	315	Изготовление замыкающего клапана с помощью Detaseal function	600
А23.07.002.039.002	316	Изготовление замыкающего клапана с помощью компаунда	1000
А16.07.053		Снятие несъемной ортопедической конструкции
А16.07.053.001	320	Снятие штампованной коронки	200
А16.07.053.002	321	Снятие металлокерамической ( цельнолитой )коронки	450
		Фиксация на постоянный цемент несъемных ортопедических конструкций:
А16. 07.049.001	330	Фиксация (повторная) на постоянный цинк-фосфатный цемент	300
А16.07.049.002	331	Фиксация (повторная) на постоянный стеклоиномерный цемент Фуджи 1	900
А16.07.049.003	332	Фиксация (повторная) на постоянный стеклоиномерный цемент Фуджи плюс	1500
А16.07.049.004	333	Фиксация (повторная) временная на самоотверждаемый цемент	200
А16.07.049.005	334	Нанесение декоративного покрытия	150
А16.07.049.006	335	Фиксация (повторная) на постоянный самоадгезивный композитный цемент Relyx V200	1700
А16.07.035		Протезирование частичными съемными пластиночными протезами
А16. 07.035.001	340	Протезирование частично съемными пластиночными протезами (1-3 зуба)	3800
А16.07.035.002	341	Протезирование частично съемными пластиночными протезами термопластическими (1-3 зуба)	5500
А16.07.035.003	342	Протезирование частично съемными пластиночными протезами (до 8 зубов) (отеч.произ-ва)	5600
А16.07.035.004	343	Протезирование частично съемными пластиночными протезами (до 8 зубов) (импорт.произ-ва)	7400
А16.07.035.005	344	Протезирование частично съемными пластиночными протезами термопластическими (до 8 зубов) (отеч.произ-ва)	11000
А16.07.035.006	345	Протезирование частично съемными пластиночными протезами термопластическими (до 8 зубов) (импорт. произ-ва)	12800
А16.07.035.007	346	Коррекция частичного съемного пластиночного протеза	500
А16.07.023		Протезирование полными съемными пластиночными протезами
А16.07.023.001	350	Протезирование зубов полными съемными пластиночными протезами ( зубы отеч.произ-ва)	7700
А16.07.023.002	351	Протезирование зубов полными съемными пластиночными протезами ( зубы импорт.произ-ва)	9500
А16.07.023.003	352	Протезирование зубов полными съемными пластиночными протезами термопластическими ( зубы отеч.произ-ва)	14000
А16.07.023.004	353	Протезирование зубов полными съемными пластиночными протезами термопластическими ( зубы импорт. произ-ва)	16700
А16.07.023.005	354	Коррекция полного съемного пластиночного протеза	500
А16.07.024.005.001	355	Изготовление каркаса методом литьевым прессованием (Ацетал Дентал) Италия	13000
А16.07.024.005.002	355/1	Изготовление каркаса методом литьевым прессованием (T-crustal) Польша	18000
А16.07.023.001	356	Армирование съемного пластиночного протеза (решетка)	1500
А16.07.023.002	357	Изготовление литого зуба в съемном протезе (утяжелитель)	1000
А16.07.023.003	358	Изготовление индивидуальной ложки	550
А23.07.002.034.001	359	Перебазировка съемного протеза лабораторным методом	1400
А23. 07.002.034.002	360	Перебазировка съемного протеза ( прямой метод)	2100
А23.07.002.010.001	361	Изготовление кламмера гнутого из стальной проволки	250
А23.07.002.010.002	362	Изготовление кламмера типа Пелот	400
А23.07.002.010.003	363	Изготовление петельчатого кламмера	650
А23.07.002.019.001	364	Изготовление кламмер системы «Нея»	900
А23.07.002.019.002	365	Изготовление литого опорно-удерживающего кламмера	950
А23.07.002.011	366	Изоляция торусов	400
А23.07.002.039	367	Изготовление эластической прокладки	2000
А16. 07.036		Протезирование съемными бюгельными протезами
А23.07.002.017	370	Изготовление литого базиса	6950
А23.07.002.015	371	Изготовление бюгельного каркаса	9700
А23.07.002.046.001	372	Изготовление замкового крепления (систиема ВКС -СГ)	3500
А23.07.002.046.002	373	Изготовление замкового крепления (система ВКС Оц Уни)	9500
А23.07.002.046.003	374	Замена матрицы (систиема ВКС -СГ)	2500
А23.07.002.046.004	374/1	Замена одной матричной системы (система ВКС Оц Уни)	5000
А23.07.002.060	375	Изготовление пластинки с окклюзионными накладками ( многозвеньевая )- 1 звено	250
А23. 07.002.021	376	Изготовление ограничителя базиса бюгельного протеза (антиопрокидыватель)	800
А16.07.036.001	377	Фрезеровка (один элемент)	350
А23.07.002.022	378	Изготовление седла бюгельного протеза	1500
А23.07.002.016	379	Изготовление огнеупорной модели	1200
А23.07.002.016.001	380	Дублирование модели	1300
А16.07.003		Восстановление зуба вкладками, виниром, полукоронкой
А16.07.003.001	381	Разработка корневого канала под культевую вкладку	200
А16.07.003.002	382	Изготовление вкладки одноканальной	1500
А16. 07.003.003	383	Изготовление вкладки двухканальной	2000
А16.07.003.004	384	Изготовление вкладки разборной	2300
А16.07.003.005	385	Изготовление вкладки из диоксида циркония	5000
А16.07.004		Восстановление зуба коронкой
А23.07.002.054.001	390	Изготовление коронки металлокерамической (фарфоровой)	4700
А23.07.002.054.002	391	Изготовление коронки безметалловой из диоксида циркония	12100
А23.07.002.054.003	392	Изготовление коронки (винира) безметалловой из прессованной керамики (Е-мах)	14000
А23.07. 002.028.001	393	Изготовление коронки цельнолитой с керамической облицовкой	4300
А23.07.002.028.002	394	Изготовление коронки цельнолитой	2500
А23.07.002.041	395	Изготовление коронки телескопической	2500
А23.07.002.030.001	396	Изготовление пластмассовой коронки	1000
А23.07.002.030.002	397	Изготовление пластмассовой коронки временной (в полости рта)	1000
А23.07.002.031	398	Изготовление штампованой коронки	1260
А23.07.002.054.004	399	Реставрация коронки металлокерамической прямым методом	2500
А16. 07.005		Восстановление целостности зубного ряда несъемными мостовидными протезами
А23.07.002.049	400	Изготовление зуба металлокерамического	4700
А23.07.002.049.001	401	Изготовление зуба безметаллового из диоксида циркония	12100
А23.07.002.001.001	402	Изготовление зуба цельнолитого с керамической облицовкой	4300
А23.07.002.001.002	403	Изготовление зуба литого металлического в несъемной конструкции протеза	2500
А23.07.002.050	404	Изготовление зуба пластмассового сложного	1100
А23.07.002.005	405	Изготовление спайки	150
А23. 07.002.002	406	Изготовление лапки литого зуба	320
А23.07.002.056	407	Изготовление окклюзионной накладки в мостовидном протезе	320
А23.07.002.048	408	Изготовление зуба металлоакрилового	3100
А16.07.006		Протезирование зуба с использованием имплантата
А16.07.006.001	410	Установка абатмента(ссылка***)	4950
А16.07.006.002	411	Изготовление металлокерамической коронки на имплантате	7350
А16.07.006.003	412	Изготовление цельнолитой коронки на имплантате	4850
А16.07.006.004	413	Изготовление коронки из диоксида циркония на имплантате	15750
А16. 07.006.005	414	Замена винта абатмента(ссылка***)	600
А16.07.006.006	415	Изготовление временного абатмента (ссылка***)	3000
А23.07.002.030.003	416	Изготовление временной пластмассовой коронки на имплантанте	3000
А23.07.002.037		Починка съемного пластиночного протеза
А23.07.002.037.001	420	Починка перелома базиса самотвердеющей пластмассой	1200
А23.07.002.037.002	421	Починка перелома базиса самотвердеющей пластмассой с армированием	1650
А23.07.002.036	422	Приварка зуба	800
А16.07.023	423	Профессиональная чистка протеза	700
А23. 07.002.035	424	Приварка кламмера	800
		ОРТОДОНТИЧЕСКИЙ ПРИЕМ
А16.07.047		Ортодонтическая коррекция съемным ортодонтическим аппаратом
А16.07.047.001	501	Ортодонтическая коррекция съемным аппаратом одночелюстным	8500
А16.07.047.002	502	Ортодонтическая коррекция съемным аппаратом двухчелюстным	12000
А23.07.001.002	503	Ремонт ортодонтического аппарата	1500
А23.07.001.01	504	Коррекция ортодонтических аппаратов	450
А23.07.001.02	505	Коррекция несъемного ортодонтического аппарата с заменой дуги	1000
А02. 07.010	507	Комплексное диагностическое обследование (снятие оттисков, изготовление и расчет диагностических моделей, анализ снимков (ОПТГ, ТРГ, КТ), составление плана лечения	3500
А16.07.048		Ортодонтическая коррекция с применением брекет-систем
А23.07.002.065.001	508	Лечение с использованием съемных капп по системе «Еврокаппа»	159000
А16.07.048.013	509	Ортодонтическая коррекция с применением брекет-системы 4+2 (ссылка***)	15400
А16.07.048.001	510	Ортодонтическая коррекция с применением металлических брекет-систем (ссылка***)	30240
А16.07.048.002	511	Ортодонтическая коррекция с применением комбинированной брекет-системы (ссылка***)	36435
А16. 07.048.003	512	Ортодонтическая коррекция с применением керамической брекет-системы (ссылка***)	41265
А16.07.048.004	513	Ортодонтическая коррекция с применением безлигатурной брекет-системы (ссылка***)	33075
А16.07.048.005	514	Ортодонтическая коррекция с применением безлигатурной брекет-системы (Damon Q) (ссылка***)	42945
А16.07.048.006	515	Ортодонтическая коррекция с применением cапфировой брекет-системы (ссылка***)	42525
А16.07.048.007	516	Повторная фиксация брекета	1350
А16.07.048.008	517	Снятие брекета с одного зуба,ретейнера, полировка	200
А16.07.048.009	518	Изготовление ретенционной пластины	3500
А16. 07.048.010	519	Изготовление ретенционной каппы	3500
А16.07.048.011	520	Ретейнер	1890
А16.07.048.012	521	Припасовка съемной аппаратуры (трейнер, вестибулярная пластина и т.д.) (ссылка***)	6000
А23.07.002.065.002	522	3D моделирование, предварительное планирование лечения по системе «Еврокаппа»	16000
А23.07.002.065.003	523	Повторная печать 1 каппы по системе «Еврокаппа»	3000
		ссылка*** — по указанным работам дополнительно оплачивается необходимый материал
код услуги	код	Наименование материала	цена, руб
А16. 07.048.001	601	Брекет In-ovation-R металлические (1 шт.)	875
А16.07.048.001	602	Брекет Damon Q (1 шт.)	1450
А16.07.048.003	603	Брекет Damon Clear керамические(1 шт)	2580
А16.07.048.003	604	Брекет in-ovation-C (керамические) (1 шт)	1680
А16.07.048.001	605	Брекет металлический (1 шт)	500
А16.07.048.001	606	Брекет Damon 3 MX (металлический)	725
А16.07.048.001	606/1	Брекет самолигирующий Discovery Dentaurum (Германия)	720
А16.07.048.001	606/2	Брекет самолигирующий Дэймон Q и Q2 ORMCO (США)	1400
А16. 07.048.012	607	Трейнер, LM- Активатор	4625
А16.07.048.012	608	Вестибулярная пластина силиконовая	1800
А16.07.048.012	609	Шина составная TNJ	5000
		СИСТЕМА Nobel Biocare
А16.07.006.001	610	Абатмент Nobel Biocare	11000
А16.07.006.001	611	Аналог Nobel Biocare	2000
А16.07.006.001	612	Трансфер Nobel Biocare	3300
А16.07.006.001	613	Фиксирующий винт Nobel Biocare	4200
А16.07.006.001	614	Абатмент Титановый Conihal Nobel Biocare	10000
А16. 07.006.001	615	Формирователь десневого края Нобель Replace Groovy	4700
А16.07.054.001	616	Имплантат Nobel Biocare	15000
А16.07.054.001	617	Имплантат Replace Groovy(без заглушки)	17040
А16.07.054.001	618	Заглушка к имплантату Nobel Biocare Replace Groovy	3000
А16.07.054.001	619	Имплантат NobelActive Internal	21400
		КОСТНОЗАМЕЩАЮЩИЕ МАТЕРИАЛЫ
А16.07.055	620	Резорбируемая мембрана коллагеновая 30мм*40мм	14150
А16.07.055	621	Резорбируемая мембрана коллагеновая 20мм*30мм	6000
А16. 07.055	621/1	Резорбируемая мембрана коллагеновая 15мм*20мм	3500
А16.07.055	622	Костнопластический материал OsteoBiol Gen-Os, 1см3	15200
А16.07.055	623	Костнопластический материал OsteoBiol Gen-Os, 0,5см3	8500
А16.07.055	623/1	Костнопластический материал Osstem OsteOss, 1см3	9200
А16.07.055	623/2	Костнопластический материал Osstem OsteOss , 0,5см3	6700
А16.07.055	623/3	Костнопластический материал Osstem OsteOss , 0,25см3	4200
А16.07.055	624	Костная смесь увлажненная (гель) OsteoBiol Mp3, 1см3	16000
А16. 07.055	625	Костная смесь увлажненная (гель) OsteoBiol Mp3, 0,5см3	12500
А16.07.055	625/1	Костная смесь увлажненная (гель) Osstem ExFuse, 1см3	14500
А16.07.055	625/2	Костная смесь увлажненная (гель) Osstem ExFuse, 0,5см3	8400
А16.07.055	626	Костный блок	15000
А16.07.055	627	Мембрана с титановым усилением Cytoplast Ti-250 17 мм х 25 мм	22000
А11.07.010	628	Матричный протеин Эмдогейн 0,3мг	7500
А16.07.055	629	Мембрана с титановым усилением Cytoplast Ti-250 25 мм х 30 мм	32000
А16.07.055	629/1	Мембрана с титановым усилением Cytoplast Ti-250 20 мм х 25 мм	29000
		СИСТЕМА Alpha Bio
А16. 07.006.001	630	Металическое гнездо Alpha Bio	2000
А16.07.006.001	631	Нейлоновый/ пластиковый колпачок Alpha Bio	1600
А16.07.006.001	632	Абатмент Циркониевый Alpha Bio	5200
А16.07.006.001	633	Усиленный винт Alpha Bio	2000
А16.07.006.001	634	Колпачок Uni Cover шаровидный Alpha Bio	2000
А16.07.006.001	635	Колпачок Uni Cover для винтового и балочного крепления съемных конструкций Alpha Bio	2000
А16.07.006.001	636	Колпачок Alpha Bio Pro Alpha Vni Cover	2000
А16.07.006.001	637	Фиксирующий винт Alpha Bio	1700
А16. 07.006.001	638	Пластиковый колпачок Alpha Bio	1700
А16.07.006.001	639	Абатмент Alpha Bio	2600
А16.07.006.001	639/1	Временный Абатмент Alpha Bio	2300
А16.07.006.001	640	Абатмент шаровидный Alpha Bio	2970
А16.07.006.001	641	Абатмент Multi UnitAlpha Bio	4000
А16.07.054.001	642	Имплантат Alpha Bio	7800
А16.07.006.001	643	Колпачок пластиковый с титановым кольцом	2500
		Система Osstem
А16.07.054.001	644	Имплантат Osstem TS (Корея)	7000
А16. 07.006.001	645	Абатмент шаровидный Osstem	4500
А16.07.006.001	646	Ретенционный колпачок O-ring	1500
А16.07.006.001	647	Мультиюнит Osstem	2760
		Лаборатория (Ортос)
А16.07.006.001	650	Абатмент индивидуальный без винта	2650
		Система MIS
А16.07.054.001	660	Имплантат MIS	11500
А16.07.006.001	661	Абатмент прямой пластиковый с шестигранником MD-CPh23, «MIS»	2500
А16.07.006.001	662	Абатмент трансгингивальный «MIS»	4300
А16. 07.006.001	663	Винт ортопедический титановый «MIS»	1600
А16.07.006.001	664	Абатмент временный титановый «MIS»	4000
		Лаборатория «УНИСТОМ»
А16.07.006.001	670	Абатмент титановый	2500
А16.07.006.001	671	Абатмент титановый с винтовой фиксацией	3400
А16.07.006.001	674	Абатмент из диоксида циркония	3150
А16.07.054.001	680	Шаблон хирургический база	850
А16.07.054.001	681	Шаблон хирургический с направляющим сверлением (1 место)	1300
А16. 07.054.001	682	Шаблон хирургический с титановой втулкой (1 место)	1700
		ДЕТСКАЯ СТОМАТОЛОГИЯ
В01.064.003	700	Прием (осмотр,консультация) стоматолога детского , первичный	400
В01.064.004	701	Прием (осмотр,консультация) стоматолога детского , повторный	150
		АНЕСТЕЗИЯ
В01.003.004.001.001	702	Интралигаментарная местная анестезия с применением компьтерного аппарата STA Drive Unit (США)	1300
В01.003.004.002.001	703	Проводниковая анестезия с применением компьтерного аппарата STA Drive Unit (США)	1300
В01. 003.004.005.001	704	Инфильтрационная анестезия с применением компьтерного аппарата STA Drive Unit (США)	1300
А11.07.027.001	705	Наложение девитализирующей пасты	300
А16.07.002.009	706	Наложение временной пломбы	150
		Профилактика заболеваний полости рта
А11.07.024.003	710	Местное применение реминерализующих препаратов в области зуба (СНОУ ГЕЛЬ)	650
А11.07.012.002	711	Глубокое фторирование (СНОУ ГЕЛЬ 60 секунд )	200
А.11.07.012.003	712	Глубокое фторирование (CНОУ ПЕНКА ФЛОАМ )	220
А11.07.012..004	713	Глубокое фторирование (СНОУ ФЛОЛЛИ)	530
А16. 07.020.001	714	Удаление наддесневых и поддесневых зубных отложений ручным методом	120
А16.07.025	715	Избирательное пришлифование твердых тканей зуба	150
		Терапевтический прием
А16.07.002.005	720	Восстановление зуба пломбой с использованием стеклоиномерных цементов лечение кариеса молочного зуба
			1200
А16.07.002.010	721	Восстановление зуба пломбой с использованием фотополимеров лечение кариеса молочного зуба
			1500
А16.07.008.001	722	Пломбирование корневого канала зуба с применением жидкости «Форфенан»	200
А16. 07.008.002	723	Пломбирование корневого канала зуба с применением пасты «Форфенан»	300
А11.07.023	724	Применение метода серебрения зуба	250
А16.07.002	725	Наложение лечебной прокладки «Кальцемол»	300
		Лечение осложненного кариеса:
А16.07.008.003	726	Пломбирование зуба «Триоксидент»/»Пульподент»	900
А16.07.008.004	727	Пломбирование корневого канала зуба пастой «Метапекс»	300
А16.07.030	730	Инструментальная и медикаментозная обработка одного канала	700
А16.07.008.005	731	Временное пломбирование 1-го корневого канала зуба	250
А16. 07.008.006	732	Постоянное пломбирование 1-го корневого канала зуба гуттаперчей и методом латеральной конденсации
			900
А16.07.002.010	733	Постановка временной светоотверждающей пломбы	300
		Хирургический прием
А16.07.001.004	800	Удаление молочного зуба	600
А16.07.044.001	801	Рассечение уздечки языка	600
		Ортопедический прием
А02.07.010.001/02	850	Снятие оттиска с-силиконовым материалом с одной челюсти	400
А16.07.004.001	851	Восстановление зуба металлической коронкой	1500
А16. 07.004.002	852	Восстановление зуба «Стрип» коронкой (колпачек)	2500
А16.07.003	853	Восстановление зуба вкладками «Vitrebond»	800
А16.07.049.001	854	Фиксация на постоянный цинк-фосфатный цемент	300
		Лаборатория ИНВИТРО
А02.07.003.002	1000	Посев на анаэробную микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам	1800
А02.07.003.003	1001	Посев на микрофлору и определение чувствительности к антимикробным препаратам	1075
А02.07.003.004	1002	Посев на микрофлору и определение чувствительности к расширенному спектру	2600
		антимикробных препаратов
А02. 07.003.005	1003	Посев на микрофлору и определение чувствительности к антимикробным препаратам и	1337
		бактериофагам

