Гелиос 001: Усилительно-коммутационное устройство »Гелиос-001-стерео».

Содержание

Ноутбук Predator Helios 300 Ph415-53-760A (NH.Q7YER.001)

Характеристики

Предустановленное ПО

Операционная система

Процессор

Производитель процессора

Серия процессора

Процессор

10750H

Базовая частота

2. 60 ГГц

Максимальная частота

5.00 ГГц

Количество ядер

6

Кэш-память

12 Мб

Дисплей

Поверхность

матовая

Частота матрицы

144 Гц

Оперативная память

Оперативная память

Тип оперативной памяти

DDR4

Максимальный объем памяти

32 Гб

Количество слотов

2

Видеокарта

Производитель видеокарты

Модель видеокарты

Тип видеокарты

Дискретная

Объем видеопамяти

6 Гб

Тип видеопамяти

GDDR6

Накопитель

Тип накопителя

SSD

Оптический привод

Тип привода

Отсутствует

Встроенное оборудование

Стандарт Wi-Fi

802. 11ax

Версия Bluetooth

5.0

Web камера

Есть

Кардридер

Нет

Микрофон

Есть

Безопасность

Сканер отпечатков пальцев

Нет

Порты и разъемы

Разъем для наушников/микрофона

1

Клавиатура

Цифровая панель

Есть

Подсветка

Есть

Питание

Блок питания

230 Вт

Корпус

Материал

Металл/Пластик

Габариты и вес

Стоматология: цены детской стоматологии в г.

Саратов
Код услуги код Наименование услуги Цена, руб
ПРИЕМ ВРАЧА - СТОМАТОЛОГА , КОНСУЛЬТАЦИЯ
В01.065.001 011 Прием (осмотр, консультация) врача стоматолога-терапевта, составление плана-лечения 400
В01.066.001 012 Прием (осмотр, консультация) врача стоматолога-ортопеда, составление плана-лечения 400
В01.067.001 013 Прием (осмотр,консультация) врача стоматолога-хирурга, составление плана-лечения 400
В01.067.001.001 014 Прием (осмотр, консультация) врача стоматолога-хирурга-имплантолога, составление плана-лечения 700
В01.063.001 015 Прием (осмотр, консультация) врача стоматолога-ортодонта, составление плана-лечения 450
В. 01.065.001.001 016 Прием (осмотр, консультация) врача стоматолога-терапевта, парадонтолога, составление плана-лечения 700
В.01.065.008 017 Прием, осмотр профилактический 0
В.01.066.002 018 Прием, врача стоматолога-терапевта (повторный) 150
ОБЩИЕ ПРОЦЕДУРЫ
А16.07.002.001 020 Наложение коффердама Rubber Dam (Раббер Дам) 500
А16.07.002.002 021 Наложение коффердама Optragate (Оптрагейт) 300
А16.07.002.003 022 Наложение жидкого коффердама 350
А16.07.002.004 023 Постановка декоративных страз(скайс) 1500
ЭСТЕТИЧЕСКАЯ СТОМАТОЛОГИЯ
А16. 07.050.001 030 Профессиональное отбеливание по системе Opalesence Xtra Boost (одна челюсть в линии улыбки) 6000
А16.07.050.002 031 Профессиональное эндодонтическое отбеливание по системе Opalesence Xtra Boost (1 зуб) 750
А16.07.050.003 032 Профессиональное отбеливание зубов аппаратом ZOOM-4 (две челюсти в линии улыбки) 22000
А16.07.050.004 033 Набор для домашнего отбеливания (после клинического отбеливания) 4800
А16.07.050.005 034 Изготовление индивидуальной каппы на одну челюсть для реминирализирующей терапии 1500
или отбеливания с учетом слепков
А16.07.050.006 035 Профессиональное отбеливание по системе Amazing White Professional Premium (1 зуб) 1000
АНЕСТЕЗИЯ, ИНЪЕКЦИИ
В01. 003.004.001 040 Интралигаментарная местная анестезия 400
В01.003.004.002 041 Проводниковая анестезия 400
В01.003.004.004 042 Аппликационная анестезия 90
В01.003.004.005 043 Инфильтрационная анестезия 400
А11.07.011.001 044 Инъекционное введение лекарственных препаратов в челюстно-лицевую область 400
А11.07.011.002 045 Инъекционное введение плазмы (плазмолифтинг) 6100
ОСНОВНЫЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПРОЦЕДУРЫ
А06.07.003.06 048 контрольный RVG снимок 0
А06. 07.003.05 049 RVG снимок диагностический 200
А06.07.003.01 050 RVG снимок 200
А06.07.003.02 051 Запись RVG снимков на съемный носитель 350
А06.07.003.02 052 RVG снимок пленка 260
А05.07.003.04 053 Электроодонтодиагностика 200
Профилактика заболеваний полости рта
А14.07.008 060 Обучение гигиене полости рта и зубов, индивидуальное, подбор средств и предметов гигиены 250
А16.07.057 061 Запечатывание фиссуры зуба герметиком 350
А22. 07.002 062 Ультразвуковое удаление наддесневых и поддесневых зубных отложений в области зуба 200
А11.07.012.001 063 Глубокое фторирование эмали зуба 80
А11.07.024.001 064 Покрытие зубов реминирализирующим препаратом Clinpro White Varnish 1000
А11.07.022 066 Аппликация лекарственного препарата на слизистую оболочку полости рта 350
А17.07.001 067 Электрофорез лекарственных препаратов при патологии полости рта 250
А17.07.005 068 Магнитотерапия при патологии полости рта и зубов 250
А21.07.001 069 Вакуум-терапия в стоматологии 250
А22. 07.003 070 Лазерная физиотерапия челюстно-лицевой области 250
А16.07.019 071 Временное шинирование при заболеваниях пародонта 1400
А16.07.025 072 Избирательное пришлифование твердых тканей зуба 150
А16.07.051.001 085 Профессиональная гигиена полости рта и зубов "Профилактика" 3600
1.Снятие зубных отложений с использованием ультразвуковой установки и аппарата Air-Flow
2. Полировка
3.Нанесение фтористого геля
А16.07.051.002 086 Профессиональная гигиена полости рта и зубов "Гигиена" 2850
1. Снятие зубных отложений с использованием ультразвуковой установки
2. Полировка
ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ПРИЕМ
А16.07.002.001 090 Восстановление зуба пломбой. Лечение начальной стадии кариеса ( препаратом "ICON") 1400
А16.07.002.002 091 Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
Лечение поверхностного кариеса : Пломба нанокомпозитная "Estelite"/ "Filtek Ultimate" 2700
А16.07.002.003 092 Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
Лечение поверхностного кариеса : Пломба-микрогибридный композитный материал "Filtek-250" 2500
А16. 07.002.004 093 Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
Лечение поверхностного кариеса : Пломба-светоотверждаемый композит "Meridian" 1700
А16.07.002.005 094 Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
Лечение среднего кариеса : Пломба нанокомпозитная "Estelite"/ "Filtek Ultimate" 3500
А16.07.002.006 095 Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
Лечение среднего кариеса : Пломба-микрогибридный композитный материал "Filtek-250" 2900
А16.07.002.007 096 Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
Лечение среднего кариеса : Пломба-светоотверждаемый композит "Meridian" 2000
А16. 07.002.008 097 Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
Лечение глубокого кариеса : Пломба нанокомпозитная "Estelite"/ "Filtek Ultimate" 4300
А16.07.002.009 098 Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
Лечение глубокого кариеса : Пломба-микрогибридный композитный материал "Filtek-250" 3500
А16.07.002.0010 099 Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
Лечение глубокого кариеса : Пломба-светоотверждаемый композит "Meridian" 2500
А16.007.002.001 100 Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров
Эстетическая реставрация : Пломба нанокомпозитная "Estelite"/ "Filtek Ultimate" 6200
Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения)
А11. 07.027 101 Наложение девитализирующей пасты 1000
102 Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 1 канала : 3600
А16.07.010.01 Экстирпация пульпы 1 канала 600
А16.07.030.01 Инструментальная и медикаментозная обработка 1 канала 900
А16.07.008.01 Пломбирование 1 корневого канала зуба система "Beefill" 1600
А16.07.002.009 Наложение временной пломбы 350
А16.07.091 Снятие временной пломбы 150
103 Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 2 канала : 4450
А16. 07.010.02 Экстирпация пульпы 2 канала 800
А16.07.030.02 Инструментальная и медикаментозная обработка 2 канала 1350
А16.07.008.02 Пломбирование 2 корневого канала зуба система "Beefill" 1800
А16.07.002.009 Наложение временной пломбы 350
А16.07.091 Снятие временной пломбы 150
104 Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 3 канала : 5500
А16.07.010.03 Экстирпация пульпы 3 канала 1000
А16.07.030.03 Инструментальная и медикаментозная обработка 3 канала 1700
А16. 07.008.03 Пломбирование корневого канала зуба система "Beefill" 2300
А16.07.002.009 Наложение временной пломбы 350
А16.07.091 Снятие временной пломбы 150
105 Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 4 канала : 7000
А16.07.010.04 Экстирпация пульпы 4 канала 1200
А16.07.030.04 Инструментальная и медикаментозная обработка канала 2100
А16.07.008.04 Пломбирование корневого канала зуба система "Beefill" 3200
А16.07.002.009 Наложение временной пломбы 350
А16. 07.091 Снятие временной пломбы 150
106 Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 1 канала : 2600
А16.07.010.01 Экстирпация пульпы 1 канала 600
А16.07.030.01 Инструментальная и медикаментозная обработка 1 канала 900
А16.07.008.002.01 Пломбирование 1 корневого канала зуба методом латеральной конденсации 600
А16.07.002.009 Наложение временной пломбы 350
А16.07.091 Снятие временной пломбы 150
107 Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 2 канала : 3800
А16. 07.010.02 Экстирпация пульпы 2 канала 800
А16.07.030.02 Инструментальная и медикаментозная обработка 2 канала 1350
А16.07.008.002.02 Пломбирование 2 корневого канала зуба методом латеральной конденсации 1150
А16.07.002.009 Наложение временной пломбы 350
А16.07.091 Снятие временной пломбы 150
108 Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 3 канала : 5300
А16.07.010.03 Экстирпация пульпы 3 канала 1000
А16.07.030.03 Инструментальная и медикаментозная обработка 3 канала 1700
А16. 07.008.002.03 Пломбирование 3 корневого канала зуба методом латеральной конденсации 2100
А16.07.002.009 Наложение временной пломбы 350
А16.07.091 Снятие временной пломбы 150
109 Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 4 канала : 6800
А16.07.010.04 Экстирпация пульпы 4 канала 1200
А16.07.030.04 Инструментальная и медикаментозная обработка 4 канала 2100
А16.07.008.002.04 Пломбирование 4 корневого канала зуба методом латеральной конденсации 3000
А16.07.002.009 Наложение временной пломбы 350
А16. 07.091 Снятие временной пломбы 150
110 Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 1 канала : 2300
А16.07.010.01 Экстирпация пульпы 1 канала 600
А16.07.030.01 Инструментальная и медикаментозная обработка 1 канала 900
А16.07.008.001.01 Пломбирование 1 корневого канала зуба пастой 300
А16.07.002.009 Наложение временной пломбы 350
А16.07.091 Снятие временной пломбы 150
111 Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 2 канала : 2950
А16. 07.010.02 Экстирпация пульпы 2 канала 800
А16.07.030.02 Инструментальная и медикаментозная обработка 2 канала 1350
А16.07.008.001.02 Пломбирование 2 корневого канала зуба пастой 300
А16.07.002.009 Наложение временной пломбы 350
А16.07.091 Снятие временной пломбы 150
112 Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 3 канала : 3800
А16.07.010.03 Экстирпация пульпы 3 канала 1000
А16.07.030.03 Инструментальная и медикаментозная обработка 3 канала 1700
А16. 07.008.001.03 Пломбирование корневого 3 канала зуба пастой 600
А16.07.002.009 Наложение временной пломбы 350
А16.07.091 Снятие временной пломбы 150
113 Лечение пульпита , периодонтита (девитальный метод лечения) 4 канала : 4900
А16.07.010.04 Экстирпация пульпы 4 канала 1200
А16.07.030.04 Инструментальная и медикаментозная обработка 4 канала 2100
А16.07.008.001.04 Пломбирование 4 корневого канала зуба пастой 1100
А16.07.002.009 Наложение временной пломбы 350
А16. 07.091 Снятие временной пломбы 150
114 Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров после лечения пульпита, периодонтита : Пломба нанокомпозитная "Estelite"/ "Filtek Ultimate"
А16.07.002.002 2700
115 Восстановление зуба пломбой с использованием материалов из фотополимеров после лечения пульпита,периодонтита : Пломба-микрогибридный композитный материал "Filtek-250""Charisma"
А16.07.002.003 2300
А16.07.082.001 116 Распломбирование 1 корневого канала ранее леченного пастой 500
А16.07.082.002 117 Распломбирование корневого канала леченного фосфат-цементом/резорцин-формальдегидным методом 900
А16. 07.082.002.01 118 Распломбирование 1 корневого канала с применением ультразвукового скалера 1200
А16.07.030.002 119 Инструментальная и медикаментозная обработка плохо проходимого корневого канала 1200
А16.07.008.001.01 120 Пломбирование 1 корневого канала зуба пастой 300
А16.07.093.01 121 Фиксация внутриканального анкерного, титанового штифта 920
А16.07.093.02 122 Фиксация внутриканального стекловолоконного штифта 1190
А16.07.094 123 Удаление внутриканального штифта /вкладки 950
А16.07.002.009 124 Наложение временной пломбы 350
А16. 07.008 125 Временное пломбирование 1 корневого канала 500
А16.07.002.005 126 Восстановление зуба пломбой с использованием стеклоиномерных цементов 1500
А16.07.002.011 127 Восстановление (лечение) зуба с применением препарата Biodentine 4800
А16.07.002.011 128 Восстановление (лечение) зуба с применением препарата ProRoot MTA 4500
А16.07.002.011 129 Лечение перфорации зуба, прокладка с применением препарата ProRoot MTA 2600
А16.07.002.011 130 Лечение перфорации зуба с применением препарата Триоксидент 500
Парадонтологический прием
А02. 07.009 150 Одонтопародонтограмма 1200
А02.07.003.001 151 Исследование зубодесневых карманов с помощью пародонтологического зонда, забор 350
материала на лабораторное исследование (ссылка ***)
А16.07.038 152 Открытый кюретаж при заболевание пародонта в области одного зуба 1500
А16.07.039 153 Закрытый кюретаж при заболевании пародонта в области одного зуба 1000
А22.07.002.002 154 Ультразвуковое удаление наддесневых и поддесневых зубных отложений,1сегмент 2000
А22.07.002.003 155 Ультразвуковое удаление наддесневых и поддесневых зубных отложений в области всех зубов 3800
(поддерживающая терапия заболеваний пародонта при хорошем уровне гигиены)
А15. 07.003 156 Наложение лечебной повязки при заболевании слизистой оболочки полости рта и пародонта 300
в области одного зуба
А16.07.040.001 157 Лоскутная операция в области одного зуба 1800
А16.07.040.002 158 Лоскутная операция с остеопластикой в области одного зуба (ссылка ***) 2700
А11.07.010.001 159 Введение лекарственных препаратов в пародонтальный карман в области одного зуба 220
А11.07.010.002 160 Введение лекарственных препаратов в пародонтальный карман 4000
(применение тромбоцитарной аутоплазмы (ТАП)),1ед.
ХИРУРГИЧЕСКИЙ ПРИЕМ
В01. 067.002 210 Прием врача стоматолога-хирурга, повторный 150
А16.07.001.001 211 Удаление подвижного зуба 700
А16.07.001.002 212 Удаление подвижной стенки зуба 500
А16.07.001.003 213 Удаление постоянного зуба простое 1000
А16.07.024.001 214 Операция удаление ретенированного,дистопированного или сверхкомплектного зуба 2750
А.16.07.024.002 215 Операция удаление постоянного зуба сложное с рассечением корней и откидыванием лоскута 1800
А16.07.014 216 Вскрытие и дренирование абсцесса полости рта (периостеотомия) 1000
А16. 07.017.002 217 Коррекция объема и формы альвеолярного отростка 1300
А15.07.003.001 218 Наложение лечебной повязки "Reso Pak" 470
А15.07.003.002 219 Наложение лечебной повязки "Колапол" 480
А15.07.003.003 220 Наложение лечебной повязки "Alvogyl" 250
А15.07.003.004 221 Наложение лечебной повязки "Альвостаз" 160
А15.07.003.005 222 Наложение лечебной повязки с использованием йодоформенного бинта 200
А16.07.058 223 Лечение перикоронита(промывание,рассечение и /или иссечение капюшона) 1100
А16. 07.007 224 Резекция верхушки корня 2900
А16.07.097.001 225 Наложение швов кетгутом 250
А16.07.097.002 226 Наложение швов викрилом 400
А16.07.097.003 226/1 Наложение швов моноволоконной нитью "Гликолон" 800
А16.07.095 227 Остановка луночного кровотечения без наложения швов 320
А16.07.095.001 228 Остановка луночного кровотечения без наложения швов методом тампонады 460
А16.07.095.002 229 Остановка луночного кровотечения без наложения швов с использованием гемостатических материалов 770
А16. 07.042 230 Пластика уздечки верхней губы 1500
А16.07.043 231 Пластика уздечки нижней губы 1500
А16.07.044 232 Пластика уздечки языка 1260
А16.07.013 233 Отсроченный кюретаж лунки удаленного зуба 500
А16.07.038 234 Открытый кюретаж при заболеваниях пародонта в области зуба 1500
А16.07.039 235 Закрытый кюретаж при заболеваниях пародонта в области зуба 1000
А16.07.040 236 Удлинение клинической коронки зуба 2000
А16.07.026 237 Гингивэктомия 1910
А16. 07.016 238 Цистотомия или цистэктомия 2050
А16.07.059 239 Гемисекция зуба 1600
А16.07.060 240 Коронарно-радикулярная сепарация (премоляризация) 2100
А15.03.007 241 Наложение шины при переломах челюстей 4050
А15.03.011 242 Снятие шины с одной челюсти 560
А17.07.003 243 Диатермокоагуляция при патологии полости рта и зубов 600
А16.07.055.004 244 Использование плазмы, обогащенной тромбоцитами (PRF) 1500
А16.07.054 Имплантация зубов и костнопластические операции
А06. 30.002.001 250 Описание и интерпретация компьютерных томограмм 500
А16.07.054.001 251 Операция установки имплантата (ссылка***) 14100
А16.07.054.002 252 Операция установки формирователя десны 1800
А16.07.054.001 253 Установка хириргического шаблона (ссылка***) 3000
А16.07.055 Синус-лифтинг (костная пластика, остеопластика)
А16.07.055.001 260 Синус-лифтинг (костная пластика, остеопластика) открытый, с применением остеотропного материала и мембраны (ссылка ***) 33500
А16.07.055.002 261 Синус-лифтинг (костная пластика, остеопластика)открытый, с применением остеотропного материала, мембраны,костная смесь (ссылка ***) 40500
А16. 07.055.003 262 Синус-лифтинг (костная пластика, остеопластика) закрытый (ссылка***) 7500
А16.07.041 Костная пластика челюстно-лицевой области с применением биодеградируемых материалов
А16.07.041.001 270 Костная пластика в области 1 зуба (ссылка***) 15000
А16.07.041.002 271 Костная пластика в области 1 сегмента (ссылка***) 25000
А16.07.041.003 272 Восстановление объема костной ткани (ссылка***) 7000
Гарантийная операция установки имплантатов
А16.07.054.003 280 Гарантийная операция установки имплантата 8820
ОРТОПЕДИЧЕСКИЙ ПРИЕМ
В. 01.066.002 300 Прием врача стоматолога-ортопеда, повторный 150
А02.07.010 301 Исследование на диагностических моделях челюстей 600
А02.07.006 302 Определение прикуса 450
А16.07.005 303 Моделирование зубов WAX-UP, 1ед. 900
А02.07.010.001 Снятие оттисков с одной челюсти
А02.07.010.001/01 310 Снятие оттиска альгинатным материалом с одной челюсти 500
А02.07.010.001/02 311 Снятие оттиска С-силиконовым материалом с одной челюсти 550
А02.07.010.001/03 312 Снятие оттиска А-силиконовым материалом с одной челюсти 800
А02. 07.010.001/04 313 Снятие оттиска полиэфирным материалом 5000
А02.07.010.001/05 314 Снятие оттиска функциональной массой 1200
А23.07.002.039.001 315 Изготовление замыкающего клапана с помощью Detaseal function 600
А23.07.002.039.002 316 Изготовление замыкающего клапана с помощью компаунда 1000
А16.07.053 Снятие несъемной ортопедической конструкции
А16.07.053.001 320 Снятие штампованной коронки 200
А16.07.053.002 321 Снятие металлокерамической ( цельнолитой )коронки 450
Фиксация на постоянный цемент несъемных ортопедических конструкций:
А16. 07.049.001 330 Фиксация (повторная) на постоянный цинк-фосфатный цемент 300
А16.07.049.002 331 Фиксация (повторная) на постоянный стеклоиномерный цемент Фуджи 1 900
А16.07.049.003 332 Фиксация (повторная) на постоянный стеклоиномерный цемент Фуджи плюс 1500
А16.07.049.004 333 Фиксация (повторная) временная на самоотверждаемый цемент 200
А16.07.049.005 334 Нанесение декоративного покрытия 150
А16.07.049.006 335  Фиксация (повторная) на постоянный самоадгезивный композитный цемент Relyx V200 1700
А16.07.035 Протезирование частичными съемными пластиночными протезами
А16. 07.035.001 340 Протезирование частично съемными пластиночными протезами (1-3 зуба) 3800
А16.07.035.002 341 Протезирование частично съемными пластиночными протезами термопластическими (1-3 зуба) 5500
А16.07.035.003 342 Протезирование частично съемными пластиночными протезами (до 8 зубов) (отеч.произ-ва) 5600
А16.07.035.004 343 Протезирование частично съемными пластиночными протезами (до 8 зубов) (импорт.произ-ва) 7400
А16.07.035.005 344 Протезирование частично съемными пластиночными протезами термопластическими (до 8 зубов) (отеч.произ-ва) 11000
А16.07.035.006 345 Протезирование частично съемными пластиночными протезами термопластическими (до 8 зубов) (импорт. произ-ва) 12800
А16.07.035.007 346 Коррекция частичного съемного пластиночного протеза 500
А16.07.023 Протезирование полными съемными пластиночными протезами
А16.07.023.001 350 Протезирование зубов полными съемными пластиночными протезами ( зубы отеч.произ-ва) 7700
А16.07.023.002 351 Протезирование зубов полными съемными пластиночными протезами ( зубы импорт.произ-ва) 9500
А16.07.023.003 352 Протезирование зубов полными съемными пластиночными протезами термопластическими ( зубы отеч.произ-ва) 14000
А16.07.023.004 353 Протезирование зубов полными съемными пластиночными протезами термопластическими ( зубы импорт. произ-ва) 16700
А16.07.023.005 354 Коррекция полного съемного пластиночного протеза 500
А16.07.024.005.001 355 Изготовление каркаса методом литьевым прессованием (Ацетал Дентал) Италия 13000
А16.07.024.005.002 355/1 Изготовление каркаса методом литьевым прессованием (T-crustal) Польша 18000
А16.07.023.001 356 Армирование съемного пластиночного протеза (решетка) 1500
А16.07.023.002 357 Изготовление литого зуба в съемном протезе (утяжелитель) 1000
А16.07.023.003 358 Изготовление индивидуальной ложки 550
А23.07.002.034.001 359 Перебазировка съемного протеза лабораторным методом 1400
А23. 07.002.034.002 360 Перебазировка съемного протеза ( прямой метод) 2100
А23.07.002.010.001 361 Изготовление кламмера гнутого из стальной проволки 250
А23.07.002.010.002 362 Изготовление кламмера типа Пелот 400
А23.07.002.010.003 363 Изготовление петельчатого кламмера 650
А23.07.002.019.001 364 Изготовление кламмер системы «Нея» 900
А23.07.002.019.002 365 Изготовление литого опорно-удерживающего кламмера 950
А23.07.002.011 366 Изоляция торусов 400
А23.07.002.039 367 Изготовление эластической прокладки 2000
А16. 07.036 Протезирование съемными бюгельными протезами
А23.07.002.017 370 Изготовление литого базиса 6950
А23.07.002.015 371 Изготовление бюгельного каркаса 9700
А23.07.002.046.001 372 Изготовление замкового крепления (систиема ВКС -СГ) 3500
А23.07.002.046.002 373 Изготовление замкового крепления (система ВКС Оц Уни) 9500
А23.07.002.046.003 374 Замена матрицы (систиема ВКС -СГ) 2500
А23.07.002.046.004 374/1 Замена одной матричной системы (система ВКС Оц Уни) 5000
А23.07.002.060 375 Изготовление пластинки с окклюзионными накладками ( многозвеньевая )- 1 звено 250
А23. 07.002.021 376 Изготовление ограничителя базиса бюгельного протеза (антиопрокидыватель) 800
А16.07.036.001 377 Фрезеровка (один элемент) 350
А23.07.002.022 378 Изготовление седла бюгельного протеза 1500
А23.07.002.016 379 Изготовление огнеупорной модели 1200
А23.07.002.016.001 380 Дублирование модели 1300
А16.07.003 Восстановление зуба вкладками, виниром, полукоронкой
А16.07.003.001 381 Разработка корневого канала под культевую вкладку 200
А16.07.003.002 382 Изготовление вкладки одноканальной 1500
А16. 07.003.003 383 Изготовление вкладки двухканальной 2000
А16.07.003.004 384 Изготовление вкладки разборной 2300
А16.07.003.005 385 Изготовление вкладки из диоксида циркония 5000
А16.07.004 Восстановление зуба коронкой
А23.07.002.054.001 390 Изготовление коронки металлокерамической (фарфоровой) 4700
А23.07.002.054.002 391 Изготовление коронки безметалловой из диоксида циркония 12100
А23.07.002.054.003 392 Изготовление коронки (винира) безметалловой из прессованной керамики (Е-мах) 14000
А23.07. 002.028.001 393 Изготовление коронки цельнолитой с керамической облицовкой 4300
А23.07.002.028.002 394 Изготовление коронки цельнолитой 2500
А23.07.002.041 395 Изготовление коронки телескопической 2500
А23.07.002.030.001 396 Изготовление пластмассовой коронки 1000
А23.07.002.030.002 397 Изготовление пластмассовой коронки временной (в полости рта) 1000
А23.07.002.031 398 Изготовление штампованой коронки 1260
А23.07.002.054.004 399 Реставрация коронки металлокерамической прямым методом 2500
А16. 07.005 Восстановление целостности зубного ряда несъемными мостовидными протезами
А23.07.002.049 400 Изготовление зуба металлокерамического 4700
А23.07.002.049.001 401 Изготовление зуба безметаллового из диоксида циркония 12100
А23.07.002.001.001 402 Изготовление зуба цельнолитого с керамической облицовкой 4300
А23.07.002.001.002 403 Изготовление зуба литого металлического в несъемной конструкции протеза 2500
А23.07.002.050 404 Изготовление зуба пластмассового сложного 1100
А23.07.002.005 405 Изготовление спайки 150
А23. 07.002.002 406 Изготовление лапки литого зуба 320
А23.07.002.056 407 Изготовление окклюзионной накладки в мостовидном протезе 320
А23.07.002.048 408 Изготовление зуба металлоакрилового 3100
А16.07.006 Протезирование зуба с использованием имплантата
А16.07.006.001 410 Установка абатмента(ссылка***) 4950
А16.07.006.002 411 Изготовление металлокерамической коронки на имплантате 7350
А16.07.006.003 412 Изготовление цельнолитой коронки на имплантате 4850
А16.07.006.004 413 Изготовление коронки из диоксида циркония на имплантате 15750
А16. 07.006.005 414 Замена винта абатмента(ссылка***) 600
А16.07.006.006 415 Изготовление временного абатмента (ссылка***) 3000
А23.07.002.030.003 416 Изготовление временной пластмассовой коронки на имплантанте 3000
А23.07.002.037 Починка съемного пластиночного протеза
А23.07.002.037.001 420 Починка перелома базиса самотвердеющей пластмассой 1200
А23.07.002.037.002 421 Починка перелома базиса самотвердеющей пластмассой с армированием 1650
А23.07.002.036 422 Приварка зуба 800
А16.07.023 423 Профессиональная чистка протеза 700
А23. 07.002.035 424 Приварка кламмера 800
ОРТОДОНТИЧЕСКИЙ ПРИЕМ
А16.07.047 Ортодонтическая коррекция съемным ортодонтическим аппаратом
А16.07.047.001 501 Ортодонтическая коррекция съемным аппаратом одночелюстным 8500
А16.07.047.002 502 Ортодонтическая коррекция съемным аппаратом двухчелюстным 12000
А23.07.001.002 503 Ремонт ортодонтического аппарата 1500
А23.07.001.01 504 Коррекция ортодонтических аппаратов 450
А23.07.001.02 505 Коррекция несъемного ортодонтического аппарата с заменой дуги 1000
А02. 07.010 507 Комплексное диагностическое обследование (снятие оттисков, изготовление и расчет диагностических моделей, анализ снимков (ОПТГ, ТРГ, КТ), составление плана лечения 3500
А16.07.048 Ортодонтическая коррекция с применением брекет-систем
А23.07.002.065.001 508 Лечение с использованием съемных капп по системе "Еврокаппа" 159000
А16.07.048.013 509 Ортодонтическая коррекция с применением брекет-системы 4+2 (ссылка***) 15400
А16.07.048.001 510 Ортодонтическая коррекция с применением металлических брекет-систем (ссылка***) 30240
А16.07.048.002 511 Ортодонтическая коррекция с применением комбинированной брекет-системы (ссылка***) 36435
А16. 07.048.003 512 Ортодонтическая коррекция с применением керамической брекет-системы (ссылка***) 41265
А16.07.048.004 513 Ортодонтическая коррекция с применением безлигатурной брекет-системы (ссылка***) 33075
А16.07.048.005 514 Ортодонтическая коррекция с применением безлигатурной брекет-системы (Damon Q) (ссылка***) 42945
А16.07.048.006 515 Ортодонтическая коррекция с применением cапфировой брекет-системы (ссылка***) 42525
А16.07.048.007 516 Повторная фиксация брекета 1350
А16.07.048.008 517 Снятие брекета с одного зуба,ретейнера, полировка 200
А16.07.048.009 518 Изготовление ретенционной пластины 3500
А16. 07.048.010 519 Изготовление ретенционной каппы 3500
А16.07.048.011 520 Ретейнер 1890
А16.07.048.012 521 Припасовка съемной аппаратуры (трейнер, вестибулярная пластина и т.д.) (ссылка***) 6000
А23.07.002.065.002 522 3D моделирование, предварительное планирование лечения по системе "Еврокаппа" 16000
А23.07.002.065.003 523 Повторная печать 1 каппы по системе "Еврокаппа" 3000
ссылка*** - по указанным работам дополнительно оплачивается необходимый материал
код услуги код Наименование материала цена, руб
А16. 07.048.001 601 Брекет In-ovation-R металлические (1 шт.) 875
А16.07.048.001 602 Брекет Damon Q (1 шт.) 1450
А16.07.048.003 603 Брекет Damon Clear керамические(1 шт) 2580
А16.07.048.003 604 Брекет in-ovation-C (керамические) (1 шт) 1680
А16.07.048.001 605 Брекет металлический (1 шт) 500
А16.07.048.001 606 Брекет Damon 3 MX (металлический) 725
А16.07.048.001 606/1 Брекет самолигирующий Discovery Dentaurum (Германия) 720
А16.07.048.001 606/2 Брекет самолигирующий Дэймон Q и Q2 ORMCO (США) 1400
А16. 07.048.012 607 Трейнер, LM- Активатор 4625
А16.07.048.012 608 Вестибулярная пластина силиконовая 1800
А16.07.048.012 609 Шина составная TNJ 5000
СИСТЕМА Nobel Biocare
А16.07.006.001 610 Абатмент Nobel Biocare 11000
А16.07.006.001 611 Аналог Nobel Biocare 2000
А16.07.006.001 612 Трансфер Nobel Biocare 3300
А16.07.006.001 613 Фиксирующий винт Nobel Biocare 4200
А16.07.006.001 614 Абатмент Титановый Conihal Nobel Biocare 10000
А16. 07.006.001 615 Формирователь десневого края Нобель Replace Groovy 4700
А16.07.054.001 616 Имплантат Nobel Biocare 15000
А16.07.054.001 617 Имплантат Replace Groovy(без заглушки) 17040
А16.07.054.001 618 Заглушка к имплантату Nobel Biocare Replace Groovy 3000
А16.07.054.001 619  Имплантат NobelActive Internal 21400
КОСТНОЗАМЕЩАЮЩИЕ МАТЕРИАЛЫ
А16.07.055 620 Резорбируемая мембрана коллагеновая 30мм*40мм 14150
А16.07.055 621 Резорбируемая мембрана коллагеновая 20мм*30мм 6000
А16. 07.055 621/1 Резорбируемая мембрана коллагеновая 15мм*20мм 3500
А16.07.055 622 Костнопластический материал OsteoBiol Gen-Os, 1см3 15200
А16.07.055 623 Костнопластический материал OsteoBiol Gen-Os, 0,5см3 8500
А16.07.055 623/1 Костнопластический материал Osstem OsteOss, 1см3 9200
А16.07.055 623/2 Костнопластический материал Osstem OsteOss , 0,5см3 6700
А16.07.055 623/3 Костнопластический материал Osstem OsteOss , 0,25см3 4200
А16.07.055 624 Костная смесь увлажненная (гель) OsteoBiol Mp3, 1см3 16000
А16. 07.055 625 Костная смесь увлажненная (гель) OsteoBiol Mp3, 0,5см3 12500
А16.07.055 625/1 Костная смесь увлажненная (гель) Osstem ExFuse, 1см3 14500
А16.07.055 625/2 Костная смесь увлажненная (гель) Osstem ExFuse, 0,5см3 8400
А16.07.055 626 Костный блок 15000
А16.07.055 627 Мембрана с титановым усилением Cytoplast Ti-250 17 мм х 25 мм 22000
А11.07.010 628 Матричный протеин Эмдогейн 0,3мг 7500
А16.07.055 629 Мембрана с титановым усилением Cytoplast Ti-250 25 мм х 30 мм 32000
А16.07.055 629/1 Мембрана с титановым усилением Cytoplast Ti-250 20 мм х 25 мм 29000
СИСТЕМА Alpha Bio
А16. 07.006.001 630 Металическое гнездо Alpha Bio 2000
А16.07.006.001 631 Нейлоновый/ пластиковый колпачок Alpha Bio 1600
А16.07.006.001 632 Абатмент Циркониевый Alpha Bio 5200
А16.07.006.001 633 Усиленный винт Alpha Bio 2000
А16.07.006.001 634 Колпачок Uni Cover шаровидный Alpha Bio 2000
А16.07.006.001 635 Колпачок Uni Cover для винтового и балочного крепления съемных конструкций Alpha Bio 2000
А16.07.006.001 636 Колпачок Alpha Bio Pro Alpha Vni Cover 2000
А16.07.006.001 637 Фиксирующий винт Alpha Bio 1700
А16. 07.006.001 638 Пластиковый колпачок Alpha Bio 1700
А16.07.006.001 639 Абатмент Alpha Bio 2600
А16.07.006.001 639/1 Временный Абатмент Alpha Bio 2300
А16.07.006.001 640 Абатмент шаровидный Alpha Bio 2970
А16.07.006.001 641 Абатмент Multi UnitAlpha Bio 4000
А16.07.054.001 642 Имплантат Alpha Bio 7800
А16.07.006.001 643 Колпачок пластиковый с титановым кольцом 2500
Система Osstem
А16.07.054.001 644 Имплантат Osstem TS (Корея) 7000
А16. 07.006.001 645 Абатмент шаровидный Osstem 4500
А16.07.006.001 646 Ретенционный колпачок O-ring 1500
А16.07.006.001 647 Мультиюнит Osstem 2760
Лаборатория (Ортос)
А16.07.006.001 650 Абатмент индивидуальный без винта 2650
Система MIS
А16.07.054.001 660 Имплантат MIS 11500
А16.07.006.001 661 Абатмент прямой пластиковый с шестигранником MD-CPh23, "MIS" 2500
А16.07.006.001 662 Абатмент трансгингивальный "MIS" 4300
А16. 07.006.001 663 Винт ортопедический титановый "MIS" 1600
А16.07.006.001 664 Абатмент временный титановый "MIS" 4000
Лаборатория "УНИСТОМ"
А16.07.006.001 670 Абатмент титановый 2500
А16.07.006.001 671 Абатмент титановый с винтовой фиксацией 3400
А16.07.006.001 674 Абатмент из диоксида циркония 3150
А16.07.054.001 680 Шаблон хирургический база 850
А16.07.054.001 681 Шаблон хирургический с направляющим сверлением (1 место) 1300
А16. 07.054.001 682 Шаблон хирургический с титановой втулкой (1 место) 1700
ДЕТСКАЯ СТОМАТОЛОГИЯ
В01.064.003 700 Прием (осмотр,консультация) стоматолога детского , первичный 400
В01.064.004 701 Прием (осмотр,консультация) стоматолога детского , повторный 150
АНЕСТЕЗИЯ
В01.003.004.001.001 702 Интралигаментарная местная анестезия с применением компьтерного аппарата STA Drive Unit (США) 1300
В01.003.004.002.001 703 Проводниковая анестезия с применением компьтерного аппарата STA Drive Unit (США) 1300
В01. 003.004.005.001 704 Инфильтрационная анестезия с применением компьтерного аппарата STA Drive Unit (США) 1300
А11.07.027.001 705 Наложение девитализирующей пасты 300
А16.07.002.009 706 Наложение временной пломбы 150
Профилактика заболеваний полости рта
А11.07.024.003 710 Местное применение реминерализующих препаратов в области зуба (СНОУ ГЕЛЬ) 650
А11.07.012.002 711 Глубокое фторирование (СНОУ ГЕЛЬ 60 секунд ) 200
А.11.07.012.003 712 Глубокое фторирование (CНОУ ПЕНКА ФЛОАМ ) 220
А11.07.012..004 713 Глубокое фторирование (СНОУ ФЛОЛЛИ) 530
А16. 07.020.001 714 Удаление наддесневых и поддесневых зубных отложений ручным методом 120
А16.07.025 715 Избирательное пришлифование твердых тканей зуба 150
Терапевтический прием
А16.07.002.005 720 Восстановление зуба пломбой с использованием стеклоиномерных цементов лечение кариеса молочного зуба
1200
А16.07.002.010 721 Восстановление зуба пломбой с использованием фотополимеров лечение кариеса молочного зуба
1500
А16.07.008.001 722 Пломбирование корневого канала зуба с применением жидкости "Форфенан" 200
А16. 07.008.002 723 Пломбирование корневого канала зуба с применением пасты "Форфенан" 300
А11.07.023 724 Применение метода серебрения зуба 250
А16.07.002 725 Наложение лечебной прокладки "Кальцемол" 300
Лечение осложненного кариеса:
А16.07.008.003 726 Пломбирование зуба "Триоксидент"/"Пульподент" 900
А16.07.008.004 727 Пломбирование корневого канала зуба пастой "Метапекс" 300
А16.07.030 730 Инструментальная и медикаментозная обработка одного канала 700
А16.07.008.005 731 Временное пломбирование 1-го корневого канала зуба 250
А16. 07.008.006 732 Постоянное пломбирование 1-го корневого канала зуба гуттаперчей и методом латеральной конденсации
900
А16.07.002.010 733 Постановка временной светоотверждающей пломбы 300
Хирургический прием
А16.07.001.004 800 Удаление молочного зуба 600
А16.07.044.001 801 Рассечение уздечки языка 600
Ортопедический прием
А02.07.010.001/02 850 Снятие оттиска с-силиконовым материалом с одной челюсти 400
А16.07.004.001 851 Восстановление зуба металлической коронкой 1500
А16. 07.004.002 852 Восстановление зуба "Стрип" коронкой (колпачек) 2500
А16.07.003 853 Восстановление зуба вкладками "Vitrebond" 800
А16.07.049.001 854 Фиксация на постоянный цинк-фосфатный цемент 300
Лаборатория ИНВИТРО
А02.07.003.002 1000 Посев на анаэробную микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам 1800
А02.07.003.003 1001 Посев на микрофлору и определение чувствительности к антимикробным препаратам 1075
А02.07.003.004 1002 Посев на микрофлору и определение чувствительности к расширенному спектру 2600
антимикробных препаратов
А02. 07.003.005 1003 Посев на микрофлору и определение чувствительности к антимикробным препаратам и 1337
бактериофагам