Светильник ЖКУ 21-250-001 Гелиос ШБ (со стеклом)

Упростите Вашу работу с заявкой

Скорее всего, перед вами сейчас лежит смета или список позиций, которые необходимо приобрести.

Отправьте нам на E-mail заявку целиком, и мы выставим Вам счет на то, что Вам нужно. Мы обсчитываем каждую заявку индивидуально и стараемся предоставить лучшую цену, исходя из вашего объема и требований по срокам поставки. На сайте представлена лишь часть ассортимента, который мы можем поставить. Полный ассортимент значительно шире.

Убедитесь, что в письме с заявкой есть Ваше имя, телефон, реквизиты (или хотя бы название) компании, на которую нужно выставить счет. Электронную почту вы можете увидеть, нажав на кнопку «Показать E-mail» в правом верхнем углу сайта.

Светильник ЖКУ 21-250-001 Гелиос ШБ (со стеклом) можно купить у нас по безналичному расчету, отправив заявку на электронную почту. Мы осуществляем доставку по Москве до адреса клиента, либо до транспортной компании, которая осуществит доставку в Ваш регион. Доставка может быть как бесплатной, так и платной в зависимости от суммы закупки и дальности. Точный просчет может совершить менеджер по вашему запросу.

Продукция торговой марки Galad отличается высоким качеством. Ценовой диапазон средний и высокий. Сроки поставки на продукцию Galad составляют от 2 дней до 2 месяцев в зависимости от позиции. Продукция производится в России на заводах расположенных в г. Лихославль(ООО Лихославльский завод «Светотехника») и г.Кадошкино(ОАО «Кадошкинский Электротехнический завод»). Брак практически не встречается. Срок службы очень высокий.

Назначение

Освещение улиц, дорог с высокой, средней и слабой интенсивностью движения транспорта, железнодорожных платформ и станций, мостов, территорий дворов, школ

Модификации

• 001 – отражатель герметично соединён с защитным стеклом, степень защиты оптического отсека IP65, широкая боковая КСС, габаритные размеры 655х270х265 мм
• 002 – отражатель герметично соединён с защитным стеклом, степень защиты оптического отсека IP65, широкая осевая КСС, габаритные размеры 655х270х265 мм
• 003 – защитное стекло соединено с отражателем при помощи накидных замков, степень защиты оптического отсека IP54, широкая боковая КСС, габаритные размеры 655х270х265 мм
• 004 – защитное стекло соединено с отражателем при помощи накидных замков, степень защиты оптического отсека IP54, широкая осевая КСС, габаритные размеры 655х270х265 мм
• 005 – без защитного стекла, степень защиты IP23, широкая боковая КСС, габаритные размеры 655х270х165 мм
• 006 – без защитного стекла, степень защиты IP23, широкая осевая КСС, габаритные размеры 655х270х165 мм
• Комплектуется встроенным ЭМПРА, под заказ – ЭПРА
• Цвет светильника по умолчанию: серый

Конструкция и обслуживание

• Корпус-крышка изготовлен из термостойкой ударопрочной пластмассы
• Основание изготовлено из стального проката, покрашенного порошковой краской
• Отражатель изготовлен из алюминия высокой чистоты методом глубокой вытяжки
• Защитное стекло из светостабилизированного поликарбоната
• Светильник рекомендуется устанавливать на Г-образных кронштейнах диаметром 48 мм под углом 15° к горизонту. Другие положения тоже возможны
• Оптический отсек (мод. 001 и 002) – доступ сверху. Открыть два замка в торцевой части светильника. Оптический отсек при- мет вертикальное положение. Повернуть крышку с патроном против часовой стрелки, освободить от фиксации с пластмассо- вым стаканом, вынуть из оптического отсека и заменить лампу
• Оптический отсек (мод. 003 и 004) – доступ снизу. Открыть два замка, крепящих стекло, откинуть стекло. Это обеспечит доступ к лампе с патроном
• Отсек ПРА – доступ сверху. Открыть два замка в торцевой части светильника. Корпус вместе с оптическим отсеком примет вертикальное положение. Это обеспечит доступ к ПРА, клеммной колодке и узлу крепления

Преимущества

• Антивандальность: ударопрочные защитное стекло и корпус
• Долговечность: металлические детали защищены порошковым покрытием
• Гарантия качества: отражатель обработан электрохимической полировкой и анодированием, защищен от окисления и коррозии
• Стабильность: защитное стекло сохраняет коэффициент пропускания с течением времени
• Высокая степень защиты от воздействия окружающей среды (мод 001 и 002): оптический отсек полностью пыле- и влагонепроницаем
• Удобство обслуживания: ПРА установлен на легкосъемной панели
• Вариативность светораспределения: наличие двух типов КСС позволяет найти оптимальное решение для каждого проекта
• Дизайн: функциональный классический

Predator — Портативный компьютер Helios 300 NH.Q53AA.001 — Mundo Compu Hogar Usa

Готовый к битве и жаждущий битвы Helios 300 доставит вас в игру со всем, что вам нужно. Только сейчас мы вооружили его графикой NVIDIA GeForce GTX 1660 Ti, новейшим процессором Intel Core i7 9-го поколения и нашей специально разработанной технологией AeroBlade 3D Fan 4-го поколения. Благодаря панели IPS 144 Гц и времени отклика 3 мс Overdrive вы можете попрощаться с размытием и насладиться чистым, четким, высокооктановым игровым процессом.Благодаря потрясающей комбинации интеллектуальных функций процессор Intel Core i7 невероятно мощный. PredatorSense — это идеальный инструмент для управления и настройки игрового процесса из одного места. Просто нажмите кнопку PredatorSense и управляйте освещением, скоростью вентилятора, разгоном, игровыми профилями и т. Д.