Светильник ЖКУ 21-250-001 Гелиос ШБ (со стеклом)

Упростите Вашу работу с заявкой

Скорее всего, перед вами сейчас лежит смета или список позиций, которые необходимо приобрести.

Отправьте нам на E-mail заявку целиком, и мы выставим Вам счет на то, что Вам нужно. Мы обсчитываем каждую заявку индивидуально и стараемся предоставить лучшую цену, исходя из вашего объема и требований по срокам поставки. На сайте представлена лишь часть ассортимента, который мы можем поставить. Полный ассортимент значительно шире.

Убедитесь, что в письме с заявкой есть Ваше имя, телефон, реквизиты (или хотя бы название) компании, на которую нужно выставить счет. Электронную почту вы можете увидеть, нажав на кнопку «Показать E-mail» в правом верхнем углу сайта.

Светильник ЖКУ 21-250-001 Гелиос ШБ (со стеклом) можно купить у нас по безналичному расчету, отправив заявку на электронную почту. Мы осуществляем доставку по Москве до адреса клиента, либо до транспортной компании, которая осуществит доставку в Ваш регион. Доставка может быть как бесплатной, так и платной в зависимости от суммы закупки и дальности. Точный просчет может совершить менеджер по вашему запросу.

Продукция торговой марки Galad отличается высоким качеством. Ценовой диапазон средний и высокий. Сроки поставки на продукцию Galad составляют от 2 дней до 2 месяцев в зависимости от позиции. Продукция производится в России на заводах расположенных в г. Лихославль(ООО Лихославльский завод "Светотехника") и г.Кадошкино(ОАО "Кадошкинский Электротехнический завод"). Брак практически не встречается. Срок службы очень высокий.

Назначение

Освещение улиц, дорог с высокой, средней и слабой интенсивностью движения транспорта, железнодорожных платформ и станций, мостов, территорий дворов, школ

Модификации

• 001 – отражатель герметично соединён с защитным стеклом, степень защиты оптического отсека IP65, широкая боковая КСС, габаритные размеры 655х270х265 мм
• 002 – отражатель герметично соединён с защитным стеклом, степень защиты оптического отсека IP65, широкая осевая КСС, габаритные размеры 655х270х265 мм
• 003 – защитное стекло соединено с отражателем при помощи накидных замков, степень защиты оптического отсека IP54, широкая боковая КСС, габаритные размеры 655х270х265 мм
• 004 – защитное стекло соединено с отражателем при помощи накидных замков, степень защиты оптического отсека IP54, широкая осевая КСС, габаритные размеры 655х270х265 мм
• 005 – без защитного стекла, степень защиты IP23, широкая боковая КСС, габаритные размеры 655х270х165 мм
• 006 – без защитного стекла, степень защиты IP23, широкая осевая КСС, габаритные размеры 655х270х165 мм
• Комплектуется встроенным ЭМПРА, под заказ – ЭПРА
• Цвет светильника по умолчанию: серый

Конструкция и обслуживание

• Корпус-крышка изготовлен из термостойкой ударопрочной пластмассы
• Основание изготовлено из стального проката, покрашенного порошковой краской
• Отражатель изготовлен из алюминия высокой чистоты методом глубокой вытяжки
• Защитное стекло из светостабилизированного поликарбоната
• Светильник рекомендуется устанавливать на Г-образных кронштейнах диаметром 48 мм под углом 15° к горизонту. Другие положения тоже возможны
• Оптический отсек (мод. 001 и 002) – доступ сверху. Открыть два замка в торцевой части светильника. Оптический отсек при- мет вертикальное положение. Повернуть крышку с патроном против часовой стрелки, освободить от фиксации с пластмассо- вым стаканом, вынуть из оптического отсека и заменить лампу
• Оптический отсек (мод. 003 и 004) – доступ снизу. Открыть два замка, крепящих стекло, откинуть стекло. Это обеспечит доступ к лампе с патроном
• Отсек ПРА – доступ сверху. Открыть два замка в торцевой части светильника. Корпус вместе с оптическим отсеком примет вертикальное положение. Это обеспечит доступ к ПРА, клеммной колодке и узлу крепления

Преимущества

• Антивандальность: ударопрочные защитное стекло и корпус
• Долговечность: металлические детали защищены порошковым покрытием
• Гарантия качества: отражатель обработан электрохимической полировкой и анодированием, защищен от окисления и коррозии
• Стабильность: защитное стекло сохраняет коэффициент пропускания с течением времени
• Высокая степень защиты от воздействия окружающей среды (мод 001 и 002): оптический отсек полностью пыле- и влагонепроницаем
• Удобство обслуживания: ПРА установлен на легкосъемной панели
• Вариативность светораспределения: наличие двух типов КСС позволяет найти оптимальное решение для каждого проекта
• Дизайн: функциональный классический

Predator - Портативный компьютер Helios 300 NH.Q53AA.001 - Mundo Compu Hogar Usa

Готовый к битве и жаждущий битвы Helios 300 доставит вас в игру со всем, что вам нужно. Только сейчас мы вооружили его графикой NVIDIA GeForce GTX 1660 Ti, новейшим процессором Intel Core i7 9-го поколения и нашей специально разработанной технологией AeroBlade 3D Fan 4-го поколения. Благодаря панели IPS 144 Гц и времени отклика 3 мс Overdrive вы можете попрощаться с размытием и насладиться чистым, четким, высокооктановым игровым процессом.Благодаря потрясающей комбинации интеллектуальных функций процессор Intel Core i7 невероятно мощный. PredatorSense - это идеальный инструмент для управления и настройки игрового процесса из одного места. Просто нажмите кнопку PredatorSense и управляйте освещением, скоростью вентилятора, разгоном, игровыми профилями и т. Д.