Технические характеристики

Размер экрана	15,6 ″
Разрешение дисплея	1920 x 1080
Производитель процессора	Intel
Процессор	i7
Скорость процессора	2.60 ГГц
Количество ядер процессора	6
Память (ОЗУ) установлена ​​	16 ГБ
Память (RAM) Тип	DDR4 SDRAM
Операционная система	Windows 10 Домашняя
SSD (твердотельный накопитель)	512 ГБ
Порты USB	Есть
Тип дисплея	IPS широкоформатный дисплей со светодиодной подсветкой
Производитель графического контроллера	Nvidia
Видеопамять	6 ГБ
Встроенная веб-камера	Есть
Встроенный микрофон	Есть
Разъем для наушников	1 * комбинированный аудиоразъем: 1 * головной телефон / 1 * микрофонный вход
Беспроводная сеть	802.11ac
Ethernet	Есть
Сетевое подключение	10/100/1000 гигабит
HDMI	Есть
Указывающее устройство	Сенсорная панель

Размеры

В штучной упаковке

Высота	14,2 дюйма
Ширина	0,9 дюйма
Масса	5 фунтов 8.16 унций
Глубина	10,0 дюймов

Foxp3 + Helios + регуляторные Т-клетки связаны с субпопуляциями моноцитов и их экспрессией PD-1 во время острой инфекции ВИЧ-1 | BMC Immunology

1.

Saison J, Ferry T, Demaret J, Maucort BD, Venet F, Perpoint T, Ader F, Icard V, Chidiac C, Monneret G. Связь между дискордантным иммунологическим ответом на высокоактивную антиретровирусную терапию, процент регуляторных Т-клеток, активация иммунных клеток и очень низкий уровень виремии у ВИЧ-инфицированных пациентов.Clin Exp Immunol. 2014; 176: 401–409.

CAS Статья Google Scholar

2.

Curotto DLM, Lafaille JJ. Природные и адаптивные регуляторные Т-клетки foxp3 +: что-то похожее или разделение труда? Иммунитет. 2009. 30: 626–35.

Артикул Google Scholar

3.

Khaitan A, Kravietz A, Mwamzuka M, Marshed F, Ilmet T, Said S, Ahmed A, Borkowsky W., Unutmaz D. FOXP3 + Helios + регуляторные Т-клетки, активация иммунной системы и прогрессирующее заболевание у ВИЧ-инфицированных дети.J Acquir Immune Defic Syndr. 2016; 72: 474–84.

CAS Статья Google Scholar

4.

Ким Х.Дж., Барниц Р.А., Креславски Т., Браун Ф.Д., Моффет Х., Лемье М.Э., Кайгусуз Й., Мейсснер Т., Холдеррид Т.А., Чан С. и др. Для стабильной ингибирующей активности регуляторных Т-клеток необходим фактор транскрипции Helios. Наука. 2015; 350: 334–9.

CAS Статья Google Scholar

5.

Шевач Э.М., Торнтон AM. tTregs, pTregs и iTregs: сходства и различия. Immunol Rev.2014; 259: 88–102.

CAS Статья Google Scholar

6.

Mercer F, Khaitan A, Kozhaya L, Aberg JA, Unutmaz D. Дифференциация эффекторных и регуляторных Т-клеток человека, продуцирующих IL-17, от наивных предшественников, коммитированных по клонам. J Immunol. 2014; 193: 1047–54.

CAS Статья Google Scholar

7.

Анцингер Дж. Дж., Баттерфилд Т. Р., Ангелович Т. А., Кроу С. М., Палмер К. С.. Моноциты как регуляторы воспаления и сопутствующих заболеваний, связанных с ВИЧ, во время АРТ. J Immunol Res. 2014; 2014: 569819.

Артикул Google Scholar

8.

Циглер-Хайтброк Л., Анкута П., Кроу С., Далод М., Грау В., Харт Д. Н., Линен П. Дж., Лю Ю. Дж., Макферсон Г., Рэндольф Г. Дж. И др. Номенклатура моноцитов и дендритных клеток крови. Кровь. 2010; 116: e74–80.

CAS Статья Google Scholar

9.

Jakubzick CV, Randolph GJ, Henson PM. Дифференцировка моноцитов и антигенпрезентирующие функции. Nat Rev Immunol. 2017; 17: 349–62.

CAS Статья Google Scholar

10.

Чжун Х., Язданбахш К. Дифференциальный контроль развития Helios (+/-) Treg субпопуляциями моноцитов посредством разрозненных воспалительных цитокинов. Кровь. 2013; 121: 2494–502.

CAS Статья Google Scholar

11.

Day CL, Kaufmann DE, Kiepiela P, Brown JA, Moodley ES, Reddy S, Mackey EW, Miller JD, Leslie AJ, DePierres C и др. Экспрессия PD-1 на ВИЧ-специфических Т-клетках связана с истощением Т-клеток и прогрессированием заболевания. Природа. 2006; 443: 350–4.

CAS Статья Google Scholar

12.

Саиди А., Занди К., Чеок Й.Й., Саейди Х., Вонг В.Ф., Ли С., Чеонг Х.С., Йонг Ю.К., Ларссон М., Шанкар Э.М. Истощение Т-клеток при хронических инфекциях: изменение состояния истощения и восстановление оптимальных защитных иммунных реакций.Фронт Иммунол. 2018; 9: 2569.

Артикул Google Scholar

13.

Ларссон М., Шанкар Е.М., Че К.Ф., Саейди А., Эллегард Р., Баратан М., Велу В., Камарулзаман А. Молекулярные признаки ингибирования Т-клеток при инфекции ВИЧ-1. Ретровирология. 2013; 10:31.

CAS Статья Google Scholar

14.

Риелла Л.В., Патерсон А.М., Шарп А.Х., Чандракер А. Роль пути PD-1 в иммунном ответе.Am J Transplant. 2012; 12: 2575–87.

CAS Статья Google Scholar

15.

Петровас С., Касазза Дж. П., Бренчли Дж. М., Прайс Д.А., Гостик Э, Адамс В.С., Precopio ML, Шакер Т., Родерер М., Дуек Д.К. и др. PD-1 является регулятором выживаемости вирус-специфичных CD8 + Т-клеток при ВИЧ-инфекции. J Exp Med. 2006; 203: 2281–92.

CAS Статья Google Scholar

16.

Саид Э.А., Дюпюи Ф.П., Траутманн Л., Чжан Й., Ши Й., Эль-Фар М., Хилл Б.Дж., Ното А., Анкута П., Перец Й. и др.Вызванная запрограммированной смертью-1 продукция интерлейкина-10 моноцитами нарушает активацию CD4 + Т-клеток во время ВИЧ-инфекции. Nat Med. 2010; 16: 452–9.

CAS Статья Google Scholar

17.

Бардхан К., Анагностоу Т., Буссиотис В.А. Путь PD1: PD-L1 / 2 от открытия до клинического внедрения. Фронт Иммунол. 2016; 7: 550.

Артикул Google Scholar

18.

МакМайкл А.Дж., Заимствование П., Томарас Г.Д., Гунетиллеке Н., Хейнс Б.Ф.Иммунный ответ во время острой инфекции ВИЧ-1: ключи к разработке вакцины. Nat Rev Immunol. 2010; 10: 11–23.

CAS Статья Google Scholar

19.

Chen P, Su B, Zhang T, Zhu X, Xia W, Fu Y, Zhao G, Xia H, Dai L, Sun L, et al. Нарушения субпопуляций моноцитов и их связь с дифференцировкой Т-хелперных клеток у пациентов с острой и хронической ВИЧ-1-инфекцией. Фронт Иммунол. 2017; 8: 272.

PubMed PubMed Central Google Scholar

20.

Гуо Н, Лю Л., Ян X, Сонг Т, Ли Г, Ли Л., Цзян Т., Гао И, Чжан Т., Су Б и др. Иммунологические изменения в субпопуляциях моноцитов и их связь с Foxp3 (+) регуляторными Т-клетками у ВИЧ-1-инфицированных лиц с сифилисом: краткий отчет об исследовании. Фронт Иммунол. 2019; 10: 714.

CAS Статья Google Scholar

21.

Simonetta F, Lecuroux C, Girault I, Goujard C, Sinet M, Lambotte O, Venet A, Bourgeois C. Раннее и длительное изменение эффекторных CD45RA (-) Foxp3 (высоких) регуляторных Т-клеток гомеостаз при ВИЧ-инфекции.J Infect Dis. 2012; 205: 1510–9.

CAS Статья Google Scholar

22.

Matavele CR, Namalango E, Maphossa V, Macicame I, Bhatt N, Polyak C, Robb M, Michael N, Jani I, Kestens L. Частоты регуляторных Т-клеток Helios + коррелируют с контролем репликации вирусов и восстановление абсолютного количества Т-лимфоцитов CD4 на ранней стадии инфицирования ВИЧ-1. BMC Immunol. 2017; 18:50.

Артикул Google Scholar

23.

Bandera A, Ferrario G, Saresella M, Marventano I, Soria A, Zanini F, Sabbatini F, Airoldi M, Marchetti G, Franzetti F и др. Истощение CD4 + Т-лимфоцитов, активация иммунной системы и увеличение производства регуляторных Т-клеток в тимусе ВИЧ-инфицированных людей. PLoS One. 2010; 5: e10788.

Артикул Google Scholar

24.

Fritzsching B, Oberle N, Eberhardt N, Quick S, Haas J, Wildemann B, Krammer PH, Suri-Payer E. В отличие от эффекторных Т-клеток, регуляторные Т-клетки CD4 + CD25 + FoxP3 + очень чувствительны. к лиганду CD95, но не к гибели клеток, опосредованной TCR.J Immunol. 2005; 175: 32–6.

CAS Статья Google Scholar

25.

Lim A, Tan D, Price P, Kamarulzaman A, Tan HY, James I, French MA. Доля циркулирующих Т-клеток с фенотипом регуляторных клеток увеличивается при активации иммунной системы, связанной с ВИЧ, и остается высокой при антиретровирусной терапии. СПИД. 2007; 21: 1525–34.

Артикул Google Scholar

26.

Piconi S, Trabattoni D, Gori A, Parisotto S, Magni C, Meraviglia P, Bandera A, Capetti A, Rizzardini G, Clerici M.Иммунная активация, апоптоз и активность Treg связаны со стойким снижением количества CD4 + Т-клеток во время антиретровирусной терапии. СПИД. 2010; 24: 1991–2000.

CAS Статья Google Scholar

27.

Вайс Л., Пикетти С., Ассуму Л., Дидье С., Каккавелли Л., Донкова-Петрини В., Леви Ю., Жирар П. М., Бургард М., Виард Дж. П. и др. Связь между регуляторными Т-клетками и активацией иммунной системы у пациентов, инфицированных вирусом иммунодефицита человека, прерывающих антиретровирусную терапию.PLoS One. 2010; 5: e11659.

Артикул Google Scholar

28.

Ямадзаки С., Инаба К., Тарбелл К.В., Штайнман Р.М. Дендритные клетки размножают антиген-специфические Foxp3 + CD25 + CD4 + регуляторные Т-клетки, включая супрессоры аллореактивности. Immunol Rev.2006; 212: 314–29.

CAS Статья Google Scholar

29.

Чжун Х, Бао В., Ли Х, Миллер А., Сири С., Хак Н., Бассел Дж., Язданбахш К.Моноциты CD16 + контролируют развитие субпопуляции Т-клеток при иммунной тромбоцитопении. Кровь. 2012; 120: 3326–35.

CAS Статья Google Scholar

30.

Паукен К.Э., Уэрри Э.Дж. Преодоление истощения Т-лимфоцитов при инфекции и раке. Trends Immunol. 2015; 36: 265–76.

CAS Статья Google Scholar

31.

Yao S, Wang S, Zhu Y, Luo L, Zhu G, Flies S, Xu H, Ruff W, Broadwater M, Choi IH, et al.PD-1 на дендритных клетках препятствует врожденному иммунитету против бактериальной инфекции. Кровь. 2009. 113: 5811–8.

CAS Статья Google Scholar

32.

Хуанг Х, Венет Ф, Ван ИЛ, Лепапе А, Юань З, Чен И, Свон Р, Херуф Х, Моннерет Дж, Чанг С.С. и др. Экспрессия PD-1 макрофагами играет патологическую роль в изменении микробного клиренса и врожденной воспалительной реакции на сепсис. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2009; 106: 6303–8.

CAS Статья Google Scholar

33.

Wang L, Pino-Lagos K, de Vries VC, Guleria I, Sayegh MH, Noelle RJ. Передача сигналов лиганда запрограммированной смерти 1 регулирует генерацию адаптивных Foxp3 + CD4 + регуляторных Т-клеток. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2008; 105: 9331–6.

CAS Статья Google Scholar

34.

Brahmer JR, Tykodi SS, Chow LQ, Hwu WJ, Topalian SL, Hwu P, Drake CG, Camacho LH, Kauh J, Odunsi K, et al. Безопасность и активность антител анти-PD-L1 у пациентов с запущенным раком.N Engl J Med. 2012; 366: 2455–65.

CAS Статья Google Scholar

35.

Полторак М.П., ​​Шрамль БУ. Картирование судьбы дендритных клеток. Фронт Иммунол. 2015; 6: 199.

Артикул Google Scholar

36.

Типпаяват П., Пинсири М., Ринчай Д., Рияпа Д., Ромфрук А., Ган Й.Х., Хоутон Р.Л., Фелгнер П.Л., Титболл Р.В., Стивенс М.П. и др. Белки Burkholderia pseudomallei, представленные дендритными клетками моноцитов, стимулируют Т-клетки памяти человека in vitro.Заражение иммунной. 2011; 79: 305–13.

CAS Статья Google Scholar

Альтернативные варианты сплайсинга Модулируют доминантно-отрицательную функцию Helios при Т-клеточном лейкозе

Рис.1

Аберрантная экспрессия транскриптов Helios в клеточных линиях и первичных Т-клеточных или миелоидных лейкозных клетках.

( A ) ОТ-ПЦР для обнаружения экспрессии Helios в гемопоэтических клетках, полученных из лейкозных клеток Т человека (Jurkat, CCRF-CEM, MOLT-4), лейкозов В (Val, SUDHL4, HMy2.CIR) и миелоидных клеточных линий (HL-60, U937). Образцы линий негематопоэтических клонов клеток, полученных из рака молочной железы (MCF-7, MDA-MB 231), рака печени (HepG2, SK-Hep1), рака почек (HEK 293T) и мезенхимальных стволовых клеток (MSC), были включены для тест. Для идентификации альтернативных изоформ сплайсинга проводили ОТ-ПЦР с праймерами, сконструированными в экзонах 1 и 7 канонического полноразмерного транскрипта Helios. Клонировали амплифицированные кДНК и проводили анализ секвенирования. ( B ) Вестерн-блот-анализ Helios в линиях гематопоэтических и негематопоэтических клонов клеток, чтобы показать присутствие множества изоформ Helios.Молекулярные массы коротких вариантов Helios составляли 53 кДа (Helios V1), 10 кДа (Helios-V2) и 16 кДа (Helios-V3). ( C ) Повышенная экспрессия коротких вариантов Helios при гематологических злокачественных новообразованиях. Анализ мРНК Helios с помощью ОТ-ПЦР проводили в периферических мононуклеарных клетках крови людей с острым лейкозом, вызванным Т-клетками (n = 9) или миелоидным лейкозом (n = 3), а также в образцах от здоровых субъектов. ( D ) Схема вариантов сплайсинга Helios-1, Helios-2 и коротких Helios, идентифицированных в этом исследовании.Вариант 1 (V1), вариант 2 (V2) и вариант 3 (V3) Helios представляют собой новые альтернативные изоформы сплайсинга, идентифицированные в клонах лейкозных клеток. Коричневые прямоугольники в экзонах 3–5 представляют четыре N-концевых мотива «цинковые пальцы», используемые в связывании консенсусной последовательности ДНК. Два фиолетовых прямоугольника в экзоне 7 показывают мотивы цинковых пальцев на С-конце. Три новые изоформы Helios номинированы в соответствии с экзонами или нуклеотидами, удаленными из транскрипта Helios дикого типа. Канонический полноформатный Ikaros 1 включен для сравнения.

doi: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0163328.g001

Helios модулирует созревание субпопуляции нейронов CA1, необходимой для формирования пространственной памяти.

Основные моменты

•

Helios — фактор транскрипции, который специфически экспрессируется в кальбиндин-положительных пирамидных нейронах CA1 во время развития.

•

Взрослые мыши, лишенные Helios, демонстрируют специфическое снижение плотности шипов в кальбиндин-положительных пирамидных нейронах CA1, нарушение пространственного обучения и снижение долгосрочной потенциации CA3-CA1.

•

VSNL1 тонко регулируется Helios во время развития, и мы демонстрируем in vitro свидетельств, предполагающих, что закрытая экспрессия VSNL1 может быть ответственной за потерю позвоночника, наблюдаемую у мышей, лишенных Helios.

Abstract

В настоящее время молекулярные, электрофизиологические и структурные исследования выделяют несколько нейронных подтипов в гиппокампе. Однако точные механизмы развития, которые приводят к такому разнообразию, до сих пор неизвестны.Здесь мы показываем, что изменения в конкретной субпопуляции нейронов гиппокампа во время развития специфически влияют на гиппокампально-зависимую пространственную память. Мы наблюдали, что генетическая делеция фактора транскрипции Helios у мышей, которая специфически экспрессируется в развивающихся кальбиндин-позитивных пирамидных нейронах СА1 гиппокампа (CB-CA1-PN), вызывает у взрослых изменения, влияющие на пространственную память. У тех же мышей синаптическая пластичность CA3-CA1, плотность и морфология шипов у взрослых CB-CA1-PN были серьезно нарушены.Эксперименты по RNAseq в развивающемся гиппокампе выявили аберрантное увеличение экспрессии Visinin-подобного белка 1 (VSNL1) в гиппокампе, лишенном Helios. Это аберрантное увеличение уровней VSNL1 было локализовано в CB-CA1-PN. Нормализация уровней VSNL1 в CB-CA1-PN, лишенных Helios, спасла потерю позвоночника in vitro . Наше исследование идентифицирует новый и специфический молекулярный путь развития, вовлеченный в созревание и функцию подтипа пирамидных нейронов CA1.

Ключевые слова

Долгосрочная потенциация

VSNL1

Гиппокамп

Память

Развитие

Дендритные шипы

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

Просмотр аннотации

© 2019 Авторы.Опубликовано Elsevier Inc.

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

Дефицит Helios предрасполагает к дифференцировке CD4 + Foxp3- Т-клеток в регуляторные Т-клетки периферического происхождения

Ключевые точки

• Helios у всех мышей с дефицитом Helios клетки не развивают аутоиммунитет.

• Хотя Ag-специфические Helios ^{— / —} CD4 ⁺ Т-клетки обычно праймируются, они становятся толерантными.

• клетки pTreg генерируются в отсутствие Helios и опосредуют толерантное состояние.

Abstract

Фактор транскрипции Helios экспрессируется в большом проценте Foxp3 ⁺ регуляторных T (Treg) -клеток и необходим для поддержания их супрессивного фенотипа, как у мышей с селективным дефицитом Helios в Treg-клетках. спонтанно развиваются аутоиммунные заболевания. Однако мыши с дефицитом Helios во всех Т-клетках не проявляют аутоиммунитета, несмотря на дефект супрессорной функции их популяции Treg-клеток, что позволяет предположить, что Helios также функционирует в не-Treg-клетках.Хотя Helios экспрессируется в небольшом подмножестве CD4 ⁺ Foxp3 ^— и CD8 ⁺ Т-клеток и его экспрессия повышается при активации Т-клеток, его функция в не-Treg-клетках остается неизвестной. Чтобы изучить функцию Helios в Т-клетках CD4 ⁺ Foxp3 ^—, мы перенесли Helios-достаточные или дефицитные наивные Т-клетки CD4 ⁺ Foxp3 ^— TCR нормальным реципиентам и исследовали их способность реагировать на их родственный Ag.Неожиданно Helios-дефицитные Т-клетки CD4 ⁺ размножались и дифференцировались в эффекторы, продуцирующие цитокины Th2 или Th3, аналогично трансгенным CD4 ⁺ Т-клеткам дикого типа. Однако примированные Helios-дефицитные клетки не смогли размножаться при вторичной стимуляции Ag. Толерантное состояние Helios-дефицитных Т-клеток памяти не было присуще клеткам, но было обусловлено небольшой популяцией Helios-дефицитных наивных Т-клеток, которые дифференцировались в Ag-специфические периферические Treg-клетки, которые подавляли ответную реакцию в Ag-специфических манера.Эти данные демонстрируют, что Helios играет роль в определении судьбы Т-лимфоцитов CD4 ⁺ .

Введение

Регуляторные T (Treg) клетки являются критическими негативными регуляторами иммунной активации, играющими важную роль в поддержании самотолерантности, а также толерантности к комменсальной микробиоте. Treg-клетки, определяемые экспрессией главного регулятора Foxp3, могут возникать в тимусе в ответ на сильные сигналы комплексов собственный пептид-MHC, представленные эпителиальными клетками тимуса, но также способны дифференцироваться от наивных Т-клеток in vitro при активации в наличие TGF-β и IL-2 (1–3) и на периферии in vivo в различных условиях (4–7).Относительный состав и функциональное значение клеток Treg (tTreg) тимического происхождения и клеток Treg периферического происхождения (pTreg) в поддержании иммунной толерантности неизвестны и остаются темой текущих исследований.

Фактор транскрипции Helios, член семейства белков цинковых пальцев Ikaros, известен своей экспрессией в клетках Treg (~ 70% клеток Treg), и мы ранее предположили, что экспрессия Helios дифференцирует клетки tTreg от клеток pTreg ( 8). Более того, используя мышей с двойным репортером Foxp3 / Helios, мы недавно продемонстрировали, что Treg-клетки Helios ^— не являются предшественниками Treg-клеток Helios ⁺ , а представляют собой отдельную популяцию с отличным профилем экспрессии генов и репертуаром TCR (9).Мы также продемонстрировали, что Treg-клетки Helios ^— более нестабильны, легче теряют экспрессию Foxp3 в лимфопенических условиях и имеют пониженную супрессивную функцию против аутореактивных Т-клеточных ответов. Функциональная роль Helios в Treg-клетках Helios ⁺ заключается в придании стабильности Treg-клеткам в активированном эффекторном состоянии (10). У мышей с делецией Helios ( lkzf2 ), управляемой Foxp3-Cre, развивается медленно прогрессирующее аутоиммунное заболевание, характеризующееся спленомегалией, большим количеством В-клеточных фолликулов и пангипергаммаглобулинемией, что демонстрирует критическую роль фактора транскрипции в поддержании определенных функций подавления Treg-клеток. функции, особенно Т-фолликулярных регуляторных клеток (10, 11).Однако Kim et al. (11) пришли к выводу, что Treg-клетки были нестабильными из-за нарушения оси IL-2 – STAT5 у этих мышей. Мы также наблюдали дефект стабильности эффекторных клеток Treg у этих мышей, но пришли к выводу, что дефект был результатом снижения экспрессии Bcl-2. Нам не удалось показать каких-либо различий в пути STAT5 в Helios-дефицитных Treg-клетках (A.M. Thornton и E.M. Shevach, неопубликованные наблюдения), а механизм, с помощью которого Helios поддерживает стабильность в Treg-клетках, остается плохо определенным.