Технические характеристики
Размер экрана 15,6 ″
Разрешение дисплея 1920 x 1080
Производитель процессора Intel
Процессор i7
Скорость процессора 2.60 ГГц
Количество ядер процессора 6
Память (ОЗУ) установлена ​​ 16 ГБ
Память (RAM) Тип DDR4 SDRAM
Операционная система Windows 10 Домашняя
SSD (твердотельный накопитель) 512 ГБ
Порты USB Есть
Тип дисплея IPS широкоформатный дисплей со светодиодной подсветкой
Производитель графического контроллера Nvidia
Видеопамять 6 ГБ
Встроенная веб-камера Есть
Встроенный микрофон Есть
Разъем для наушников 1 * комбинированный аудиоразъем: 1 * головной телефон / 1 * микрофонный вход
Беспроводная сеть 802.11ac
Ethernet Есть
Сетевое подключение 10/100/1000 гигабит
HDMI Есть
Указывающее устройство Сенсорная панель
Размеры
В штучной упаковке
Высота 14,2 дюйма
Ширина 0,9 дюйма
Масса 5 фунтов 8.16 унций
Глубина 10,0 дюймов

Foxp3 + Helios + регуляторные Т-клетки связаны с субпопуляциями моноцитов и их экспрессией PD-1 во время острой инфекции ВИЧ-1 | BMC Immunology

  • 1.

    Saison J, Ferry T, Demaret J, Maucort BD, Venet F, Perpoint T, Ader F, Icard V, Chidiac C, Monneret G. Связь между дискордантным иммунологическим ответом на высокоактивную антиретровирусную терапию, процент регуляторных Т-клеток, активация иммунных клеток и очень низкий уровень виремии у ВИЧ-инфицированных пациентов.Clin Exp Immunol. 2014; 176: 401–409.

    CAS Статья Google Scholar

  • 2.

    Curotto DLM, Lafaille JJ. Природные и адаптивные регуляторные Т-клетки foxp3 +: что-то похожее или разделение труда? Иммунитет. 2009. 30: 626–35.

    Артикул Google Scholar

  • 3.

    Khaitan A, Kravietz A, Mwamzuka M, Marshed F, Ilmet T, Said S, Ahmed A, Borkowsky W., Unutmaz D. FOXP3 + Helios + регуляторные Т-клетки, активация иммунной системы и прогрессирующее заболевание у ВИЧ-инфицированных дети.J Acquir Immune Defic Syndr. 2016; 72: 474–84.

    CAS Статья Google Scholar

  • 4.

    Ким Х.Дж., Барниц Р.А., Креславски Т., Браун Ф.Д., Моффет Х., Лемье М.Э., Кайгусуз Й., Мейсснер Т., Холдеррид Т.А., Чан С. и др. Для стабильной ингибирующей активности регуляторных Т-клеток необходим фактор транскрипции Helios. Наука. 2015; 350: 334–9.

    CAS Статья Google Scholar

  • 5.

    Шевач Э.М., Торнтон AM. tTregs, pTregs и iTregs: сходства и различия. Immunol Rev.2014; 259: 88–102.

    CAS Статья Google Scholar

  • 6.

    Mercer F, Khaitan A, Kozhaya L, Aberg JA, Unutmaz D. Дифференциация эффекторных и регуляторных Т-клеток человека, продуцирующих IL-17, от наивных предшественников, коммитированных по клонам. J Immunol. 2014; 193: 1047–54.

    CAS Статья Google Scholar

  • 7.

    Анцингер Дж. Дж., Баттерфилд Т. Р., Ангелович Т. А., Кроу С. М., Палмер К. С.. Моноциты как регуляторы воспаления и сопутствующих заболеваний, связанных с ВИЧ, во время АРТ. J Immunol Res. 2014; 2014: 569819.

    Артикул Google Scholar

  • 8.

    Циглер-Хайтброк Л., Анкута П., Кроу С., Далод М., Грау В., Харт Д. Н., Линен П. Дж., Лю Ю. Дж., Макферсон Г., Рэндольф Г. Дж. И др. Номенклатура моноцитов и дендритных клеток крови. Кровь. 2010; 116: e74–80.

    CAS Статья Google Scholar

  • 9.

    Jakubzick CV, Randolph GJ, Henson PM. Дифференцировка моноцитов и антигенпрезентирующие функции. Nat Rev Immunol. 2017; 17: 349–62.

    CAS Статья Google Scholar

  • 10.

    Чжун Х., Язданбахш К. Дифференциальный контроль развития Helios (+/-) Treg субпопуляциями моноцитов посредством разрозненных воспалительных цитокинов. Кровь. 2013; 121: 2494–502.

    CAS Статья Google Scholar

  • 11.

    Day CL, Kaufmann DE, Kiepiela P, Brown JA, Moodley ES, Reddy S, Mackey EW, Miller JD, Leslie AJ, DePierres C и др. Экспрессия PD-1 на ВИЧ-специфических Т-клетках связана с истощением Т-клеток и прогрессированием заболевания. Природа. 2006; 443: 350–4.

    CAS Статья Google Scholar

  • 12.

    Саиди А., Занди К., Чеок Й.Й., Саейди Х., Вонг В.Ф., Ли С., Чеонг Х.С., Йонг Ю.К., Ларссон М., Шанкар Э.М. Истощение Т-клеток при хронических инфекциях: изменение состояния истощения и восстановление оптимальных защитных иммунных реакций.Фронт Иммунол. 2018; 9: 2569.

    Артикул Google Scholar

  • 13.

    Ларссон М., Шанкар Е.М., Че К.Ф., Саейди А., Эллегард Р., Баратан М., Велу В., Камарулзаман А. Молекулярные признаки ингибирования Т-клеток при инфекции ВИЧ-1. Ретровирология. 2013; 10:31.

    CAS Статья Google Scholar

  • 14.

    Риелла Л.В., Патерсон А.М., Шарп А.Х., Чандракер А. Роль пути PD-1 в иммунном ответе.Am J Transplant. 2012; 12: 2575–87.

    CAS Статья Google Scholar

  • 15.

    Петровас С., Касазза Дж. П., Бренчли Дж. М., Прайс Д.А., Гостик Э, Адамс В.С., Precopio ML, Шакер Т., Родерер М., Дуек Д.К. и др. PD-1 является регулятором выживаемости вирус-специфичных CD8 + Т-клеток при ВИЧ-инфекции. J Exp Med. 2006; 203: 2281–92.

    CAS Статья Google Scholar

  • 16.

    Саид Э.А., Дюпюи Ф.П., Траутманн Л., Чжан Й., Ши Й., Эль-Фар М., Хилл Б.Дж., Ното А., Анкута П., Перец Й. и др.Вызванная запрограммированной смертью-1 продукция интерлейкина-10 моноцитами нарушает активацию CD4 + Т-клеток во время ВИЧ-инфекции. Nat Med. 2010; 16: 452–9.

    CAS Статья Google Scholar

  • 17.

    Бардхан К., Анагностоу Т., Буссиотис В.А. Путь PD1: PD-L1 / 2 от открытия до клинического внедрения. Фронт Иммунол. 2016; 7: 550.

    Артикул Google Scholar

  • 18.

    МакМайкл А.Дж., Заимствование П., Томарас Г.Д., Гунетиллеке Н., Хейнс Б.Ф.Иммунный ответ во время острой инфекции ВИЧ-1: ключи к разработке вакцины. Nat Rev Immunol. 2010; 10: 11–23.

    CAS Статья Google Scholar

  • 19.

    Chen P, Su B, Zhang T, Zhu X, Xia W, Fu Y, Zhao G, Xia H, Dai L, Sun L, et al. Нарушения субпопуляций моноцитов и их связь с дифференцировкой Т-хелперных клеток у пациентов с острой и хронической ВИЧ-1-инфекцией. Фронт Иммунол. 2017; 8: 272.

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 20.

    Гуо Н, Лю Л., Ян X, Сонг Т, Ли Г, Ли Л., Цзян Т., Гао И, Чжан Т., Су Б и др. Иммунологические изменения в субпопуляциях моноцитов и их связь с Foxp3 (+) регуляторными Т-клетками у ВИЧ-1-инфицированных лиц с сифилисом: краткий отчет об исследовании. Фронт Иммунол. 2019; 10: 714.

    CAS Статья Google Scholar

  • 21.

    Simonetta F, Lecuroux C, Girault I, Goujard C, Sinet M, Lambotte O, Venet A, Bourgeois C. Раннее и длительное изменение эффекторных CD45RA (-) Foxp3 (высоких) регуляторных Т-клеток гомеостаз при ВИЧ-инфекции.J Infect Dis. 2012; 205: 1510–9.

    CAS Статья Google Scholar

  • 22.

    Matavele CR, Namalango E, Maphossa V, Macicame I, Bhatt N, Polyak C, Robb M, Michael N, Jani I, Kestens L. Частоты регуляторных Т-клеток Helios + коррелируют с контролем репликации вирусов и восстановление абсолютного количества Т-лимфоцитов CD4 на ранней стадии инфицирования ВИЧ-1. BMC Immunol. 2017; 18:50.

    Артикул Google Scholar

  • 23.

    Bandera A, Ferrario G, Saresella M, Marventano I, Soria A, Zanini F, Sabbatini F, Airoldi M, Marchetti G, Franzetti F и др. Истощение CD4 + Т-лимфоцитов, активация иммунной системы и увеличение производства регуляторных Т-клеток в тимусе ВИЧ-инфицированных людей. PLoS One. 2010; 5: e10788.

    Артикул Google Scholar

  • 24.

    Fritzsching B, Oberle N, Eberhardt N, Quick S, Haas J, Wildemann B, Krammer PH, Suri-Payer E. В отличие от эффекторных Т-клеток, регуляторные Т-клетки CD4 + CD25 + FoxP3 + очень чувствительны. к лиганду CD95, но не к гибели клеток, опосредованной TCR.J Immunol. 2005; 175: 32–6.

    CAS Статья Google Scholar

  • 25.

    Lim A, Tan D, Price P, Kamarulzaman A, Tan HY, James I, French MA. Доля циркулирующих Т-клеток с фенотипом регуляторных клеток увеличивается при активации иммунной системы, связанной с ВИЧ, и остается высокой при антиретровирусной терапии. СПИД. 2007; 21: 1525–34.

    Артикул Google Scholar

  • 26.

    Piconi S, Trabattoni D, Gori A, Parisotto S, Magni C, Meraviglia P, Bandera A, Capetti A, Rizzardini G, Clerici M.Иммунная активация, апоптоз и активность Treg связаны со стойким снижением количества CD4 + Т-клеток во время антиретровирусной терапии. СПИД. 2010; 24: 1991–2000.

    CAS Статья Google Scholar

  • 27.

    Вайс Л., Пикетти С., Ассуму Л., Дидье С., Каккавелли Л., Донкова-Петрини В., Леви Ю., Жирар П. М., Бургард М., Виард Дж. П. и др. Связь между регуляторными Т-клетками и активацией иммунной системы у пациентов, инфицированных вирусом иммунодефицита человека, прерывающих антиретровирусную терапию.PLoS One. 2010; 5: e11659.

    Артикул Google Scholar

  • 28.

    Ямадзаки С., Инаба К., Тарбелл К.В., Штайнман Р.М. Дендритные клетки размножают антиген-специфические Foxp3 + CD25 + CD4 + регуляторные Т-клетки, включая супрессоры аллореактивности. Immunol Rev.2006; 212: 314–29.

    CAS Статья Google Scholar

  • 29.

    Чжун Х, Бао В., Ли Х, Миллер А., Сири С., Хак Н., Бассел Дж., Язданбахш К.Моноциты CD16 + контролируют развитие субпопуляции Т-клеток при иммунной тромбоцитопении. Кровь. 2012; 120: 3326–35.

    CAS Статья Google Scholar

  • 30.

    Паукен К.Э., Уэрри Э.Дж. Преодоление истощения Т-лимфоцитов при инфекции и раке. Trends Immunol. 2015; 36: 265–76.

    CAS Статья Google Scholar

  • 31.

    Yao S, Wang S, Zhu Y, Luo L, Zhu G, Flies S, Xu H, Ruff W, Broadwater M, Choi IH, et al.PD-1 на дендритных клетках препятствует врожденному иммунитету против бактериальной инфекции. Кровь. 2009. 113: 5811–8.

    CAS Статья Google Scholar

  • 32.

    Хуанг Х, Венет Ф, Ван ИЛ, Лепапе А, Юань З, Чен И, Свон Р, Херуф Х, Моннерет Дж, Чанг С.С. и др. Экспрессия PD-1 макрофагами играет патологическую роль в изменении микробного клиренса и врожденной воспалительной реакции на сепсис. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2009; 106: 6303–8.

    CAS Статья Google Scholar

  • 33.

    Wang L, Pino-Lagos K, de Vries VC, Guleria I, Sayegh MH, Noelle RJ. Передача сигналов лиганда запрограммированной смерти 1 регулирует генерацию адаптивных Foxp3 + CD4 + регуляторных Т-клеток. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2008; 105: 9331–6.