Напротив, мыши с управляемой CD4-Cre делецией lkzf2 лишены аутоиммунного фенотипа (ссылка 8 и AM Thornton и EM Shevach, неопубликованные наблюдения), что является неожиданным результатом, учитывая, что эти мыши не обладают достаточным количеством Helios Treg-клетки. Однако экспрессия Helios может быть обнаружена в ~ 5% Т-клеток CD4 ⁺ Foxp3 ^— у мышей C57BL / 6 дикого типа (WT). Эти наблюдения привели нас к гипотезе, что экспрессия Helios в CD4 ⁺ Foxp3 ^— Т-клетках может играть необходимую роль в инициации или поддержании аутоиммунной активации.Фактически, в нескольких исследованиях было высказано предположение, что экспрессия Helios связана с состоянием активации или силой доставляемого антигенного сигнала как для Treg-клеток, так и для всех клеток CD4 ⁺ (12, 13).

Основная цель этого исследования состояла в том, чтобы охарактеризовать функциональную роль Helios в активации и дифференцировке Т-клеток CD4 ⁺ Foxp3 ^— с использованием мышей lkzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre. В соответствии с предыдущим исследованием (14) мы обнаружили, что экспрессия Helios связана с начальным размножением и дифференцировкой после Ag-специфического прайминга in vivo, но не требуется для них.Неожиданно мы обнаружили, что Ag-специфические Helios-дефицитные Т-клетки CD4 ⁺ размножались и дифференцировались в эффекторы, продуцирующие цитокины, аналогично Т-клеткам WT CD4 ⁺ . Однако затем эти клетки становились толерантными и не реагировали на рестимуляцию in vivo. Состояние толерантности было внеклеточным и опосредовано небольшим количеством Ag-специфичных клеток pTreg. Подавляющая функция этих клеток pTreg была Ag-специфичной, поскольку они подавляли ответы только на свой родственный Ag, но не на неродственный Ag.Взятые вместе, наши эксперименты предполагают, что усиление экспрессии Helios во время активации наивных Т-клеток контролирует соотношение эффекторных клеток и клеток pTreg, что имеет критические последствия для устойчивости ответа клеток памяти. Эта повышенная склонность Helios-дефицитных CD4 ⁺ Т-клеток к развитию в клетки pTreg может привести к увеличению количества клеток pTreg, специфичных для аутоантигенов, у мышей lkzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre, которые защищают их от развития. аутоиммунного заболевания, даже в присутствии дефектных клеток tTreg с дефицитом Helios.

Материалы и методы

Животные

Мыши C57BL / 6 были приобретены у Charles River. Ранее нами было получено мышей Ikzf2 ^{fl / fl} (8). Этих мышей скрещивали с мышами CD4-Cre , полученными Национальным институтом аллергии и инфекционных заболеваний (NIAID) и содержавшимися по контракту с Taconic Biosciences (Germantown, NY), для получения мышей Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre. Затем мышей Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre скрещивали с мышами OT-II × Foxp3 ^GFP для получения мышей OT-II-Foxp3 ^GFP × Ikzf2 ^{fl / fl} CD4-Cre.Трансгенные мыши OT-II TCR и мыши-репортеры Foxp3 ^GFP были также получены NIAID и содержались по контракту с Taconic Biosciences. Конгенные мыши F1 SAP ^{— / —} были любезно предоставлены доктором П. Шварцбергом (NIAID, Национальные институты здравоохранения). Вирус лимфоцитарного хориоменингита (LCMV) GP _66–77 -специфические TCR-трансгенные мыши SMARTA (15) были первоначально получены из Института аллергии и иммунологии Ла-Холья, а затем скрещены в Национальных институтах здравоохранения с мышами RAG1 ^{— / —} которые поддерживались для NIAID по контракту с Taconic Biosciences.В нашей лаборатории мышей SMARTA × RAG ^{— / —} были скрещены с мышами B6.SJL (CD45.1). Мыши B6.SJL, RAG1 ^{— / —} , B6.SJL OT-II RAG1 ^{— / —} и C57BL / 6J × B6.SJL F1 были получены NIAID и содержались Taconic Biosciences. Во всех экспериментах использовались как самцы, так и самки мышей. Все протоколы для животных, использованные в этом исследовании, были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных NIAID.

Абс и реагенты

Использовали следующие окрашивающие реагенты.Аллофикоцианин eFluor780 против CD4 (RM4-5), Pacific Blue против CD4 (RM4-5), аллофикоцианин против Helios (22F6), FITC против Foxp3 (FJK-16s), e450 против Foxp3 (FJK-16s), Alexa Fluor 700 анти-B220 (RA3.6B2), аллофикоцианин анти-Fas (15A7), e450 анти-B220 (RA3.6B2), аллофикоцианин анти-PD-1 (J43), аллофикоцианин eFluor 780 Fixable Viability Dye и FITC антибактериальный -Helios (22F6) были приобретены в eBioscience (Сан-Диего, Калифорния). Аллофикоцианин анти-CD45RB (C636-16A), Alexa Fluor 700 анти-CD45.2 (104), PerCP Cy5.5 анти-CD45.1 (A20), BV510 анти-CD44 (IM7), BV421 анти-CXCR5 (L138D7), аллофикоцианин анти-CD45.1 (A20), BV650 анти-CD25 (PC61), BV421 анти-CD4 (RM4 -5), BV510 анти-IgD (11-26c.2a), PE анти-GL7 (GL7), e450 anti-B220 (RA3.6B2), аллофикоцианин анти-CD44 (IM7), FITC анти-CD8 (S3-6.7 ), Огненный анти-CD4 (RM4-5), BV421 анти-IFN-γ (XMG1.2), PE анти-IL-4 (11B11), PE анти-CD4 (RM4-5), PE-Cy7 анти-CD4 (RM4-5), PE-анти-CD69 (h2.2F3) и PE-Cy7-анти-CD279 (29F.1A12) были приобретены у BioLegend (Сан-Диего, Калифорния).Аллофикоцианин против CD62L (MEL14) и PE против CD44 (IM7) был приобретен у BD Biosciences (Сан-Хосе, Калифорния). PerCP eFluor 710, аннексин V и PE-Cy7 Ki-67 (SolA15) были приобретены у Invitrogen (Waltham, MA). Набор буфера для окрашивания eBioscience Foxp3 / транскрипционный фактор использовали для внутриклеточного окрашивания. Клетки культивировали в полной RPMI (cRPMI; RPMI 1640 с добавлением 10% инактивированной нагреванием FCS, 100 мкг / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина, 2 мМ l-глутамина, 10 мМ HEPES, 0,1 мМ заменимых аминокислот, 1 мМ пируват натрия и 50 мкМ 2-ME).Пептид LCMV GP66–77 был произведен на собственном предприятии (Отдел синтеза и анализа пептидов, Отдел исследовательских технологий, NIAID). Белок и пептид OVA (323–339) были получены от InvivoGen (Сан-Диего, Калифорния). SRBC были получены от Lampire Biological (Эверетт, Пенсильвания). Наборы для ELISA анти-OVA Ig были получены от Chondrex (Редмонд, Вашингтон).

Адаптивный перенос и иммунизация

Для экспериментов по адоптивному переносу 0,25–1 × 10 ⁶ FACS-отсортированные CD4 ⁺ CD44 ^lo CD45RB ^hi Foxp3-GFP ^— Т-клетки из Ikzf2 CD4-Cre × OT-II-Foxp3 ^GFP или контрольным мышам CD4-Cre × OT-II Foxp3 ^GFP вводили ретроорбитально в C57BL / 6J × B6.Получатели SJL F1 или получатели SAP ^{— / —} F1, как указано. На следующий день мышей-реципиентов иммунизировали подкожно. с 25 мкг OVA в CFA на каждый бок, или мышей иммунизировали i.p. со 100 мкг OVA в квасцах. В некоторых экспериментах, как указано, s.c. иммунизации на каждый фланг вводили снова на 10 день 25 мкг OVA в IFA или 25 мкг OVA и 10 мкг пептида LCMV (GP66–77) в IFA. В некоторых экспериментах мыши-реципиенты получали наивный CD45.1 ⁺ OT-II RAG1 ^{— / —} или CD45.1 ⁺ SMARTA RAG1 ^{— / —} клеток на 9 день перед второй иммунизацией на 11 день. Для иммунизации SRBC 1–2 × 10 ⁸ SRBC вводили внутрибрюшинно. у мышей Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre или Ikzf2 ^{fl / fl} , и селезенки собирали на 7 день после инъекции. Для анализа внутриклеточных цитокинов клетки дренирующих узлов стимулировали в течение 4 ч коктейлем для стимуляции клеток (eBioscience) перед фиксацией и окрашиванием. Для определения OVA-специфических IgG1 и IgE 100 мкл крови брали из сердечной пункции на 6 день после иммунизации квасцами OVA.

Устная переносимость

Наивный CD4 ⁺ Foxp3-GFP ^— CD44 ^lo CD45RB ^hi Т-клетки были отсортированы по FACS из Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre OT-II GFP3 GFP3 GFP3 CD4-Cre × OT-II Foxp3 ^GFP (1 × 10 ⁶ ) и вводили ретроорбитально реципиентам C57BL / 6J × B6.SJL F1. Мышам давали воду с добавлением 1,5% OVA в течение 7 дней, меняя воду каждые 2 дня.

Анализ стимуляции и выживаемости in vitro

Всего 1 × 10 ⁶ FACS-отсортированных CD4 ⁺ Foxp3-GFP ^— CD44 ^lo CD45RB ^hi Т-клеток из Ikzf2 fl / fl CD4-Cre OT-II Foxp3 ^GFP или CD4-Cre × OT-II Foxp3 ^GFP мышей переносили в C57BL / 6J × B6.Реципиентов SJL F1 и затем иммунизировали OVA / CFA таким же образом, как описано. Через четыре дня после иммунизации дренирующие лимфатические узлы (LN) собирали и объединяли из каждой группы переноса и FACS-сортировали для перенесенных клеток CD45.2 ⁺ OT-II. Клетки культивировали в течение 24 ч в cRPMI с дендритными клетками (DC), собранными от мышей C57BL / 6 в соотношении 1:10 в отсутствие или в присутствии 1 мкМ пептида OVA. Клетки собирали через 24 часа и анализировали с помощью проточной цитометрии на активацию и выживаемость клеток.

Индуцированная in vitro конверсия Treg-клеток

Всего 3 × 10 ⁵ FACS-отсортированных CD4 ⁺ CD25 ^— CD44 ^lo CD45RB ^hi T-клеток из Ikz2 ^{fl / fl-} × CD4 Cre или CD4-Cre контрольных мышей культивировали в cRPMI с 3 × 10 ⁴ DC и реагентами в следующих концентрациях, если не указано иное: 1 мкг / мл анти-CD3 (145-2C11), 2 мкг / мл анти- IL-2 (S4B6), 50 Ед / мл рекомбинантного человеческого IL-2 (rhIL-2) и 1 нг / мл TGF-β.Через 3 дня клетки окрашивали красителем eBioscience Fixable Viability Dye eFluor 780 и анализировали внутриклеточную экспрессию Foxp3 и Helios среди живых клеток с помощью проточной цитометрии.

Статистический анализ

Призма 7.0 (программное обеспечение GraphPad) использовалась для создания графиков и выполнения статистического анализа. Статистическая значимость между двумя группами определялась с помощью теста Стьюдента t . Статистическая значимость установлена ​​на уровне * p <0.05, ** p <0,01, *** p <0,001 и **** p <0,0001.

Результаты

Экспрессия Helios в Т-клетках

Фактор транскрипции Helios преимущественно экспрессируется в Treg-клетках Foxp3 ⁺ , но мы отметили, что небольшой процент клеток CD4 ⁺ Foxp3 ^— у нормальных, необработанных мышей также экспрессируют Helios (рис. 1А). Сообщалось, что Helios является общим маркером активации (12, 13), а в другом отчете сделан вывод, что Helios связан с дифференцировкой Th3 и T-фолликулярных помощников (T _FH ), но не требуется для нее (14).Анализ клеток CD4 ⁺ Foxp3 ^— показал, что клетки Helios ⁺ были преимущественно CD44 ^hi , маркером Т-клеток памяти (T _M ), тогда как только небольшой процент клеток Helios ^— клетки экспрессировали CD44 (фиг. 1А). Используя маркеры T _FH CXCR5 и PD-1, анализ показал, что клетки T _FH принадлежали популяции Helios ⁺ .

РИСУНОК 1.

Helios связан с маркером Т-клеток памяти (T _M ) и T _FH клеток.( A ) Спленоциты от 10-недельных мышей вводили в Т-клетки CD4 ⁺ и анализировали на экспрессию Foxp3 и Helios. Foxp3 ^— Helios ^— и Foxp3 ^— Клетки Helios ⁺ были проанализированы на предмет экспрессии маркеров CD44 (слева) и T _FH CXCR5 и PD-1 (справа). ( B ) Наивные CD4 ⁺ Т-клетки (GFP ^— CD44 ^lo CD45RB ^hi ) были выделены из мышей OT-II Foxp3 ^GFP и адоптивно перенесены в конгенных реципиентов F1, которые были иммунизированы следующим образом: день с указанными адъювантами.Свежесортированные клетки (слева) и клетки CD45.2 ⁺ , полученные от конгенных хозяев на 3 и 6 дни после иммунизации (в центре и справа), анализировали на экспрессию Foxp3 и Helios.

Чтобы формально проверить связь экспрессии и активации Helios, наивные Т-клетки (CD4 ⁺ GFP ^— CD44 ^lo ) (дополнительный рисунок 1A) были очищены от мышей OT-II Foxp3-GFP и были адоптивно перенесены в конгенных мышей, а затем иммунизировали. Иммунизация пептидом OVA в CFA или квасцах индуцировала экспрессию Helios в подмножестве перенесенных клеток, которые остались Foxp3 ^— (рис.1Б). Вместе эти результаты подтверждают, что Helios связан с памятью и эффекторными субпопуляциями T _FH и может временно индуцироваться в наивных Т-клетках при праймировании in vivo.

Ikzf2

^{fl / fl} × CD4-Cre Мыши лишены аутоиммунного фенотипа

Ранее мы сообщали, что у мышей со специфическим для Treg-клеток дефицитом Helios (Ikzf2 ^{fl / fl} × Foxp3-Cre) медленно развивается прогрессирующий активация иммунной системы и признаки системного аутоиммунитета (10). Однако ранее мы наблюдали, что когда мышей Ikzf2 ^{fl / fl} скрещивали с мышами CD4-Cre, таким образом, Helios был удален из Treg-клеток, CD4 ⁺ Foxp3 ^— Т-клеток и CD8 ⁺ клеток. , полученные мыши не обладали аутоиммунным фенотипом, наблюдаемым у мышей Ikzf2 ^{fl / fl} × Foxp3-Cre, даже в возрасте 1 года.Дальнейшая характеристика этих мышей не выявила различий в абсолютном количестве спленоцитов (данные не показаны) или процентном содержании Treg-клеток, наблюдаемых у мышей Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre (фиг. 2A). В то время как активированные CD4 ⁺ Foxp3 ^— и CD8 ⁺ Т-клетки могут быть идентифицированы уже в возрасте 2 месяцев у мышей Ikzf2 ^{fl / fl} × Foxp3-Cre (10), уровень CD44 ^hi Клетки CD62L ^lo оставались аналогичными контрольным мышам у мышей Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre (рис.2А). У непраймированных мышей Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre процент клеток T _FH был немного выше, но это увеличение не было статистически значимым. Мы действительно отметили небольшое статистически значимое увеличение общего количества В-клеток зародышевого центра (GC) у мышей Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre. Однако не было отмечено никаких различий в процентном содержании клеток T _FH (фиг. 2B) или абсолютном количестве клеток GC B (фиг. 2C) при иммунизации SRBC. Кроме того, гистологически лимфоцитарные инфильтраты не наблюдались во множественных нелимфоидных органах в возрасте до 1 года (данные не показаны).Взятые вместе, похоже, что отсутствие экспрессии Helios в CD4 ⁺ Foxp3 ^— T-клетках подавляет их потенциал индуцировать аутоиммунитет в присутствии дефектных Helios-дефицитных Treg-клеток у мышей Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre. и что активация Helios в CD4 ⁺ Foxp3 ^— Т-клетках необходима для устойчивой иммунной активации, необходимой для аутоиммунитета.

РИСУНОК 2.

Мыши с дефицитом Helios не обнаруживают серьезных дефектов. ( A ) Спленоциты мышей Ikzf2 ^{fl / fl} и Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre в возрасте 4–6 месяцев вводили в клетки CD4 ⁺ Т-клеток и анализировали на частоту Treg, T _M и T _FH , а также количество GC B-клеток (B220 ⁺ IgD ^lo Fas ⁺ GL7 ⁺ ).( B ) Мышей Ikzf2 ^{fl / fl} и Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre иммунизировали i.p. с SRBC. Селезенки собирали через 8 дней после иммунизации и анализировали на экспрессию маркеров T _FH среди CD4 ⁺ Foxp3 ^— Т-клеток ( C ) и на количество GC B-клеток.

Helios не требуется для Ag-специфической экспансии и дифференцировки CD4

⁺ Foxp3 ^— Т-клеток

Чтобы проанализировать роль дефицита Helios в активации наивных Т-клеток, мы использовали экспериментальную адоптивную систему переноса, в которой TCR трансгенные, Helios-дефицитные, наивные CD4 ⁺ Т-клетки выделяли и переносили в конгенного хозяина с последующей иммунизацией родственным Ag.Мы скрестили мышей Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre с мышами OT-II Foxp3-GFP для создания мышей OT-II Foxp3 ^GFP Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre, которые использовались в качестве доноров в нашем адаптивном переносе. система. Адоптивно перенесенные Helios-достаточные и Helios-дефицитные клетки OT-II относительно пролиферировали после иммунизации (фиг. 3A), и мы не увидели дефекта в способности Helios-дефицитных клеток OT-II активироваться, как измерено с помощью CD44, CD62L, и экспрессия CD69 (фиг. 3B). Способность Helios-дефицитных клеток OT-II дифференцироваться в функциональные клетки Th2 и Th3 определяли путем оценки продукции IFN-γ и IL-4 после иммунизации OVA и CFA или OVA и квасцами, соответственно.Опять же, мы не обнаружили дефектов в Helios-дефицитных клетках OT-II, поскольку они продуцировали уровни IFN-γ и IL-4, сравнимые с Helios-достаточными клетками (рис. 3C). После иммунизации Helios-дефицитные клетки OT-II также были способны дифференцироваться в эффекторный фенотип T _FH (фиг. 3B). Возможно, что Helios-дефицитные клетки OT-II способны экспрессировать клеточные маркеры T _FH , демонстрируя при этом функциональный дефект в обеспечении помощи В-клеткам. Чтобы проверить эту возможность, Helios-достаточные или Helios-дефицитные клетки OT-II были адоптивно перенесены в конгенных мышей SAP ^{— / —} , у которых эндогенные Т-клетки неспособны образовывать длительные межклеточные соединения. контакты, необходимые для оказания помощи В-клеткам (16).Адаптивный перенос этим мышам гарантирует, что вся дифференцировка В-клеток и рекомбинация с переключением класса является результатом перенесенных SAP-достаточных клеток OT-II. Опять же, мы не наблюдали дефекта в способности Helios-дефицитных Т-клеток дифференцироваться в клетки T _FH (рис. 3D), индуцировать дифференцировку GC B-клеток (рис. 3E) или оказывать помощь, ведущую к продукции переменные класса, специфичные для OVA Abs (рис. 3F). Таким образом, наши результаты подтверждают выводы Serre et al. (14) и предполагают, что отсутствие Helios не влияет на праймирование Т-клеток CD4 ⁺ или эффекторную дифференцировку.

РИСУНОК 3. На активацию

Т-клеток не влияет дефицит Helios. ( A ) Очищенные наивные CD4 ⁺ Т-клетки (GFP ^— CD44 ^lo CD45RB ^hi ) из Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre OT-II Foxp3 ^GFP или контрольные мыши были адоптированными мышами. переданы конгенным реципиентам F1. Мышей-реципиентов иммунизировали подкожно. на следующий день с OVA / CFA. Дренирующие LN собирали на 4, 8 и 13 дни после иммунизации, и общее количество CD45.2 ⁺ клеток ОТ-II и ( B ) частота эффекторных Т, CD69 ⁺ и Т _FH клеток среди клеток ОТ-II были проанализированы с помощью FACS. ( C ) Наивные клетки OT-II адоптивно переносили мышей-реципиентов, иммунизированных OVA в CFA (п / к) или OVA в квасцах (i.p.). Продукцию цитокинов оценивали по внутриклеточному окрашиванию после 4-часовой стимуляции PMA / иономицином. ( D ) Наивные клетки OT-II переносили конгенным мышам SAP ^{— / —} , которых иммунизировали OVA в квасцах i.п. на следующий день. Спленоциты анализировали на 8-й день после иммунизации на дифференцировку клеток T _FH перенесенных клеток OT-II и дифференцировку ( E ) GC B-клеток. ( F ) Сыворотку собирали у мышей SAP ^{— / —} на 8 день, и OVA-специфический IgG1 измеряли с помощью ELISA.

Helios необходим для размножения Т-клеток при вторичной стимуляции in vivo

Далее мы исследовали роль Helios в ответных реакциях на воспоминания. Наивные Т-клетки OT-II были адоптивно перенесены, как и раньше, и мышей-реципиентов иммунизировали OVA в CFA.На 10 день после иммунизации мышам проводили вторую иммунизацию OVA в IFA, и дренирующие LN собирали через 4 дня для анализа пролиферации перенесенных клеток OT-II. Общее количество Helios-дефицитных Т-клеток OT-II было заметно снижено по сравнению с Helios-достаточными контролями, что указывает на критическую роль Helios в повторной экспансии Т-клеток памяти CD4 ⁺ (фиг. 4A).

РИСУНОК 4.

Helios-дефицитные Т-клетки не могут быть реактивированы. ( A ) Наивные CD4 ⁺ Т-клетки были очищены от Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre OT-II Foxp3 ^GFP или контрольных мышей и адоптивно перенесены в конгенных реципиентов F1.Мышей-реципиентов иммунизировали подкожно. на следующий день с OVA / CFA и усиленной подкожной инъекцией с OVA / IFA на 10-й день после иммунизации. Дренирующие LN собирали на 10 день (перед повторной имитацией) и на 14 и 17 дни, и общее количество клеток CD45.2 ⁺ OT-II анализировали с помощью FACS. ( B ) Схема эксперимента рестимуляции ОТ-II in vitro. Наивные клетки OT-II адоптивно переносили конгенным мышам F1, которых иммунизировали, как прежде. На 4-й день дренирующие LN объединяли и клетки CD45.2 ⁺ OT-II выделяли с помощью FACS и культивировали с DC с или без OVAp (323–339).( C ) Через 24 часа культуру клеток OT-II собирали и анализировали на активацию клеток и гибель клеток с помощью FACS.

Одним из объяснений неспособности Helios-дефицитных клеток ОТ-II к росту является то, что они были более восприимчивы к вызванной активацией гибели клеток при вторичном заражении. Чтобы исследовать ответы дефицитных клеток после первичного заражения, наивные OT-II CD4 ⁺ Т-клетки были адоптивно перенесены, как и раньше, и мышей иммунизировали OVA в CFA.На 4-й день после иммунизации дренирующие LN собирали и перенесенные клетки OT-II выделяли, а затем повторно стимулировали in vitro, как показано (фиг. 4B). In vitro Helios-дефицитные Т-клетки были активированы аналогично WT-клеткам, что было измерено по экспрессии CD44, и не показало увеличенной доли апоптотических или нежизнеспособных клеток, что было измерено путем окрашивания аннексином V и красителем жизнеспособности (фиг. 4C). Подобные данные наблюдались в присутствии или в отсутствие IL-2. Анализ рестимуляции in vitro также проводили на 7-й день после иммунизации, при этом никаких различий не отмечалось (данные не показаны).Таким образом, примированные клетки, в которых отсутствует Helios, по-видимому, нормально активируются и не проявляют усиленного апоптоза.

Мы также проанализировали Helios-дефицитные Т-клетки OT-II на предмет различных поверхностных маркеров на 10-й день после иммунизации, а также на 4-й день после вакцинации. Нам не удалось найти различий в экспрессии Fas, OX-40, CD30, CD27 или CD120b. Кроме того, мы не обнаружили различий в экспрессии CD73 и FR4, которые, как сообщается, определяют анергические CD4 ⁺ Т-клетки (17) (данные не показаны).Наконец, мы не обнаружили различий в экспрессии внутриклеточного Bcl-2 или активной каспазы-3, двух регуляторов апоптоза (данные не показаны). Таким образом, отсутствие пролиферации в Helios-дефицитных Т-клетках ОТ-II при рестимуляции не было присуще клеткам.