    CAS Статья Google Scholar

  • 34.

    Brahmer JR, Tykodi SS, Chow LQ, Hwu WJ, Topalian SL, Hwu P, Drake CG, Camacho LH, Kauh J, Odunsi K, et al. Безопасность и активность антител анти-PD-L1 у пациентов с запущенным раком.N Engl J Med. 2012; 366: 2455–65.

    CAS Статья Google Scholar

  • 35.

    Полторак М.П., ​​Шрамль БУ. Картирование судьбы дендритных клеток. Фронт Иммунол. 2015; 6: 199.

    Артикул Google Scholar

  • 36.

    Типпаяват П., Пинсири М., Ринчай Д., Рияпа Д., Ромфрук А., Ган Й.Х., Хоутон Р.Л., Фелгнер П.Л., Титболл Р.В., Стивенс М.П. и др. Белки Burkholderia pseudomallei, представленные дендритными клетками моноцитов, стимулируют Т-клетки памяти человека in vitro.Заражение иммунной. 2011; 79: 305–13.

    CAS Статья Google Scholar

  • Альтернативные варианты сплайсинга Модулируют доминантно-отрицательную функцию Helios при Т-клеточном лейкозе

    Рис.1

    Аберрантная экспрессия транскриптов Helios в клеточных линиях и первичных Т-клеточных или миелоидных лейкозных клетках.

    ( A ) ОТ-ПЦР для обнаружения экспрессии Helios в гемопоэтических клетках, полученных из лейкозных клеток Т человека (Jurkat, CCRF-CEM, MOLT-4), лейкозов В (Val, SUDHL4, HMy2.CIR) и миелоидных клеточных линий (HL-60, U937). Образцы линий негематопоэтических клонов клеток, полученных из рака молочной железы (MCF-7, MDA-MB 231), рака печени (HepG2, SK-Hep1), рака почек (HEK 293T) и мезенхимальных стволовых клеток (MSC), были включены для тест. Для идентификации альтернативных изоформ сплайсинга проводили ОТ-ПЦР с праймерами, сконструированными в экзонах 1 и 7 канонического полноразмерного транскрипта Helios. Клонировали амплифицированные кДНК и проводили анализ секвенирования. ( B ) Вестерн-блот-анализ Helios в линиях гематопоэтических и негематопоэтических клонов клеток, чтобы показать присутствие множества изоформ Helios.Молекулярные массы коротких вариантов Helios составляли 53 кДа (Helios V1), 10 кДа (Helios-V2) и 16 кДа (Helios-V3). ( C ) Повышенная экспрессия коротких вариантов Helios при гематологических злокачественных новообразованиях. Анализ мРНК Helios с помощью ОТ-ПЦР проводили в периферических мононуклеарных клетках крови людей с острым лейкозом, вызванным Т-клетками (n = 9) или миелоидным лейкозом (n = 3), а также в образцах от здоровых субъектов. ( D ) Схема вариантов сплайсинга Helios-1, Helios-2 и коротких Helios, идентифицированных в этом исследовании.Вариант 1 (V1), вариант 2 (V2) и вариант 3 (V3) Helios представляют собой новые альтернативные изоформы сплайсинга, идентифицированные в клонах лейкозных клеток. Коричневые прямоугольники в экзонах 3–5 представляют четыре N-концевых мотива «цинковые пальцы», используемые в связывании консенсусной последовательности ДНК. Два фиолетовых прямоугольника в экзоне 7 показывают мотивы цинковых пальцев на С-конце. Три новые изоформы Helios номинированы в соответствии с экзонами или нуклеотидами, удаленными из транскрипта Helios дикого типа. Канонический полноформатный Ikaros 1 включен для сравнения.

    doi: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0163328.g001

    Helios модулирует созревание субпопуляции нейронов CA1, необходимой для формирования пространственной памяти.

    Основные моменты

    Helios - фактор транскрипции, который специфически экспрессируется в кальбиндин-положительных пирамидных нейронах CA1 во время развития.

    Взрослые мыши, лишенные Helios, демонстрируют специфическое снижение плотности шипов в кальбиндин-положительных пирамидных нейронах CA1, нарушение пространственного обучения и снижение долгосрочной потенциации CA3-CA1.

    VSNL1 тонко регулируется Helios во время развития, и мы демонстрируем in vitro свидетельств, предполагающих, что закрытая экспрессия VSNL1 может быть ответственной за потерю позвоночника, наблюдаемую у мышей, лишенных Helios.

    Abstract

    В настоящее время молекулярные, электрофизиологические и структурные исследования выделяют несколько нейронных подтипов в гиппокампе. Однако точные механизмы развития, которые приводят к такому разнообразию, до сих пор неизвестны.Здесь мы показываем, что изменения в конкретной субпопуляции нейронов гиппокампа во время развития специфически влияют на гиппокампально-зависимую пространственную память. Мы наблюдали, что генетическая делеция фактора транскрипции Helios у мышей, которая специфически экспрессируется в развивающихся кальбиндин-позитивных пирамидных нейронах СА1 гиппокампа (CB-CA1-PN), вызывает у взрослых изменения, влияющие на пространственную память. У тех же мышей синаптическая пластичность CA3-CA1, плотность и морфология шипов у взрослых CB-CA1-PN были серьезно нарушены.Эксперименты по RNAseq в развивающемся гиппокампе выявили аберрантное увеличение экспрессии Visinin-подобного белка 1 (VSNL1) в гиппокампе, лишенном Helios. Это аберрантное увеличение уровней VSNL1 было локализовано в CB-CA1-PN. Нормализация уровней VSNL1 в CB-CA1-PN, лишенных Helios, спасла потерю позвоночника in vitro . Наше исследование идентифицирует новый и специфический молекулярный путь развития, вовлеченный в созревание и функцию подтипа пирамидных нейронов CA1.

    Ключевые слова

    Долгосрочная потенциация

    VSNL1

    Гиппокамп

    Память

    Развитие

    Дендритные шипы

    Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

    Просмотр аннотации

    © 2019 Авторы.Опубликовано Elsevier Inc.

    Рекомендуемые статьи

    Цитирующие статьи

    Дефицит Helios предрасполагает к дифференцировке CD4 + Foxp3- Т-клеток в регуляторные Т-клетки периферического происхождения

    Ключевые точки

    • Helios у всех мышей с дефицитом Helios клетки не развивают аутоиммунитет.

    • Хотя Ag-специфические Helios - / - CD4 + Т-клетки обычно праймируются, они становятся толерантными.

    • клетки pTreg генерируются в отсутствие Helios и опосредуют толерантное состояние.

    Abstract

    Фактор транскрипции Helios экспрессируется в большом проценте Foxp3 + регуляторных T (Treg) -клеток и необходим для поддержания их супрессивного фенотипа, как у мышей с селективным дефицитом Helios в Treg-клетках. спонтанно развиваются аутоиммунные заболевания. Однако мыши с дефицитом Helios во всех Т-клетках не проявляют аутоиммунитета, несмотря на дефект супрессорной функции их популяции Treg-клеток, что позволяет предположить, что Helios также функционирует в не-Treg-клетках.Хотя Helios экспрессируется в небольшом подмножестве CD4 + Foxp3 - и CD8 + Т-клеток и его экспрессия повышается при активации Т-клеток, его функция в не-Treg-клетках остается неизвестной. Чтобы изучить функцию Helios в Т-клетках CD4 + Foxp3 -, мы перенесли Helios-достаточные или дефицитные наивные Т-клетки CD4 + Foxp3 - TCR нормальным реципиентам и исследовали их способность реагировать на их родственный Ag.Неожиданно Helios-дефицитные Т-клетки CD4 + размножались и дифференцировались в эффекторы, продуцирующие цитокины Th2 или Th3, аналогично трансгенным CD4 + Т-клеткам дикого типа. Однако примированные Helios-дефицитные клетки не смогли размножаться при вторичной стимуляции Ag. Толерантное состояние Helios-дефицитных Т-клеток памяти не было присуще клеткам, но было обусловлено небольшой популяцией Helios-дефицитных наивных Т-клеток, которые дифференцировались в Ag-специфические периферические Treg-клетки, которые подавляли ответную реакцию в Ag-специфических манера.Эти данные демонстрируют, что Helios играет роль в определении судьбы Т-лимфоцитов CD4 + .

    Введение

    Регуляторные T (Treg) клетки являются критическими негативными регуляторами иммунной активации, играющими важную роль в поддержании самотолерантности, а также толерантности к комменсальной микробиоте. Treg-клетки, определяемые экспрессией главного регулятора Foxp3, могут возникать в тимусе в ответ на сильные сигналы комплексов собственный пептид-MHC, представленные эпителиальными клетками тимуса, но также способны дифференцироваться от наивных Т-клеток in vitro при активации в наличие TGF-β и IL-2 (1–3) и на периферии in vivo в различных условиях (4–7).Относительный состав и функциональное значение клеток Treg (tTreg) тимического происхождения и клеток Treg периферического происхождения (pTreg) в поддержании иммунной толерантности неизвестны и остаются темой текущих исследований.

    Фактор транскрипции Helios, член семейства белков цинковых пальцев Ikaros, известен своей экспрессией в клетках Treg (~ 70% клеток Treg), и мы ранее предположили, что экспрессия Helios дифференцирует клетки tTreg от клеток pTreg ( 8). Более того, используя мышей с двойным репортером Foxp3 / Helios, мы недавно продемонстрировали, что Treg-клетки Helios - не являются предшественниками Treg-клеток Helios + , а представляют собой отдельную популяцию с отличным профилем экспрессии генов и репертуаром TCR (9).Мы также продемонстрировали, что Treg-клетки Helios - более нестабильны, легче теряют экспрессию Foxp3 в лимфопенических условиях и имеют пониженную супрессивную функцию против аутореактивных Т-клеточных ответов. Функциональная роль Helios в Treg-клетках Helios + заключается в придании стабильности Treg-клеткам в активированном эффекторном состоянии (10). У мышей с делецией Helios ( lkzf2 ), управляемой Foxp3-Cre, развивается медленно прогрессирующее аутоиммунное заболевание, характеризующееся спленомегалией, большим количеством В-клеточных фолликулов и пангипергаммаглобулинемией, что демонстрирует критическую роль фактора транскрипции в поддержании определенных функций подавления Treg-клеток. функции, особенно Т-фолликулярных регуляторных клеток (10, 11).Однако Kim et al. (11) пришли к выводу, что Treg-клетки были нестабильными из-за нарушения оси IL-2 – STAT5 у этих мышей. Мы также наблюдали дефект стабильности эффекторных клеток Treg у этих мышей, но пришли к выводу, что дефект был результатом снижения экспрессии Bcl-2. Нам не удалось показать каких-либо различий в пути STAT5 в Helios-дефицитных Treg-клетках (A.M. Thornton и E.M. Shevach, неопубликованные наблюдения), а механизм, с помощью которого Helios поддерживает стабильность в Treg-клетках, остается плохо определенным.

    Напротив, мыши с управляемой CD4-Cre делецией lkzf2 лишены аутоиммунного фенотипа (ссылка 8 и AM Thornton и EM Shevach, неопубликованные наблюдения), что является неожиданным результатом, учитывая, что эти мыши не обладают достаточным количеством Helios Treg-клетки. Однако экспрессия Helios может быть обнаружена в ~ 5% Т-клеток CD4 + Foxp3 - у мышей C57BL / 6 дикого типа (WT). Эти наблюдения привели нас к гипотезе, что экспрессия Helios в CD4 + Foxp3 - Т-клетках может играть необходимую роль в инициации или поддержании аутоиммунной активации.Фактически, в нескольких исследованиях было высказано предположение, что экспрессия Helios связана с состоянием активации или силой доставляемого антигенного сигнала как для Treg-клеток, так и для всех клеток CD4 + (12, 13).

    Основная цель этого исследования состояла в том, чтобы охарактеризовать функциональную роль Helios в активации и дифференцировке Т-клеток CD4 + Foxp3 - с использованием мышей lkzf2 fl / fl × CD4-Cre. В соответствии с предыдущим исследованием (14) мы обнаружили, что экспрессия Helios связана с начальным размножением и дифференцировкой после Ag-специфического прайминга in vivo, но не требуется для них.Неожиданно мы обнаружили, что Ag-специфические Helios-дефицитные Т-клетки CD4 + размножались и дифференцировались в эффекторы, продуцирующие цитокины, аналогично Т-клеткам WT CD4 + . Однако затем эти клетки становились толерантными и не реагировали на рестимуляцию in vivo. Состояние толерантности было внеклеточным и опосредовано небольшим количеством Ag-специфичных клеток pTreg. Подавляющая функция этих клеток pTreg была Ag-специфичной, поскольку они подавляли ответы только на свой родственный Ag, но не на неродственный Ag.Взятые вместе, наши эксперименты предполагают, что усиление экспрессии Helios во время активации наивных Т-клеток контролирует соотношение эффекторных клеток и клеток pTreg, что имеет критические последствия для устойчивости ответа клеток памяти. Эта повышенная склонность Helios-дефицитных CD4 + Т-клеток к развитию в клетки pTreg может привести к увеличению количества клеток pTreg, специфичных для аутоантигенов, у мышей lkzf2 fl / fl × CD4-Cre, которые защищают их от развития. аутоиммунного заболевания, даже в присутствии дефектных клеток tTreg с дефицитом Helios.

    Материалы и методы

    Животные

    Мыши C57BL / 6 были приобретены у Charles River. Ранее нами было получено мышей Ikzf2 fl / fl (8). Этих мышей скрещивали с мышами CD4-Cre , полученными Национальным институтом аллергии и инфекционных заболеваний (NIAID) и содержавшимися по контракту с Taconic Biosciences (Germantown, NY), для получения мышей Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre. Затем мышей Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre скрещивали с мышами OT-II × Foxp3 GFP для получения мышей OT-II-Foxp3 GFP × Ikzf2 fl / fl CD4-Cre.Трансгенные мыши OT-II TCR и мыши-репортеры Foxp3 GFP были также получены NIAID и содержались по контракту с Taconic Biosciences. Конгенные мыши F1 SAP - / - были любезно предоставлены доктором П. Шварцбергом (NIAID, Национальные институты здравоохранения). Вирус лимфоцитарного хориоменингита (LCMV) GP 66–77 -специфические TCR-трансгенные мыши SMARTA (15) были первоначально получены из Института аллергии и иммунологии Ла-Холья, а затем скрещены в Национальных институтах здравоохранения с мышами RAG1 - / - которые поддерживались для NIAID по контракту с Taconic Biosciences.В нашей лаборатории мышей SMARTA × RAG - / - были скрещены с мышами B6.SJL (CD45.1). Мыши B6.SJL, RAG1 - / - , B6.SJL OT-II RAG1 - / - и C57BL / 6J × B6.SJL F1 были получены NIAID и содержались Taconic Biosciences. Во всех экспериментах использовались как самцы, так и самки мышей. Все протоколы для животных, использованные в этом исследовании, были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных NIAID.