Небольшой процент Helios-дефицитных Т-клеток превращается в клетки pTreg после праймирования in vivo

Поскольку реакция примированных Helios-дефицитных клеток OT-II была нормальной при рестимуляции in vitro, оставалась возможность, что факторы в локальной среде в дренирующие LN предотвращали экспансию примированных Helios-дефицитных клеток OT-II.Поскольку клетки pTreg не экспрессируют Helios у нормальных мышей, одна из возможностей заключается в том, что усиленная генерация клеток pTreg из Helios-дефицитных Ag-специфических Т-клеток может объяснить дефект пролиферации, наблюдаемый после вторичной стимуляции. Чтобы проверить эту идею, мы оценили дифференцировку наивных Helios-дефицитных клеток OT-II в клетки pTreg после адоптивного переноса и иммунизации OVA в CFA. Неожиданно мы наблюдали повышающую регуляцию Foxp3-GFP небольшой, но постоянной фракцией Helios-дефицитных клеток OT-II на 11 день после иммунизации, но не клетками WT OT-II (рис.5А). Динамика адоптивного переноса клеток OT-II с последующей иммунизацией OVA / CFA показала, что активация Foxp3 может наблюдаться среди Helios-дефицитных клеток OT-II уже на 4-й день после иммунизации OVA / CFA и достигла пика частоты на 10-й день. , тогда как Helios-достаточные OT-II клетки фактически не проявляли повышающей регуляции Foxp3 в любой момент времени (Fig. 5B). Мы также исследовали способность Helios-дефицитных CD4 ⁺ Т-клеток дифференцироваться в клетки pTreg на модели оральной толерантности и после иммунизации OVA / IFA, двух моделей, которые, как известно, индуцируют клетки pTreg (18–20).В модели оральной толерантности наивные Т-клетки OT-II были адоптивно перенесены, и мышам давали OVA с питьевой водой. На 7 день после переноса перенесенные клетки анализировали на преобразование в клетки Foxp3 ⁺ pTreg. Как в мезентериальном лимфатическом узле, так и в пейеровских бляшках небольшой процент клеток WT превращался в клетки pTreg, как и ожидалось (рис. 5C). Более того, более высокий процент Helios-дефицитных клеток превращается в клетки pTreg. Для модели IFA наивные OT-II CD4 ⁺ Т-клетки были адоптивно перенесены, и мышей иммунизировали OVA / IFA.Как и в случае OVA / CFA, клетки pTreg были получены из клеток с дефицитом Helios, но не из клеток WT (фиг. 5D). Следовательно, Helios, по-видимому, контролирует определение судьбы Т-клеток CD4 ⁺ , и присутствие клеток pTreg, генерируемых из Helios-дефицитных клеток OT-II, может объяснять отсутствие пролиферации, наблюдаемой после вторичной стимуляции.

РИСУНОК 5.

Helios-дефицитные клетки OT-II дифференцируются в клетки pTreg. ( A ) Наивные CD4 ⁺ Т-клетки из Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre OT-II Foxp3 ^GFP или контрольных мышей адоптивно переносили конгенным реципиентам F1.Мышей-реципиентов иммунизировали подкожно. на следующий день с OVA / CFA. Дренирующие LN собирали на 11 день или ( B ) в указанные дни после иммунизации, стробировали по CD45.2 ⁺ клеткам OT-II и анализировали на экспрессию Foxp3. ( C ) Наивные Т-клетки OT-II адаптивно переносили конгенным реципиентам F1. Мышам-реципиентам давали OVA в питьевой воде ad libitum в течение 7 дней. Экспрессию Foxp3 в клетках CD45.2 ⁺ OT-II измеряли в брыжеечных лимфатических узлах и пейеровских пятнах.( D ) Наивные клетки OT-II адоптивно переносили, как в (A), и мышей-реципиентов иммунизировали подкожно. на следующий день с OVA / IFA. Экспрессия Foxp3 в клетках CD45.2 ⁺ OT-II была проанализирована из дренирующих LN на 7 день.

Повышенная конверсия клеток pTreg не является следствием дифференциальной чувствительности к стимуляции TGF-β, IL-2 или TCR in vitro

Дифференциация наивных T-клеток в Treg-клетки требует активации в присутствии TGF-β и IL-2 (1, 3). Чтобы проверить, вызвано ли повышенное превращение Helios-дефицитных Т-клеток OT-II в Treg-клетки in vivo из-за повышенной чувствительности к передаче сигналов TGF-β, мы провели серию анализов дифференцировки индуцированных Treg (iTreg) клеток in vitro с титрованными концентрациями TGF-β.Мы сравнили способность WT CD4 ⁺ Foxp3 ^— и Helios-дефицитных CD4 ⁺ Foxp3 ^— наивных Т-клеток дифференцироваться в Foxp3 ⁺ Treg-клетки in vitro после стимуляции с помощью DC и растворимых анти-CD3 в наличие ИЛ-2 в течение 4 дней (фиг. 6А). Хотя экспрессия Foxp3 увеличивалась с увеличением концентрации TGF-β, наивные поликлональные CD4 Т-клетки, выделенные из мышей Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre, не проявляли повышенной способности дифференцироваться в клетки iTreg при любой концентрации TGF-β (рис. .6А).

РИСУНОК 6.

Helios-дефицитные CD4 Т-клетки не обладают дифференциальной чувствительностью к TGF-β, IL-2 или стимулу TCR. Очищенные наивные CD4 ⁺ Т-клетки (CD25 ^— CD44 ^lo CD45RB ^hi ) культивировали с DC и либо ( A ) IL-2 плюс указанные концентрации TGF-β, ( B ) нейтрализует антимышиный IL-2 (S4B6), TGF-β, и указанные концентрации rhIL-2 или ( C ) нейтрализуют антимышиный IL-2 (S4B6), rhIL-2, TGF-β и указаны концентрации растворимого анти-CD3.Экспрессию Foxp3 анализировали среди жизнеспособных клеток на 3-й день.

Мы дополнительно протестировали способность Helios-дефицитных наивных Т-клеток дифференцироваться в клетки iTreg в условиях с ограниченной доступностью IL-2 или ограниченной стимуляцией TCR путем титрования концентрации IL-2. или анти-CD3 соответственно. Опять же, мы не смогли найти ни одной концентрации IL-2 (фиг. 6B) или анти-CD3 (фиг. 6C), для которой Helios-дефицитные Т-клетки дифференцировались в клетки iTreg с большей частотой по сравнению с их аналогами WT.Вместе эти результаты предполагают, что наблюдаемое увеличение конверсии клеток pTreg клетками OT-II с дефицитом Helios не связано с повышенной чувствительностью к сигналам TGF-β, IL-2 или TCR. Однако остается возможным, что один из этих факторов регулирует дифференцировку клеток pTreg in vivo, и мы не можем имитировать ситуацию in vivo in vitro или что другие неизвестные переменные могут влиять на превращение Helios-дефицитных клеток в клетки pTreg in vivo.

Ag-специфические клетки pTreg, полученные in vivo из Helios-дефицитных клеток, демонстрируют Ag-специфическую супрессию

Чтобы проверить, является ли присутствие небольшого процента Ag-специфичных pTreg-клеток ответственным за отсутствие пролиферации праймированных Helios-дефицитных Клетки OT-II после вторичной стимуляции Ag, мы выполнили последовательный перенос конгенно-меченых клеток OT-II, как показано на рис.7А. Подводя итог, CD45.2 Helios-достаточные или Helios-дефицитные клетки OT-II были адоптивно перенесены в хозяев F1 (CD45.1 × CD45.2), и мышей-реципиентов иммунизировали OVA / CFA на следующий день. На 9-й день после иммунизации были перенесены свежеотсортированные клетки WT CD45.1 OT-II с последующей иммунизацией OVA / IFA на 10-й день. На 14-й день исследовали дренирующие LN. Стратегия стробирования показана на дополнительном рисунке 1B. Как предварительно примированный WT CD45.2, так и только что перенесенный WT CD45.1 клетки OT-II размножались при иммунизации (фиг. 7B). Однако как ранее примированные Helios-дефицитные CD45.2, так и свежеперенесенные клетки WT CD45.1 OT-II не смогли размножаться при вторичной иммунизации. Важно отметить, что супрессия была специфичной для Ag, поскольку не было дефекта в способности недавно перенесенных Т-клеток SMARTA (трансгенных клеток TCR, специфичных для GP _{66 –77} LCMV) на 9 день пролиферировать в ответ на иммунизацию GP _{. 66–77} в IFA (рис. 7C, 7D).Вместе эти результаты демонстрируют, что OVA-специфические клетки pTreg, которые возникают во время первичного ответа на Ag, способны подавлять опосредованную TCR стимуляцию и рестимуляцию.

РИСУНОК 7.

Генерация клеток pTreg в Helios-дефицитных клетках подавляет рестимуляцию специфическим для Ag образом. ( A ) Экспериментальная схема последовательной передачи OT-II. Наивные CD45.2 ⁺ клетки OT-II были адоптивно перенесены в конгенных мышей F1 (CD45.1 × CD45.2), которых иммунизировали.c. на следующий день с OVA / CFA. На 9-й день клетки CD45.1 ⁺ OT-II были перенесены в мышей-реципиентов с последующей иммунизацией OVA / IFA на 10-й день. ( B ) Дренирующие LN были собраны на 14-й день и пролиферация CD45.2. ⁺ и CD45.1 ⁺ клетки OT-II анализировали с помощью FACS. ( C ) Экспериментальная схема последовательной передачи OT-II / SMARTA. Как и в (C), клетки CD45.1 ⁺ SMARTA переносили на 9-й день, а затем подкожно. иммунизация OVA плюс GP66–77 в IFA.( D ) Дренирующие LN собирали на 14 день и анализировали пролиферацию клеток CD45.2 ⁺ OT-II и CD45.1 ⁺ клеток SMARTA.

Обсуждение

Фактор транскрипции Helios экспрессируется преимущественно в Treg-клетках Foxp3 ⁺ , но он также экспрессируется в небольшом проценте Т-клеток CD4 ⁺ Foxp3 ^— in vivo, которые обладают фенотипом памяти и временно индуцируется во время прайминга Ag наивных клеток. Наше наблюдение, что lkzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre не смогло развить аутоиммунный фенотип, тогда как у мышей lkzf2 ^{fl / fl} × Foxp3-Cre развился системный аутоиммунитет, убедительно свидетельствует о том, что экспрессия Helios в CD4 ⁺ Foxp3 ^— Т-клетки играют решающую роль в функции эффекторных Т-клеток.Чтобы понять роль Helios во время активации CD4 ⁺ Foxp3 ^— Т-клеток, мы использовали модельную систему, в которой Helios был дефицитным по Ag-специфическим CD4 ⁺ Т-клеткам. Парадоксально, но мы обнаружили, что Helios не требуется для размножения эффекторных клеток или дифференцировки до Th2 / Th3 фенотипов, но что примированные, Helios-дефицитные, Ag-специфические клетки являются толерантными и неспособны размножаться при рестимуляции. Толерантность не была присуща эффекторным Т-клеткам, но была вторичной по отношению к предрасположенности Helios-дефицитных Т-клеток к дифференцировке в клетки pTreg после примирования.Таким образом, недостаток Helios влияет на судьбу Т-клеток во время их первоначального ответа на стимуляцию Ag. В его отсутствие CD4 ⁺ Foxp3 ^— Т-клетки могут быть направлены в линию клеток pTreg и подавлять Ag-специфические эффекторные клетки той же специфичности.

Лишь небольшой процент (3-5%) перенесенных CD4 ⁺ Foxp3 ^— Т-клеток конвертировался в клетки pTreg. Тем не менее, эти Ag-специфические клетки pTreg были мощными супрессорами роста как примированных клеток OT-II, так и наивных клеток OT-II.Таким образом, соотношение клеток pTreg к CD4 ⁺ Foxp3 ^— Т-клеткам (∼1: 20) оказывается достаточным для почти полного подавления экспансии эффекторных клеток. Анализы супрессии in vitro с использованием Ag-специфических tTreg-клеток показали, что полное подавление пролиферации также может наблюдаться при соотношении Treg: T-эффекторных клеток до 1:20 (21). Следует также отметить, что низкий процент клеток pTreg генерируется из поликлональных CD4 ⁺ Foxp3 ^— Т-клеток в модели переноса воспалительного заболевания кишечника (ВЗК), однако эти клетки pTreg, по-видимому, необходимы для дополнения tTreg. клеточно-опосредованное подавление в IBD и других моделях (22, 23).Кроме того, Korn et al. (19) показали, что у мышей, иммунизированных MOG-специфическим пептидом в отсутствие IL-6, либо посредством иммунизации в присутствии IFA, либо с использованием мышей с дефицитом gp130, развивается небольшой процент Ag-специфичных клеток pTreg ( 2%), которые защищают мышей от экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (EAE). Наконец, предрасположенность Ag-специфичных Helios-дефицитных CD4 ⁺ Foxp3 ^— Т-клеток к дифференцировке в клетки pTreg также наблюдалась в модели оральной толерантности in vivo, которая широко используется для изучения образования клеток pTreg (7, 24). .Хотя клетки pTreg могут быть сгенерированы из Helios-достаточных CD4 ⁺ Foxp3 ^— Т-клеток в соответствии с этим протоколом, более высокий процент клеток pTreg был получен из Helios-дефицитных CD4 ⁺ Foxp3 ^— Т-клеток.