    Абс и реагенты

    Использовали следующие окрашивающие реагенты.Аллофикоцианин eFluor780 против CD4 (RM4-5), Pacific Blue против CD4 (RM4-5), аллофикоцианин против Helios (22F6), FITC против Foxp3 (FJK-16s), e450 против Foxp3 (FJK-16s), Alexa Fluor 700 анти-B220 (RA3.6B2), аллофикоцианин анти-Fas (15A7), e450 анти-B220 (RA3.6B2), аллофикоцианин анти-PD-1 (J43), аллофикоцианин eFluor 780 Fixable Viability Dye и FITC антибактериальный -Helios (22F6) были приобретены в eBioscience (Сан-Диего, Калифорния). Аллофикоцианин анти-CD45RB (C636-16A), Alexa Fluor 700 анти-CD45.2 (104), PerCP Cy5.5 анти-CD45.1 (A20), BV510 анти-CD44 (IM7), BV421 анти-CXCR5 (L138D7), аллофикоцианин анти-CD45.1 (A20), BV650 анти-CD25 (PC61), BV421 анти-CD4 (RM4 -5), BV510 анти-IgD (11-26c.2a), PE анти-GL7 (GL7), e450 anti-B220 (RA3.6B2), аллофикоцианин анти-CD44 (IM7), FITC анти-CD8 (S3-6.7 ), Огненный анти-CD4 (RM4-5), BV421 анти-IFN-γ (XMG1.2), PE анти-IL-4 (11B11), PE анти-CD4 (RM4-5), PE-Cy7 анти-CD4 (RM4-5), PE-анти-CD69 (h2.2F3) и PE-Cy7-анти-CD279 (29F.1A12) были приобретены у BioLegend (Сан-Диего, Калифорния).Аллофикоцианин против CD62L (MEL14) и PE против CD44 (IM7) был приобретен у BD Biosciences (Сан-Хосе, Калифорния). PerCP eFluor 710, аннексин V и PE-Cy7 Ki-67 (SolA15) были приобретены у Invitrogen (Waltham, MA). Набор буфера для окрашивания eBioscience Foxp3 / транскрипционный фактор использовали для внутриклеточного окрашивания. Клетки культивировали в полной RPMI (cRPMI; RPMI 1640 с добавлением 10% инактивированной нагреванием FCS, 100 мкг / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина, 2 мМ l-глутамина, 10 мМ HEPES, 0,1 мМ заменимых аминокислот, 1 мМ пируват натрия и 50 мкМ 2-ME).Пептид LCMV GP66–77 был произведен на собственном предприятии (Отдел синтеза и анализа пептидов, Отдел исследовательских технологий, NIAID). Белок и пептид OVA (323–339) были получены от InvivoGen (Сан-Диего, Калифорния). SRBC были получены от Lampire Biological (Эверетт, Пенсильвания). Наборы для ELISA анти-OVA Ig были получены от Chondrex (Редмонд, Вашингтон).

    Адаптивный перенос и иммунизация

    Для экспериментов по адоптивному переносу 0,25–1 × 10 6 FACS-отсортированные CD4 + CD44 lo CD45RB hi Foxp3-GFP - Т-клетки из Ikzf2 CD4-Cre × OT-II-Foxp3 GFP или контрольным мышам CD4-Cre × OT-II Foxp3 GFP вводили ретроорбитально в C57BL / 6J × B6.Получатели SJL F1 или получатели SAP - / - F1, как указано. На следующий день мышей-реципиентов иммунизировали подкожно. с 25 мкг OVA в CFA на каждый бок, или мышей иммунизировали i.p. со 100 мкг OVA в квасцах. В некоторых экспериментах, как указано, s.c. иммунизации на каждый фланг вводили снова на 10 день 25 мкг OVA в IFA или 25 мкг OVA и 10 мкг пептида LCMV (GP66–77) в IFA. В некоторых экспериментах мыши-реципиенты получали наивный CD45.1 + OT-II RAG1 - / - или CD45.1 + SMARTA RAG1 - / - клеток на 9 день перед второй иммунизацией на 11 день. Для иммунизации SRBC 1–2 × 10 8 SRBC вводили внутрибрюшинно. у мышей Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre или Ikzf2 fl / fl , и селезенки собирали на 7 день после инъекции. Для анализа внутриклеточных цитокинов клетки дренирующих узлов стимулировали в течение 4 ч коктейлем для стимуляции клеток (eBioscience) перед фиксацией и окрашиванием. Для определения OVA-специфических IgG1 и IgE 100 мкл крови брали из сердечной пункции на 6 день после иммунизации квасцами OVA.

    Устная переносимость

    Наивный CD4 + Foxp3-GFP - CD44 lo CD45RB hi Т-клетки были отсортированы по FACS из Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre OT-II GFP3 GFP3 GFP3 CD4-Cre × OT-II Foxp3 GFP (1 × 10 6 ) и вводили ретроорбитально реципиентам C57BL / 6J × B6.SJL F1. Мышам давали воду с добавлением 1,5% OVA в течение 7 дней, меняя воду каждые 2 дня.

    Анализ стимуляции и выживаемости in vitro

    Всего 1 × 10 6 FACS-отсортированных CD4 + Foxp3-GFP - CD44 lo CD45RB hi Т-клеток из Ikzf2 fl / fl CD4-Cre OT-II Foxp3 GFP или CD4-Cre × OT-II Foxp3 GFP мышей переносили в C57BL / 6J × B6.Реципиентов SJL F1 и затем иммунизировали OVA / CFA таким же образом, как описано. Через четыре дня после иммунизации дренирующие лимфатические узлы (LN) собирали и объединяли из каждой группы переноса и FACS-сортировали для перенесенных клеток CD45.2 + OT-II. Клетки культивировали в течение 24 ч в cRPMI с дендритными клетками (DC), собранными от мышей C57BL / 6 в соотношении 1:10 в отсутствие или в присутствии 1 мкМ пептида OVA. Клетки собирали через 24 часа и анализировали с помощью проточной цитометрии на активацию и выживаемость клеток.

    Индуцированная in vitro конверсия Treg-клеток

    Всего 3 × 10 5 FACS-отсортированных CD4 + CD25 - CD44 lo CD45RB hi T-клеток из Ikz2 fl / fl- × CD4 Cre или CD4-Cre контрольных мышей культивировали в cRPMI с 3 × 10 4 DC и реагентами в следующих концентрациях, если не указано иное: 1 мкг / мл анти-CD3 (145-2C11), 2 мкг / мл анти- IL-2 (S4B6), 50 Ед / мл рекомбинантного человеческого IL-2 (rhIL-2) и 1 нг / мл TGF-β.Через 3 дня клетки окрашивали красителем eBioscience Fixable Viability Dye eFluor 780 и анализировали внутриклеточную экспрессию Foxp3 и Helios среди живых клеток с помощью проточной цитометрии.

    Статистический анализ

    Призма 7.0 (программное обеспечение GraphPad) использовалась для создания графиков и выполнения статистического анализа. Статистическая значимость между двумя группами определялась с помощью теста Стьюдента t . Статистическая значимость установлена ​​на уровне * p <0.05, ** p <0,01, *** p <0,001 и **** p <0,0001.

    Результаты

    Экспрессия Helios в Т-клетках

    Фактор транскрипции Helios преимущественно экспрессируется в Treg-клетках Foxp3 + , но мы отметили, что небольшой процент клеток CD4 + Foxp3 - у нормальных, необработанных мышей также экспрессируют Helios (рис. 1А). Сообщалось, что Helios является общим маркером активации (12, 13), а в другом отчете сделан вывод, что Helios связан с дифференцировкой Th3 и T-фолликулярных помощников (T FH ), но не требуется для нее (14).Анализ клеток CD4 + Foxp3 - показал, что клетки Helios + были преимущественно CD44 hi , маркером Т-клеток памяти (T M ), тогда как только небольшой процент клеток Helios - клетки экспрессировали CD44 (фиг. 1А). Используя маркеры T FH CXCR5 и PD-1, анализ показал, что клетки T FH принадлежали популяции Helios + .

    РИСУНОК 1.

    Helios связан с маркером Т-клеток памяти (T M ) и T FH клеток.( A ) Спленоциты от 10-недельных мышей вводили в Т-клетки CD4 + и анализировали на экспрессию Foxp3 и Helios. Foxp3 - Helios - и Foxp3 - Клетки Helios + были проанализированы на предмет экспрессии маркеров CD44 (слева) и T FH CXCR5 и PD-1 (справа). ( B ) Наивные CD4 + Т-клетки (GFP - CD44 lo CD45RB hi ) были выделены из мышей OT-II Foxp3 GFP и адоптивно перенесены в конгенных реципиентов F1, которые были иммунизированы следующим образом: день с указанными адъювантами.Свежесортированные клетки (слева) и клетки CD45.2 + , полученные от конгенных хозяев на 3 и 6 дни после иммунизации (в центре и справа), анализировали на экспрессию Foxp3 и Helios.

    Чтобы формально проверить связь экспрессии и активации Helios, наивные Т-клетки (CD4 + GFP - CD44 lo ) (дополнительный рисунок 1A) были очищены от мышей OT-II Foxp3-GFP и были адоптивно перенесены в конгенных мышей, а затем иммунизировали. Иммунизация пептидом OVA в CFA или квасцах индуцировала экспрессию Helios в подмножестве перенесенных клеток, которые остались Foxp3 - (рис.1Б). Вместе эти результаты подтверждают, что Helios связан с памятью и эффекторными субпопуляциями T FH и может временно индуцироваться в наивных Т-клетках при праймировании in vivo.

    Ikzf2

    fl / fl × CD4-Cre Мыши лишены аутоиммунного фенотипа

    Ранее мы сообщали, что у мышей со специфическим для Treg-клеток дефицитом Helios (Ikzf2 fl / fl × Foxp3-Cre) медленно развивается прогрессирующий активация иммунной системы и признаки системного аутоиммунитета (10). Однако ранее мы наблюдали, что когда мышей Ikzf2 fl / fl скрещивали с мышами CD4-Cre, таким образом, Helios был удален из Treg-клеток, CD4 + Foxp3 - Т-клеток и CD8 + клеток. , полученные мыши не обладали аутоиммунным фенотипом, наблюдаемым у мышей Ikzf2 fl / fl × Foxp3-Cre, даже в возрасте 1 года.Дальнейшая характеристика этих мышей не выявила различий в абсолютном количестве спленоцитов (данные не показаны) или процентном содержании Treg-клеток, наблюдаемых у мышей Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre (фиг. 2A). В то время как активированные CD4 + Foxp3 - и CD8 + Т-клетки могут быть идентифицированы уже в возрасте 2 месяцев у мышей Ikzf2 fl / fl × Foxp3-Cre (10), уровень CD44 hi Клетки CD62L lo оставались аналогичными контрольным мышам у мышей Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre (рис.2А). У непраймированных мышей Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre процент клеток T FH был немного выше, но это увеличение не было статистически значимым. Мы действительно отметили небольшое статистически значимое увеличение общего количества В-клеток зародышевого центра (GC) у мышей Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre. Однако не было отмечено никаких различий в процентном содержании клеток T FH (фиг. 2B) или абсолютном количестве клеток GC B (фиг. 2C) при иммунизации SRBC. Кроме того, гистологически лимфоцитарные инфильтраты не наблюдались во множественных нелимфоидных органах в возрасте до 1 года (данные не показаны).Взятые вместе, похоже, что отсутствие экспрессии Helios в CD4 + Foxp3 - T-клетках подавляет их потенциал индуцировать аутоиммунитет в присутствии дефектных Helios-дефицитных Treg-клеток у мышей Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre. и что активация Helios в CD4 + Foxp3 - Т-клетках необходима для устойчивой иммунной активации, необходимой для аутоиммунитета.

    РИСУНОК 2.

    Мыши с дефицитом Helios не обнаруживают серьезных дефектов. ( A ) Спленоциты мышей Ikzf2 fl / fl и Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre в возрасте 4–6 месяцев вводили в клетки CD4 + Т-клеток и анализировали на частоту Treg, T M и T FH , а также количество GC B-клеток (B220 + IgD lo Fas + GL7 + ).( B ) Мышей Ikzf2 fl / fl и Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre иммунизировали i.p. с SRBC. Селезенки собирали через 8 дней после иммунизации и анализировали на экспрессию маркеров T FH среди CD4 + Foxp3 - Т-клеток ( C ) и на количество GC B-клеток.

    Helios не требуется для Ag-специфической экспансии и дифференцировки CD4

    + Foxp3 - Т-клеток

    Чтобы проанализировать роль дефицита Helios в активации наивных Т-клеток, мы использовали экспериментальную адоптивную систему переноса, в которой TCR трансгенные, Helios-дефицитные, наивные CD4 + Т-клетки выделяли и переносили в конгенного хозяина с последующей иммунизацией родственным Ag.Мы скрестили мышей Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre с мышами OT-II Foxp3-GFP для создания мышей OT-II Foxp3 GFP Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre, которые использовались в качестве доноров в нашем адаптивном переносе. система. Адоптивно перенесенные Helios-достаточные и Helios-дефицитные клетки OT-II относительно пролиферировали после иммунизации (фиг. 3A), и мы не увидели дефекта в способности Helios-дефицитных клеток OT-II активироваться, как измерено с помощью CD44, CD62L, и экспрессия CD69 (фиг. 3B). Способность Helios-дефицитных клеток OT-II дифференцироваться в функциональные клетки Th2 и Th3 определяли путем оценки продукции IFN-γ и IL-4 после иммунизации OVA и CFA или OVA и квасцами, соответственно.Опять же, мы не обнаружили дефектов в Helios-дефицитных клетках OT-II, поскольку они продуцировали уровни IFN-γ и IL-4, сравнимые с Helios-достаточными клетками (рис. 3C). После иммунизации Helios-дефицитные клетки OT-II также были способны дифференцироваться в эффекторный фенотип T FH (фиг. 3B). Возможно, что Helios-дефицитные клетки OT-II способны экспрессировать клеточные маркеры T FH , демонстрируя при этом функциональный дефект в обеспечении помощи В-клеткам. Чтобы проверить эту возможность, Helios-достаточные или Helios-дефицитные клетки OT-II были адоптивно перенесены в конгенных мышей SAP - / - , у которых эндогенные Т-клетки неспособны образовывать длительные межклеточные соединения. контакты, необходимые для оказания помощи В-клеткам (16).Адаптивный перенос этим мышам гарантирует, что вся дифференцировка В-клеток и рекомбинация с переключением класса является результатом перенесенных SAP-достаточных клеток OT-II. Опять же, мы не наблюдали дефекта в способности Helios-дефицитных Т-клеток дифференцироваться в клетки T FH (рис. 3D), индуцировать дифференцировку GC B-клеток (рис. 3E) или оказывать помощь, ведущую к продукции переменные класса, специфичные для OVA Abs (рис. 3F). Таким образом, наши результаты подтверждают выводы Serre et al. (14) и предполагают, что отсутствие Helios не влияет на праймирование Т-клеток CD4 + или эффекторную дифференцировку.