Было широко распространено мнение, что Treg-клетки, активируемые одним Ag, могут подавлять ответы на неродственные Ag в той же среде (так называемое «подавление стороннего наблюдателя»). Эта концепция в значительной степени была получена из тестов подавления in vitro. Недавние эксперименты нашей группы in vivo поставили под сомнение эту концепцию и продемонстрировали, что как Ag-специфические клетки iTreg, так и клетки tTreg, активируемые двойными импульсами DC с двумя разными Ag, могут подавлять только Ag-специфические наивные CD4 ⁺ Foxp3 ^— T клетки, специфичные для своего родственного Ag, но не неродственного Ag (25).Клетки pTreg, полученные из Ag-специфичных Helios-дефицитных Т-клеток CD4 ⁺ Foxp3 ^—, по-видимому, функционируют аналогичным образом, поскольку клетки pTreg, специфичные для OVA, не могут подавлять ответ Т-клеток SMARTA, даже если OVA -специфические клетки pTreg стимулировали в присутствии обоих Ag. Мы предположили, что механизм подавления, используемый клетками iTreg и tTreg in vivo, включает опосредованное Treg истощение комплексов пептид-MHC класса II с поверхности DC (25), но мы еще не исследовали механизмы, используемые клетками pTreg. генерируется из Helios-дефицитных Т-клеток.

Клеточные и молекулярные факторы, которые контролируют образование клеток pTreg in vivo во время стимуляции Ag, остаются плохо изученными. В частности, неясно, почему почти во всех моделях только небольшой процент Т-клеток Foxp3 ^– развивается в клетки Foxp3 ⁺ pTreg. Мы попытались определить, обладают ли Helios-дефицитные CD4 ⁺ T-клетки повышенной реактивностью на TGF-β, IL-2 или передачу сигналов TCR in vitro, но мы не смогли различить разницу между WT и Helios-дефицитными клетками в больших дозах. ответные исследования.

Хотя было высказано предположение, что отсутствие воспалительных сигналов в некоторых моделях способствует индукции клеток pTreg (19, 20), в нашей системе переноса выбор адъюванта не влиял на генерацию клеток pTreg из Helios-дефицитных клеток.

Функция Helios в Treg-клетках остается спорной, и доступные исследования не дают понимания потенциальной роли Helios в ингибировании образования pTreg-клеток из CD4 ⁺ Foxp3 ^— T-клеток.Исследования Kim et al. (11) предположили, что Helios необходим для поддержания стабильности Treg-клеток во время воспаления, воздействуя на путь STAT5. Напротив, мы не смогли идентифицировать дефекты передачи сигналов STAT5 в Helios-дефицитных Treg-клетках и предположили, что экспрессия Helios необходима для выживания активированных Treg-клеток, способствуя экспрессии Bcl-2 (10). Baine et al. (26) предположили, что Helios регулирует транскрипцию IL-2 в Treg-клетках и что принудительная экспрессия Helios в CD4 ⁺ Foxp3 ^— приводит к потере их способности продуцировать IL-2.Остается возможным, что временная экспрессия Helios во время активации регулирует продукцию IL-2, а делеция Helios приводит к локализованной продукции высоких концентраций IL-2, что способствует индукции клеток pTreg. Однако мы не наблюдали повышенного производства ИЛ-2 или усиленной пролиферации Helios-дефицитных CD4 ⁺ Foxp3 ^— Т-клеток, по крайней мере, in vitro, и Helios-дефицитные Ag-специфические клетки не демонстрируют усиленное размножение in vitro, когда грунтованный.

Один важный вопрос, поднятый нашим исследованием, заключается в том, объясняет ли индукция клеток pTreg к аутоантигенам во время развития фенотип (или его отсутствие) у мышей lkzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre.Процентное и абсолютное количество Treg-клеток у этих мышей нормальное, но в настоящее время у нас нет маркеров, кроме Helios (27), которые, по нашему мнению, могут окончательно отличить pTreg-клетки от tTreg-клеток, чтобы определить, действительно ли lkzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre мышь обладает большей долей клеток pTreg. Мы перенесли наивные CD4 ⁺ Т-клетки от мышей Ikzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre мышам с дефицитом RAG в надежде, что они будут генерировать достаточное количество и компетентных клеток pTreg для защиты от IBD.Однако не было различий в течении или тяжести заболевания по сравнению с Helios-достаточными наивными клетками (данные не показаны). Haribhai et al. (22) продемонстрировали, однако, что одних только клеток pTreg недостаточно для подавления ВЗК; таким образом, увеличенного количества клеток pTreg, генерируемых из Helios-дефицитных Т-клеток CD4 ⁺ , будет недостаточно для подавления ВЗК. У мышей lkzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre также развивается EAE с течением заболевания, сравнимым с мышами WT, аналогично аналогичной активации и разрастанию, наблюдаемой при адоптивном переносе клеток OT-II (данные не показаны).Однако мы еще не исследовали, развили ли мыши lkzf2 ^{fl / fl} × CD4-Cre с EAE толерантность, которая проявлялась бы при повторном тестировании, поскольку у нас нет инструментов, чтобы окончательно определить, что состояние толерантности опосредуется Ag -специфические клетки pTreg.

Наконец, недавно было продемонстрировано, что Helios экспрессируется во время развития волосковых клеток в улитке и что Helios необходим для функционального созревания окончательно дифференцированных наружных волосковых клеток (28).В сочетании с необходимостью Helios для поддержания эффекторной функции Treg-клеток и необходимостью Helios для предотвращения дифференцировки pTreg-клеток в клетках CD4 ⁺ Foxp3 ^— , эти исследования предполагают, что Helios играет фундаментальную роль в определении CD4 ⁺ Судьба Т-клеток.

Раскрытие информации

У авторов нет финансового конфликта интересов.

Благодарности

Мы благодарим К. Венга за сортировку методом проточной цитометрии.

Сноски

• Эта работа была поддержана Программой очных исследований Национального института аллергии и инфекционных заболеваний Национальных институтов здравоохранения.

• Онлайн-версия этой статьи содержит дополнительные материалы.

• Сокращения, использованные в этой статье:

  cRPMI

  полный RPMI

  DC

  дендритные клетки

  EAE

  экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит

  904 23 GC 904 24 воспалительный центр 904 24 GC 904 iTreg

  индуцированный Treg

  LCMV

  вирус лимфоцитарного хориоменингита

  LN

  лимфатический узел

  NIAID

  Национальный институт аллергии и инфекционных фоллических заболеваний

  904 Treg4 904 9024 Tregular 904 Treg Treg4 904 Treg 904 helper

  T _M

  маркер Т-клеток памяти

  Treg

  регуляторный T

  tTreg

  Treg

  WT

  дикого типа.

• Получено 2 апреля 2019 г.
• Принято 3 мая 2019 г.

ION Audio Helios — Часто задаваемые вопросы

Helios — идеальный способ создать особое настроение с помощью красивого освещения и создания футуристических картин на стенах, а также насладиться ярким стереозвуком. Helios ™ имеет стереодинамики с автономным питанием, встроенные в привлекательный куполообразный корпус, который можно брать куда угодно, диаметром менее 7 дюймов и глубиной всего 1,5 дюйма в самой высокой точке.В этой статье рассматривается ряд часто задаваемых вопросов о ION Audio Helios.

Часто задаваемые вопросы

Что в коробке?

В комплект поставки Helios входят следующие элементы:

• Гелиос
• Кабель Micro-USB
• Стереокабель Aux 1/8 дюйма (3,5 мм)
• Краткое руководство

Какие размеры? Сколько весит Гелиос?

Гелиосу 6 лет.93 дюйма x 6,93 дюйма x 1,69 дюйма и весит 1,04 фунта.

Работает ли Helios от аккумулятора? На сколько хватает заряда батареи?

Да! Helios может работать до 7,5 часов при работе только светодиодов без воспроизведения звука или до 5,5 часов при включенных светодиодах и воспроизведении звука на 50% громкости. Имейте в виду, что более высокий уровень громкости значительно сократит время автономной работы динамика Helios.

Сколько времени нужно на зарядку аккумулятора?

Требуется примерно 5.5, чтобы полностью зарядить Helios. Светодиод будет постоянно гореть красным, когда батарея заряжается, и гаснет, когда батарея полностью заряжена или адаптер не подключен.

Можно ли заменить батарею пользователем?

Батарея не подлежит замене пользователем. Если аккумулятор не заряжается или не держит заряд, обратитесь в службу технической поддержки ION Audio для получения дополнительной помощи.

Сколько динамиков у Гелиоса?

У Гелиоса 2 1.5-дюймовые вуферы.

Может ли Helios совершать телефонные звонки и отвечать на них?

Совершенно верно! Нажмите кнопку «Ответить на звонок» (слева от качельки регулировки громкости), чтобы ответить на звонок. Чтобы прервать телефонный звонок, нажмите и удерживайте кнопку.

Будет ли Helios транслировать музыку с моего телевизора или компьютера?

Можно, но потоковая передача по Bluetooth с компьютера или телевизора часто не так надежна, как потоковая передача со смартфона или планшета, поскольку обычно используется для устройств низкого уровня, таких как клавиатуры и мыши.Вы можете заметить трудности с сопряжением, пропадание звука или уменьшение диапазона при потоковой передаче с компьютера или телевизора. Настоятельно рекомендуется вести трансляцию со смартфона или планшета.

Как подключить устройство Bluetooth к Helios?

1. Нажмите и удерживайте кнопку Power в течение 2 секунд, чтобы включить Helios.
2. Откройте настройки Bluetooth на нашем музыкальном устройстве (смартфоне, планшете и т. Д.)
3. Подключиться к Гелиосу.
   Примечание: Если вашему устройству требуется код доступа или PIN-код, введите ноль (« 0 ») четыре раза.
4. Воспроизводите музыку и регулируйте громкость с помощью регуляторов — / +.
5. Чтобы разорвать соединение Bluetooth, удерживайте кнопку Воспроизведение / Пауза в течение 2 секунд.

Каков радиус действия Bluetooth-соединения?

Радиус действия Bluetooth-соединения составляет приблизительно 30,5 метров (100 футов) без каких-либо препятствий.

Звук выходит искаженный. Что происходит и как это исправить?

Если звук из вашего Helios выходит искаженным, попробуйте уменьшить громкость источника звука.Если после выполнения описанных выше действий по-прежнему возникают проблемы со звуком, вы можете обратиться в службу технической поддержки ION Audio.

Мой Helios случайным образом выключается. Что происходит?

Helios выключится через 15 минут, если звук не воспроизводится и светодиоды не горят.

Дополнительная техническая поддержка

Независимо от того, являетесь ли вы покупателем или дилером, если у вас уже есть продукт ION Audio или у вас просто есть вопросы перед продажей, команда технической поддержки ION Audio всегда готова помочь!

Для каждого продукта есть отдельная страница поддержки на веб-сайте, где вы можете найти руководства, спецификации, обновления программного обеспечения, драйверы и руководства по устранению неполадок: www.ionaudio.com

Перейдите по ссылке ниже, чтобы подключиться к любому из следующих вариантов поддержки: поддержка онлайн-сообщества, поддержка по телефону, поддержка по электронной почте.
https://www.ionaudio.com/support/

Acer Predator Helios 300 NH.Q7YAA.001 15,6-дюймовый ноутбук, 2,6 ГГц Intel Co

перейти к содержанию Предпочтительный

• Быстрый заказ
• Мой аккаунт
• Корзина

Français Предпочтительный Быстрый заказ Войти Корзина

1. Дом
2. > Компьютеры
3. > Ноутбуки
4. > Ноутбуки Windows
5. > Acer Predator Helios 300 NH.

   No related posts.