    РИСУНОК 3. На активацию

    Т-клеток не влияет дефицит Helios. ( A ) Очищенные наивные CD4 + Т-клетки (GFP - CD44 lo CD45RB hi ) из Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre OT-II Foxp3 GFP или контрольные мыши были адоптированными мышами. переданы конгенным реципиентам F1. Мышей-реципиентов иммунизировали подкожно. на следующий день с OVA / CFA. Дренирующие LN собирали на 4, 8 и 13 дни после иммунизации, и общее количество CD45.2 + клеток ОТ-II и ( B ) частота эффекторных Т, CD69 + и Т FH клеток среди клеток ОТ-II были проанализированы с помощью FACS. ( C ) Наивные клетки OT-II адоптивно переносили мышей-реципиентов, иммунизированных OVA в CFA (п / к) или OVA в квасцах (i.p.). Продукцию цитокинов оценивали по внутриклеточному окрашиванию после 4-часовой стимуляции PMA / иономицином. ( D ) Наивные клетки OT-II переносили конгенным мышам SAP - / - , которых иммунизировали OVA в квасцах i.п. на следующий день. Спленоциты анализировали на 8-й день после иммунизации на дифференцировку клеток T FH перенесенных клеток OT-II и дифференцировку ( E ) GC B-клеток. ( F ) Сыворотку собирали у мышей SAP - / - на 8 день, и OVA-специфический IgG1 измеряли с помощью ELISA.

    Helios необходим для размножения Т-клеток при вторичной стимуляции in vivo

    Далее мы исследовали роль Helios в ответных реакциях на воспоминания. Наивные Т-клетки OT-II были адоптивно перенесены, как и раньше, и мышей-реципиентов иммунизировали OVA в CFA.На 10 день после иммунизации мышам проводили вторую иммунизацию OVA в IFA, и дренирующие LN собирали через 4 дня для анализа пролиферации перенесенных клеток OT-II. Общее количество Helios-дефицитных Т-клеток OT-II было заметно снижено по сравнению с Helios-достаточными контролями, что указывает на критическую роль Helios в повторной экспансии Т-клеток памяти CD4 + (фиг. 4A).

    РИСУНОК 4.

    Helios-дефицитные Т-клетки не могут быть реактивированы. ( A ) Наивные CD4 + Т-клетки были очищены от Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre OT-II Foxp3 GFP или контрольных мышей и адоптивно перенесены в конгенных реципиентов F1.Мышей-реципиентов иммунизировали подкожно. на следующий день с OVA / CFA и усиленной подкожной инъекцией с OVA / IFA на 10-й день после иммунизации. Дренирующие LN собирали на 10 день (перед повторной имитацией) и на 14 и 17 дни, и общее количество клеток CD45.2 + OT-II анализировали с помощью FACS. ( B ) Схема эксперимента рестимуляции ОТ-II in vitro. Наивные клетки OT-II адоптивно переносили конгенным мышам F1, которых иммунизировали, как прежде. На 4-й день дренирующие LN объединяли и клетки CD45.2 + OT-II выделяли с помощью FACS и культивировали с DC с или без OVAp (323–339).( C ) Через 24 часа культуру клеток OT-II собирали и анализировали на активацию клеток и гибель клеток с помощью FACS.

    Одним из объяснений неспособности Helios-дефицитных клеток ОТ-II к росту является то, что они были более восприимчивы к вызванной активацией гибели клеток при вторичном заражении. Чтобы исследовать ответы дефицитных клеток после первичного заражения, наивные OT-II CD4 + Т-клетки были адоптивно перенесены, как и раньше, и мышей иммунизировали OVA в CFA.На 4-й день после иммунизации дренирующие LN собирали и перенесенные клетки OT-II выделяли, а затем повторно стимулировали in vitro, как показано (фиг. 4B). In vitro Helios-дефицитные Т-клетки были активированы аналогично WT-клеткам, что было измерено по экспрессии CD44, и не показало увеличенной доли апоптотических или нежизнеспособных клеток, что было измерено путем окрашивания аннексином V и красителем жизнеспособности (фиг. 4C). Подобные данные наблюдались в присутствии или в отсутствие IL-2. Анализ рестимуляции in vitro также проводили на 7-й день после иммунизации, при этом никаких различий не отмечалось (данные не показаны).Таким образом, примированные клетки, в которых отсутствует Helios, по-видимому, нормально активируются и не проявляют усиленного апоптоза.

    Мы также проанализировали Helios-дефицитные Т-клетки OT-II на предмет различных поверхностных маркеров на 10-й день после иммунизации, а также на 4-й день после вакцинации. Нам не удалось найти различий в экспрессии Fas, OX-40, CD30, CD27 или CD120b. Кроме того, мы не обнаружили различий в экспрессии CD73 и FR4, которые, как сообщается, определяют анергические CD4 + Т-клетки (17) (данные не показаны).Наконец, мы не обнаружили различий в экспрессии внутриклеточного Bcl-2 или активной каспазы-3, двух регуляторов апоптоза (данные не показаны). Таким образом, отсутствие пролиферации в Helios-дефицитных Т-клетках ОТ-II при рестимуляции не было присуще клеткам.

    Небольшой процент Helios-дефицитных Т-клеток превращается в клетки pTreg после праймирования in vivo

    Поскольку реакция примированных Helios-дефицитных клеток OT-II была нормальной при рестимуляции in vitro, оставалась возможность, что факторы в локальной среде в дренирующие LN предотвращали экспансию примированных Helios-дефицитных клеток OT-II.Поскольку клетки pTreg не экспрессируют Helios у нормальных мышей, одна из возможностей заключается в том, что усиленная генерация клеток pTreg из Helios-дефицитных Ag-специфических Т-клеток может объяснить дефект пролиферации, наблюдаемый после вторичной стимуляции. Чтобы проверить эту идею, мы оценили дифференцировку наивных Helios-дефицитных клеток OT-II в клетки pTreg после адоптивного переноса и иммунизации OVA в CFA. Неожиданно мы наблюдали повышающую регуляцию Foxp3-GFP небольшой, но постоянной фракцией Helios-дефицитных клеток OT-II на 11 день после иммунизации, но не клетками WT OT-II (рис.5А). Динамика адоптивного переноса клеток OT-II с последующей иммунизацией OVA / CFA показала, что активация Foxp3 может наблюдаться среди Helios-дефицитных клеток OT-II уже на 4-й день после иммунизации OVA / CFA и достигла пика частоты на 10-й день. , тогда как Helios-достаточные OT-II клетки фактически не проявляли повышающей регуляции Foxp3 в любой момент времени (Fig. 5B). Мы также исследовали способность Helios-дефицитных CD4 + Т-клеток дифференцироваться в клетки pTreg на модели оральной толерантности и после иммунизации OVA / IFA, двух моделей, которые, как известно, индуцируют клетки pTreg (18–20).В модели оральной толерантности наивные Т-клетки OT-II были адоптивно перенесены, и мышам давали OVA с питьевой водой. На 7 день после переноса перенесенные клетки анализировали на преобразование в клетки Foxp3 + pTreg. Как в мезентериальном лимфатическом узле, так и в пейеровских бляшках небольшой процент клеток WT превращался в клетки pTreg, как и ожидалось (рис. 5C). Более того, более высокий процент Helios-дефицитных клеток превращается в клетки pTreg. Для модели IFA наивные OT-II CD4 + Т-клетки были адоптивно перенесены, и мышей иммунизировали OVA / IFA.Как и в случае OVA / CFA, клетки pTreg были получены из клеток с дефицитом Helios, но не из клеток WT (фиг. 5D). Следовательно, Helios, по-видимому, контролирует определение судьбы Т-клеток CD4 + , и присутствие клеток pTreg, генерируемых из Helios-дефицитных клеток OT-II, может объяснять отсутствие пролиферации, наблюдаемой после вторичной стимуляции.

    РИСУНОК 5.

    Helios-дефицитные клетки OT-II дифференцируются в клетки pTreg. ( A ) Наивные CD4 + Т-клетки из Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre OT-II Foxp3 GFP или контрольных мышей адоптивно переносили конгенным реципиентам F1.Мышей-реципиентов иммунизировали подкожно. на следующий день с OVA / CFA. Дренирующие LN собирали на 11 день или ( B ) в указанные дни после иммунизации, стробировали по CD45.2 + клеткам OT-II и анализировали на экспрессию Foxp3. ( C ) Наивные Т-клетки OT-II адаптивно переносили конгенным реципиентам F1. Мышам-реципиентам давали OVA в питьевой воде ad libitum в течение 7 дней. Экспрессию Foxp3 в клетках CD45.2 + OT-II измеряли в брыжеечных лимфатических узлах и пейеровских пятнах.( D ) Наивные клетки OT-II адоптивно переносили, как в (A), и мышей-реципиентов иммунизировали подкожно. на следующий день с OVA / IFA. Экспрессия Foxp3 в клетках CD45.2 + OT-II была проанализирована из дренирующих LN на 7 день.

    Повышенная конверсия клеток pTreg не является следствием дифференциальной чувствительности к стимуляции TGF-β, IL-2 или TCR in vitro

    Дифференциация наивных T-клеток в Treg-клетки требует активации в присутствии TGF-β и IL-2 (1, 3). Чтобы проверить, вызвано ли повышенное превращение Helios-дефицитных Т-клеток OT-II в Treg-клетки in vivo из-за повышенной чувствительности к передаче сигналов TGF-β, мы провели серию анализов дифференцировки индуцированных Treg (iTreg) клеток in vitro с титрованными концентрациями TGF-β.Мы сравнили способность WT CD4 + Foxp3 - и Helios-дефицитных CD4 + Foxp3 - наивных Т-клеток дифференцироваться в Foxp3 + Treg-клетки in vitro после стимуляции с помощью DC и растворимых анти-CD3 в наличие ИЛ-2 в течение 4 дней (фиг. 6А). Хотя экспрессия Foxp3 увеличивалась с увеличением концентрации TGF-β, наивные поликлональные CD4 Т-клетки, выделенные из мышей Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre, не проявляли повышенной способности дифференцироваться в клетки iTreg при любой концентрации TGF-β (рис. .6А).

    РИСУНОК 6.

    Helios-дефицитные CD4 Т-клетки не обладают дифференциальной чувствительностью к TGF-β, IL-2 или стимулу TCR. Очищенные наивные CD4 + Т-клетки (CD25 - CD44 lo CD45RB hi ) культивировали с DC и либо ( A ) IL-2 плюс указанные концентрации TGF-β, ( B ) нейтрализует антимышиный IL-2 (S4B6), TGF-β, и указанные концентрации rhIL-2 или ( C ) нейтрализуют антимышиный IL-2 (S4B6), rhIL-2, TGF-β и указаны концентрации растворимого анти-CD3.Экспрессию Foxp3 анализировали среди жизнеспособных клеток на 3-й день.

    Мы дополнительно протестировали способность Helios-дефицитных наивных Т-клеток дифференцироваться в клетки iTreg в условиях с ограниченной доступностью IL-2 или ограниченной стимуляцией TCR путем титрования концентрации IL-2. или анти-CD3 соответственно. Опять же, мы не смогли найти ни одной концентрации IL-2 (фиг. 6B) или анти-CD3 (фиг. 6C), для которой Helios-дефицитные Т-клетки дифференцировались в клетки iTreg с большей частотой по сравнению с их аналогами WT.Вместе эти результаты предполагают, что наблюдаемое увеличение конверсии клеток pTreg клетками OT-II с дефицитом Helios не связано с повышенной чувствительностью к сигналам TGF-β, IL-2 или TCR. Однако остается возможным, что один из этих факторов регулирует дифференцировку клеток pTreg in vivo, и мы не можем имитировать ситуацию in vivo in vitro или что другие неизвестные переменные могут влиять на превращение Helios-дефицитных клеток в клетки pTreg in vivo.

    Ag-специфические клетки pTreg, полученные in vivo из Helios-дефицитных клеток, демонстрируют Ag-специфическую супрессию

    Чтобы проверить, является ли присутствие небольшого процента Ag-специфичных pTreg-клеток ответственным за отсутствие пролиферации праймированных Helios-дефицитных Клетки OT-II после вторичной стимуляции Ag, мы выполнили последовательный перенос конгенно-меченых клеток OT-II, как показано на рис.7А. Подводя итог, CD45.2 Helios-достаточные или Helios-дефицитные клетки OT-II были адоптивно перенесены в хозяев F1 (CD45.1 × CD45.2), и мышей-реципиентов иммунизировали OVA / CFA на следующий день. На 9-й день после иммунизации были перенесены свежеотсортированные клетки WT CD45.1 OT-II с последующей иммунизацией OVA / IFA на 10-й день. На 14-й день исследовали дренирующие LN. Стратегия стробирования показана на дополнительном рисунке 1B. Как предварительно примированный WT CD45.2, так и только что перенесенный WT CD45.1 клетки OT-II размножались при иммунизации (фиг. 7B). Однако как ранее примированные Helios-дефицитные CD45.2, так и свежеперенесенные клетки WT CD45.1 OT-II не смогли размножаться при вторичной иммунизации. Важно отметить, что супрессия была специфичной для Ag, поскольку не было дефекта в способности недавно перенесенных Т-клеток SMARTA (трансгенных клеток TCR, специфичных для GP 66 –77 LCMV) на 9 день пролиферировать в ответ на иммунизацию GP . 66–77 в IFA (рис. 7C, 7D).Вместе эти результаты демонстрируют, что OVA-специфические клетки pTreg, которые возникают во время первичного ответа на Ag, способны подавлять опосредованную TCR стимуляцию и рестимуляцию.

    РИСУНОК 7.

    Генерация клеток pTreg в Helios-дефицитных клетках подавляет рестимуляцию специфическим для Ag образом. ( A ) Экспериментальная схема последовательной передачи OT-II. Наивные CD45.2 + клетки OT-II были адоптивно перенесены в конгенных мышей F1 (CD45.1 × CD45.2), которых иммунизировали.c. на следующий день с OVA / CFA. На 9-й день клетки CD45.1 + OT-II были перенесены в мышей-реципиентов с последующей иммунизацией OVA / IFA на 10-й день. ( B ) Дренирующие LN были собраны на 14-й день и пролиферация CD45.2. + и CD45.1 + клетки OT-II анализировали с помощью FACS. ( C ) Экспериментальная схема последовательной передачи OT-II / SMARTA. Как и в (C), клетки CD45.1 + SMARTA переносили на 9-й день, а затем подкожно. иммунизация OVA плюс GP66–77 в IFA.( D ) Дренирующие LN собирали на 14 день и анализировали пролиферацию клеток CD45.2 + OT-II и CD45.1 + клеток SMARTA.

    Обсуждение

    Фактор транскрипции Helios экспрессируется преимущественно в Treg-клетках Foxp3 + , но он также экспрессируется в небольшом проценте Т-клеток CD4 + Foxp3 - in vivo, которые обладают фенотипом памяти и временно индуцируется во время прайминга Ag наивных клеток. Наше наблюдение, что lkzf2 fl / fl × CD4-Cre не смогло развить аутоиммунный фенотип, тогда как у мышей lkzf2 fl / fl × Foxp3-Cre развился системный аутоиммунитет, убедительно свидетельствует о том, что экспрессия Helios в CD4 + Foxp3 - Т-клетки играют решающую роль в функции эффекторных Т-клеток.Чтобы понять роль Helios во время активации CD4 + Foxp3 - Т-клеток, мы использовали модельную систему, в которой Helios был дефицитным по Ag-специфическим CD4 + Т-клеткам. Парадоксально, но мы обнаружили, что Helios не требуется для размножения эффекторных клеток или дифференцировки до Th2 / Th3 фенотипов, но что примированные, Helios-дефицитные, Ag-специфические клетки являются толерантными и неспособны размножаться при рестимуляции. Толерантность не была присуща эффекторным Т-клеткам, но была вторичной по отношению к предрасположенности Helios-дефицитных Т-клеток к дифференцировке в клетки pTreg после примирования.Таким образом, недостаток Helios влияет на судьбу Т-клеток во время их первоначального ответа на стимуляцию Ag. В его отсутствие CD4 + Foxp3 - Т-клетки могут быть направлены в линию клеток pTreg и подавлять Ag-специфические эффекторные клетки той же специфичности.

    Лишь небольшой процент (3-5%) перенесенных CD4 + Foxp3 - Т-клеток конвертировался в клетки pTreg. Тем не менее, эти Ag-специфические клетки pTreg были мощными супрессорами роста как примированных клеток OT-II, так и наивных клеток OT-II.Таким образом, соотношение клеток pTreg к CD4 + Foxp3 - Т-клеткам (∼1: 20) оказывается достаточным для почти полного подавления экспансии эффекторных клеток. Анализы супрессии in vitro с использованием Ag-специфических tTreg-клеток показали, что полное подавление пролиферации также может наблюдаться при соотношении Treg: T-эффекторных клеток до 1:20 (21). Следует также отметить, что низкий процент клеток pTreg генерируется из поликлональных CD4 + Foxp3 - Т-клеток в модели переноса воспалительного заболевания кишечника (ВЗК), однако эти клетки pTreg, по-видимому, необходимы для дополнения tTreg. клеточно-опосредованное подавление в IBD и других моделях (22, 23).Кроме того, Korn et al. (19) показали, что у мышей, иммунизированных MOG-специфическим пептидом в отсутствие IL-6, либо посредством иммунизации в присутствии IFA, либо с использованием мышей с дефицитом gp130, развивается небольшой процент Ag-специфичных клеток pTreg ( 2%), которые защищают мышей от экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (EAE). Наконец, предрасположенность Ag-специфичных Helios-дефицитных CD4 + Foxp3 - Т-клеток к дифференцировке в клетки pTreg также наблюдалась в модели оральной толерантности in vivo, которая широко используется для изучения образования клеток pTreg (7, 24). .Хотя клетки pTreg могут быть сгенерированы из Helios-достаточных CD4 + Foxp3 - Т-клеток в соответствии с этим протоколом, более высокий процент клеток pTreg был получен из Helios-дефицитных CD4 + Foxp3 - Т-клеток.

    Было широко распространено мнение, что Treg-клетки, активируемые одним Ag, могут подавлять ответы на неродственные Ag в той же среде (так называемое «подавление стороннего наблюдателя»). Эта концепция в значительной степени была получена из тестов подавления in vitro. Недавние эксперименты нашей группы in vivo поставили под сомнение эту концепцию и продемонстрировали, что как Ag-специфические клетки iTreg, так и клетки tTreg, активируемые двойными импульсами DC с двумя разными Ag, могут подавлять только Ag-специфические наивные CD4 + Foxp3 - T клетки, специфичные для своего родственного Ag, но не неродственного Ag (25).Клетки pTreg, полученные из Ag-специфичных Helios-дефицитных Т-клеток CD4 + Foxp3 -, по-видимому, функционируют аналогичным образом, поскольку клетки pTreg, специфичные для OVA, не могут подавлять ответ Т-клеток SMARTA, даже если OVA -специфические клетки pTreg стимулировали в присутствии обоих Ag. Мы предположили, что механизм подавления, используемый клетками iTreg и tTreg in vivo, включает опосредованное Treg истощение комплексов пептид-MHC класса II с поверхности DC (25), но мы еще не исследовали механизмы, используемые клетками pTreg. генерируется из Helios-дефицитных Т-клеток.

    Клеточные и молекулярные факторы, которые контролируют образование клеток pTreg in vivo во время стимуляции Ag, остаются плохо изученными. В частности, неясно, почему почти во всех моделях только небольшой процент Т-клеток Foxp3 развивается в клетки Foxp3 + pTreg. Мы попытались определить, обладают ли Helios-дефицитные CD4 + T-клетки повышенной реактивностью на TGF-β, IL-2 или передачу сигналов TCR in vitro, но мы не смогли различить разницу между WT и Helios-дефицитными клетками в больших дозах. ответные исследования.

    Хотя было высказано предположение, что отсутствие воспалительных сигналов в некоторых моделях способствует индукции клеток pTreg (19, 20), в нашей системе переноса выбор адъюванта не влиял на генерацию клеток pTreg из Helios-дефицитных клеток.

    Функция Helios в Treg-клетках остается спорной, и доступные исследования не дают понимания потенциальной роли Helios в ингибировании образования pTreg-клеток из CD4 + Foxp3 - T-клеток.Исследования Kim et al. (11) предположили, что Helios необходим для поддержания стабильности Treg-клеток во время воспаления, воздействуя на путь STAT5. Напротив, мы не смогли идентифицировать дефекты передачи сигналов STAT5 в Helios-дефицитных Treg-клетках и предположили, что экспрессия Helios необходима для выживания активированных Treg-клеток, способствуя экспрессии Bcl-2 (10). Baine et al. (26) предположили, что Helios регулирует транскрипцию IL-2 в Treg-клетках и что принудительная экспрессия Helios в CD4 + Foxp3 - приводит к потере их способности продуцировать IL-2.Остается возможным, что временная экспрессия Helios во время активации регулирует продукцию IL-2, а делеция Helios приводит к локализованной продукции высоких концентраций IL-2, что способствует индукции клеток pTreg. Однако мы не наблюдали повышенного производства ИЛ-2 или усиленной пролиферации Helios-дефицитных CD4 + Foxp3 - Т-клеток, по крайней мере, in vitro, и Helios-дефицитные Ag-специфические клетки не демонстрируют усиленное размножение in vitro, когда грунтованный.

    Один важный вопрос, поднятый нашим исследованием, заключается в том, объясняет ли индукция клеток pTreg к аутоантигенам во время развития фенотип (или его отсутствие) у мышей lkzf2 fl / fl × CD4-Cre.Процентное и абсолютное количество Treg-клеток у этих мышей нормальное, но в настоящее время у нас нет маркеров, кроме Helios (27), которые, по нашему мнению, могут окончательно отличить pTreg-клетки от tTreg-клеток, чтобы определить, действительно ли lkzf2 fl / fl × CD4-Cre мышь обладает большей долей клеток pTreg. Мы перенесли наивные CD4 + Т-клетки от мышей Ikzf2 fl / fl × CD4-Cre мышам с дефицитом RAG в надежде, что они будут генерировать достаточное количество и компетентных клеток pTreg для защиты от IBD.Однако не было различий в течении или тяжести заболевания по сравнению с Helios-достаточными наивными клетками (данные не показаны). Haribhai et al. (22) продемонстрировали, однако, что одних только клеток pTreg недостаточно для подавления ВЗК; таким образом, увеличенного количества клеток pTreg, генерируемых из Helios-дефицитных Т-клеток CD4 + , будет недостаточно для подавления ВЗК. У мышей lkzf2 fl / fl × CD4-Cre также развивается EAE с течением заболевания, сравнимым с мышами WT, аналогично аналогичной активации и разрастанию, наблюдаемой при адоптивном переносе клеток OT-II (данные не показаны).Однако мы еще не исследовали, развили ли мыши lkzf2 fl / fl × CD4-Cre с EAE толерантность, которая проявлялась бы при повторном тестировании, поскольку у нас нет инструментов, чтобы окончательно определить, что состояние толерантности опосредуется Ag -специфические клетки pTreg.

    Наконец, недавно было продемонстрировано, что Helios экспрессируется во время развития волосковых клеток в улитке и что Helios необходим для функционального созревания окончательно дифференцированных наружных волосковых клеток (28).В сочетании с необходимостью Helios для поддержания эффекторной функции Treg-клеток и необходимостью Helios для предотвращения дифференцировки pTreg-клеток в клетках CD4 + Foxp3 - , эти исследования предполагают, что Helios играет фундаментальную роль в определении CD4 + Судьба Т-клеток.

    Раскрытие информации

    У авторов нет финансового конфликта интересов.

    Благодарности

    Мы благодарим К. Венга за сортировку методом проточной цитометрии.

    Сноски

    • Эта работа была поддержана Программой очных исследований Национального института аллергии и инфекционных заболеваний Национальных институтов здравоохранения.

    • Онлайн-версия этой статьи содержит дополнительные материалы.

    • Сокращения, использованные в этой статье:

      cRPMI
      полный RPMI
      DC
      дендритные клетки
      EAE
      экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит
      904 23 GC 904 24 воспалительный центр 904 24 GC 904 iTreg
      индуцированный Treg
      LCMV
      вирус лимфоцитарного хориоменингита
      LN
      лимфатический узел
      NIAID
      Национальный институт аллергии и инфекционных фоллических заболеваний
      904 Treg4 904 9024 Tregular 904 Treg Treg4 904 Treg 904 helper
      T M
      маркер Т-клеток памяти
      Treg
      регуляторный T
      tTreg
      Treg
      WT
      дикого типа.
    • Получено 2 апреля 2019 г.
    • Принято 3 мая 2019 г.

    ION Audio Helios - Часто задаваемые вопросы

    Helios - идеальный способ создать особое настроение с помощью красивого освещения и создания футуристических картин на стенах, а также насладиться ярким стереозвуком. Helios ™ имеет стереодинамики с автономным питанием, встроенные в привлекательный куполообразный корпус, который можно брать куда угодно, диаметром менее 7 дюймов и глубиной всего 1,5 дюйма в самой высокой точке.В этой статье рассматривается ряд часто задаваемых вопросов о ION Audio Helios.

    Часто задаваемые вопросы

    Что в коробке?

    В комплект поставки Helios входят следующие элементы:

    • Гелиос
    • Кабель Micro-USB
    • Стереокабель Aux 1/8 дюйма (3,5 мм)
    • Краткое руководство

    Какие размеры? Сколько весит Гелиос?

    Гелиосу 6 лет.93 дюйма x 6,93 дюйма x 1,69 дюйма и весит 1,04 фунта.

    Работает ли Helios от аккумулятора? На сколько хватает заряда батареи?

    Да! Helios может работать до 7,5 часов при работе только светодиодов без воспроизведения звука или до 5,5 часов при включенных светодиодах и воспроизведении звука на 50% громкости. Имейте в виду, что более высокий уровень громкости значительно сократит время автономной работы динамика Helios.

    Сколько времени нужно на зарядку аккумулятора?

    Требуется примерно 5.5, чтобы полностью зарядить Helios. Светодиод будет постоянно гореть красным, когда батарея заряжается, и гаснет, когда батарея полностью заряжена или адаптер не подключен.

    Можно ли заменить батарею пользователем?

    Батарея не подлежит замене пользователем. Если аккумулятор не заряжается или не держит заряд, обратитесь в службу технической поддержки ION Audio для получения дополнительной помощи.

    Сколько динамиков у Гелиоса?

    У Гелиоса 2 1.5-дюймовые вуферы.

    Может ли Helios совершать телефонные звонки и отвечать на них?

    Совершенно верно! Нажмите кнопку «Ответить на звонок» (слева от качельки регулировки громкости), чтобы ответить на звонок. Чтобы прервать телефонный звонок, нажмите и удерживайте кнопку.

    Будет ли Helios транслировать музыку с моего телевизора или компьютера?

    Можно, но потоковая передача по Bluetooth с компьютера или телевизора часто не так надежна, как потоковая передача со смартфона или планшета, поскольку обычно используется для устройств низкого уровня, таких как клавиатуры и мыши.Вы можете заметить трудности с сопряжением, пропадание звука или уменьшение диапазона при потоковой передаче с компьютера или телевизора. Настоятельно рекомендуется вести трансляцию со смартфона или планшета.

    Как подключить устройство Bluetooth к Helios?
    1. Нажмите и удерживайте кнопку Power в течение 2 секунд, чтобы включить Helios.
    2. Откройте настройки Bluetooth на нашем музыкальном устройстве (смартфоне, планшете и т. Д.)
    3. Подключиться к Гелиосу.
      Примечание: Если вашему устройству требуется код доступа или PIN-код, введите ноль (« 0 ») четыре раза.
    4. Воспроизводите музыку и регулируйте громкость с помощью регуляторов - / +.
    5. Чтобы разорвать соединение Bluetooth, удерживайте кнопку Воспроизведение / Пауза в течение 2 секунд.

    Каков радиус действия Bluetooth-соединения?

    Радиус действия Bluetooth-соединения составляет приблизительно 30,5 метров (100 футов) без каких-либо препятствий.

    Звук выходит искаженный. Что происходит и как это исправить?

    Если звук из вашего Helios выходит искаженным, попробуйте уменьшить громкость источника звука.Если после выполнения описанных выше действий по-прежнему возникают проблемы со звуком, вы можете обратиться в службу технической поддержки ION Audio.

    Мой Helios случайным образом выключается. Что происходит?

    Helios выключится через 15 минут, если звук не воспроизводится и светодиоды не горят.

    Дополнительная техническая поддержка

    Независимо от того, являетесь ли вы покупателем или дилером, если у вас уже есть продукт ION Audio или у вас просто есть вопросы перед продажей, команда технической поддержки ION Audio всегда готова помочь!

    Для каждого продукта есть отдельная страница поддержки на веб-сайте, где вы можете найти руководства, спецификации, обновления программного обеспечения, драйверы и руководства по устранению неполадок: www.ionaudio.com

    Перейдите по ссылке ниже, чтобы подключиться к любому из следующих вариантов поддержки: поддержка онлайн-сообщества, поддержка по телефону, поддержка по электронной почте.
    https://www.ionaudio.com/support/

    Acer Predator Helios 300 NH.Q7YAA.001 15,6-дюймовый ноутбук, 2,6 ГГц Intel Co

    перейти к содержанию Предпочтительный
    • Быстрый заказ
    • Мой аккаунт
    • Корзина
    Français Предпочтительный Быстрый заказ Войти Корзина
    1. Дом
    2. > Компьютеры
    3. > Ноутбуки
    4. > Ноутбуки Windows
    5. > Acer Predator Helios 300 NH.

    alexxlab

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *